传染病学论文
摘 要： 目的 观察献血者乙型肝炎病毒 (HBV) 检测中应用核酸检测法 (NAT) 的诊断价值。方法 120份无偿献血合格标本, 分别使用酶联免疫吸附剂试验 (ELISA) 与NAT进行诊断。分析ELISA、NAT检测结果 , 追踪随访NAT呈阳性标本中, 核酸确认为阳性, 但“二对半”检测结果为阴性和核酸确认阴性献血者。结果 120份血液标本中, ELISA检测单试剂阳性2份, 双试剂阴性118份。120份血液标本中, NAT检测阴性105份, 阳性14份, 经NAT确认阳性12份, ELISA确认阳性1份。最终确认阳性的13份标本中, 仅2份ELISA检测为单试剂阳性, 而NAT检测均为阳性。NAT检测呈阳性的15份标本中, 对符合条件的献血者进行追踪随访, ELISA检测阴性转化为阳性2例, 该血样于ELISA窗口期NAT检测发现, NAT检测有1例隐匿性HBV感染。结论 NAT在临床诊断中的灵敏度与特异性较高, 与ELISA存在一定互补性, 在血液筛查中应用可显着降低漏诊发生率, 缩短窗口期, 对确保输血安全意义重大。
关键词： 核酸检测法; 血液标本; 乙肝肝炎病毒;
核酸检测法 (nucleic acid detection, NAT) 可直接用于病毒核酸的检测中, 对于献血者乙型肝炎筛查具有非常重要的作用。实践证明, 这种检测法非常方便、可靠, 近年来在血液筛查中得到了广泛应用, 可准确检出多种因素引发的漏检血液, 大大降低由于输血导致的感染病毒发生率, 为临床血液病毒筛查提供了重要检测手段[1]。本次研究分别利用酶联免疫吸附剂试验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 、NAT检测本站采集的血液, 重点观察NAT用于血液标本中乙肝肝炎病毒 (hepatitis b virus, HBV) 检验中的价值, 现报告如下。
1、 材料与方法
1.1、 材料
选取2015年11月1日～2018年2月28日本血站无偿献血合格标本120份作为研究对象, 均符合《献血者健康检查要求》的相关标准[2], 所有献血者均经干化学法行谷丙转氨酶 (ALT) 检测, 并利用金标试纸法检测乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) , 得到结果均合格。
1.2、 血液采集方法
保留ELISA与ALT、离心NAT样管, 速率3000 r/min, 离心力1600 g, 时间为20 min, 于4℃下储存备用, 48 h内行检测。准确记录好血液采集日期、样品编码等信息资料。获得标本需在2 h内进行处理, 并转至冰箱内, 确保冰箱温度在2～8℃, 2～3 h内转至离心保存, 在24 h内行血清学筛查, 并进行NAT检测。
1.3、 检测方法
全部严格按照操作规程进行各项操作, 所有试剂均确保在有效期内使用, 仪器设备有瑞士哈美顿STAR全自动样仪、BEHRING全自动酶免后处理机、Cobas s201核酸检测系统、COBAS AmpliPrep核酸提取仪及COBAS Taqman核酸扩增检测仪) 。 (1) ELISA检测:每份血液标本进行HBsAg检测时均给予2种ELISA试剂, 并在每批实验中设置阴性对照组、阳性对照组、室内质控品组与空白对照组。检测结果判断标准:样本光密度值与临界值的比值 (S/CO) ≥1为阳性, 该状态下血液检测结果不符合标准;0.5<S/CO<1为灰区, 该状态下血液检测结果不符合标准;S/CO<0.5为阴性, 该状态下血液检测结果符合标准。 (2) NAT检测:利用混样方法检测核酸。在每级混样中设置6个标本, 设定内对照, 设定混合测定阴性为阴性, 对混合测定阳性者进行拆分, 如拆分检测呈阴性则为NAT阴性, 如拆分测定呈阳性, 则为NAT阳性。 (3) 追踪随访:NAT呈阳性标本中, 核酸确认为阳性, 但“二对半”检测结果为阴性和核酸确认阴性献血者应进行追踪随访, 2个月后重新采样。
2 、结果
2.1、 ELISA检测结果
120份血液标本中, ELISA检测单试剂阳性2份, 双试剂阴性118份。见表1。
2.2、 NAT检测结果
120份血液标本中, NAT检测阴性105份, 阳性15份, 经NAT确认阳性12份, ELISA确认阳性1份。最终确认阳性的13份标本中, 仅2份ELISA检测为单试剂阳性, 而NAT检测均为阳性。见表1。
2.3 、追踪随访结果
NAT检测呈阳性的15份标本中, 对符合条件的献血者进行追踪随访, ELISA检测阴性转化为阳性2例, 该血样于ELISA窗口期NAT检测发现, NAT检测有1例隐匿性HBV感染。见表1。
表1 120份血液标本ELISA检测与NAT检测结果 (份)
3、 讨论
HBV病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒均可经过血液传播, 对人类身体健康存在严重威胁, 相关资料显示, 发展中国家采集的血液中, 约5%～20%的血液中包含上述3种病毒[3], 同时, 每年经输血与非安全性注射引发的感染HBV的人数高达1600万人, 并且丙型肝炎感染人数也高达470万人, 艾滋病毒的感染人数也非常高, 约为16万人[4], 严重阻碍着我国经济与社会发展。
HBV是一种通过血液传播的病毒性传染病, 对献血人群进行血液筛查是预防HBV传播的一条重要途径。ELISA是临床诊断HBV使用频率最高的一种方法, 通常性检验指标为HBsAg, 该检测方法具有便宜、快捷等优点, 因此在血液筛查工作中占据着非常重要的地位[5]。但是因为隐匿性HBV、HBV感染窗口期等问题存在, 临床检测中存在较大的HBV漏检风险。NAT可以为血清学诊断方法提供补充, 该检测方法是一种新型分子生物学诊断方法, 主要通过对HBV-DNA含量测定, 快速、直接的反映出HBV感染的具体情况, 其检测结果具有较高的灵敏性, 现在已经在献血者血液病毒感染筛查工作中得到了广泛应用。
输血是否存在安全性, 其风险主要在于被筛查病毒的“窗口期”, 相关资料显示, 经NAT检测可有效减少HBV等“窗口期”, 其减少率可达40%～75%, 大大降低病毒通过输血传播的风险[6]。本次研究NAT呈阳性标本中, 核酸确认为阳性, 但“二对半”检测结果为阴性和核酸确认阴性献血者进行追踪随访, ELISA测定阴性转化为阳性2例, 该血样于ELISA窗口期NAT检测发现, NAT测定共有1例隐匿性HBV感染者, 可见NAT检测在血液筛查中具有非常重要的价值。在NAT检测中, 所用的试剂必须具有比较高的灵敏性和特异性, 并且对实验环境也提出了比较高的要求, 比其他检测方法要求更为严格, 检查过程中使用的设备与试剂要求都比较高, 大大提升了血液检测的成本, 但也加强了血液安全的保障。另外, NAT自身存在一定局限性, 一般如果病毒载量较低时, 利用NAT检测是很难获得准确的结果[7,8]。
综上所述, 在血液筛查中应用NAT检测, 可显着提升血液病毒检出率, 为确保血液安全提供保证, 值得在临床上推广。NAT可以有效缩减“窗口期”, 同时减少通过输血途径传播病毒的风险性, 但是在临床诊断中也会出现漏检标本。在实施NAT时, 应对病毒核酸加以重点关注, 而ELISA则为抗原或抗体, 以上两种检测方法体现的检测原理与方法上存在一定差异, 因此, 这两种检测方法在血液标本检测中不存在重复性, 体现为一定的互补性, 均为血液筛查中非常重要的检测方法。
参考文献
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[8]师延娟.研究核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值.中西医结合心血管病杂志 (电子版) , 2018 (20) :55-56.