分析化学论文
引言
盐酸曲马多（TR）为非吗啡类强效镇痛药，对各种原因造成的剧烈疼痛均具有显着作用[1,2].在合适的剂量下，不会产生呼吸抑制作用，对血流动力学亦无显着影响[3].
控释制剂（controlled-releasepreparation1近零级）从制剂中释放到作用部位而发挥疗效的一类制剂盐酸曲马多制成控释制剂，可有效延长作用时 间，保持较平稳的血药 浓 度降低其 不良反应[4-6].本文以高效液相色谱法测定了自制的盐酸曲马多控释片，并经过方法学考察，可以实现定性鉴别及含量测定[7].
1材料与方法
1.1仪器与试药[8,9]高效液 相 色 谱 仪 （美 国Waters），检 测 器 为UV-2487,工作站为Empower色谱工作站，柱温控制箱（Waters）；紫外可见分光光度计（U-1901北京普析通用）；0.8μm微孔滤膜和0.45μm微孔滤膜（上海医工院）；盐酸曲马多（311004石家庄制药集团华盛制药有限公司）；盐酸曲马多对照品（编号153806744）；甲醇为色谱纯级，其他试剂均为分析纯，盐酸曲马多口服控释片实验室自制.
1.2色谱条件[10,11]高 效 液 相 色 谱 仪：Waters泵：1500系 列HPLC泵；检测器：UV-2487;工作站：Empower色谱工作站；流动相：取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8mL,再加水稀释至1 000mL即得水相，再以水相∶有机相=65∶35加入甲醇，即得[醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）]-甲醇（65∶35）；流速：1.0mL/min;色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱（C18柱）Phenomenex?150×4.60mm 5micro;柱温30℃。
1.3检测波长的测定方法取对照品盐酸曲马多，以流动相为溶剂，制成每1mL中含80μg的溶液，在200~300nm处以紫外可见分光光度计进行扫描，确定检测波长.
1.4定性鉴别采用高效液相色谱法（HPLC）对所制得样品进行定性鉴别.
1.5专属性测定按处方量称取空白辅料45mg入25mL量瓶，加入流动相，在超声波清洗器中超声处理30min,定容后过滤，滤液即为空白辅料样品溶液.取盐酸曲马多对照品50mg,精密称定，置于25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，得对照品储备液.用移液管吸取对照品储备液2.5mL入10mL量瓶，用流动相定容即得对照品溶液.分别对空白辅料样品溶液和对照品溶液进样20μl,得图谱，判断空白辅料对含量测定是否有干扰.
1.6精密度测定取1.3中盐酸曲马多对照品溶液，连续进样5次，每次20μl,得图谱及峰面积，求RSD值，判断仪器精密度是否良好.
1.7线性测定分别吸取1.3中对照品储备液1.5、2.0、2.5、3.0和3.5mL入10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得对照品系列溶液.分别取对照品系列溶液20μl进样，每个样重复一次，得图谱及峰面积，以每个样品的平均峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程、标准曲线及相关系数r.
1.8稳定性测定取1.3中盐酸曲马多对照品溶液，分别在0、2、4、6及8h进样20μl,每次重复进样一次，得图谱及峰面积.求RSD值，判断盐酸曲马多在8h内是否稳定.
1.9回收率测定精密称取10mg、12.5mg及15mg的盐酸曲马多对照品各三份，分别倒入25mL的量瓶中，加入处方量的辅料、适量的流动相分散均匀后，超声振荡30min后加流动相定容至刻度，摇匀后过滤，取续滤液20μl进样，测定峰面积并计算回收率.
1.10重复性测定取制得的盐酸曲马多控释片20片，研碎后取适量（相当于盐酸曲马多12.5mg），用流动相分散均匀后入25mL容量瓶，超声处理30min后用流动相定容至刻度，摇匀后过滤，取续滤液20μl进样.连续测定五次样品的含量.
1.11含量测定取制得的盐酸曲马多控释片20片，研碎后取适量（相当于盐酸曲马多12.5mg），用流动相分散均匀后入25mL容量瓶中，超声处理30min后用流动相定容至刻度，摇匀后过滤，取续滤液20μl进样.测定三批样品的含量，计算，得到每片含量.
2 结果与讨论
2.1检测波长的确定[12]采用紫外分光光度计扫描盐酸曲马多的流动相溶液，结果如图1所示.
可以发现，样品分别在229nm和271nm波长处有最大吸收峰，该检测器是紫外检测器，故229nm处可能是溶剂峰的影响，盐酸曲马多的流动相溶液和水溶液在271nm处均有最大吸收，所以选择271nm作为高效液相色谱仪的紫外检测波长
2.2专属性测定[13,14]对所制得盐酸曲马多样品进行HPLC测定，结果如图2所示.由图2（a）和图2（b）可知，HPLC图谱中的样品出峰时间与对照品出峰时间一致，TR≈8.0min.同时，与图2（c）对比发现，盐酸曲马多的保留时间约是8min,而辅料在8min附近没有峰，所以辅料对盐酸曲马多的含量测定没有干扰。
2.3精密度测定对盐酸曲马多的HPLC测定方法的精密度进行考察，结果如表1所示.可以发现，6个平行样品的峰面积RSD值为0.72%,表明该方法的精密度好.
2.4线性测定对盐酸曲马多的HPLC测定方法的线性进行考察，测得数据作图，如图3所示.经过计算可知，盐酸曲马多溶液0.3~0.7mg/mL浓度范围内线性关系良好.回归方程为A= 5 845 502C+83705,相关系数r=0.999 9.
2.5稳定性测定对盐酸曲马多的HPLC测定方法的稳定性进行研究，实验结果如表2所示.可以发现，检测结果的波动幅度较小（RSD=0.70%），盐酸曲马多溶液在8h内稳定，即在测定时间范围内稳定性较好.
2.6回收率测定[15]对盐酸曲马多的HPLC测定方法的回收率进行研究，结果如表3所示.可以发现，样品的回收率在98% ~102%,RSD值 为0.99%,因 此，采 用HPLC法测定盐酸曲马多含量的方法是准确可靠的。
2.7重复性测定对盐酸曲马多的HPLC测定方法的重复性进行研究，得到RSD=1.18%,该方法的重复性较好，且结果准确.如表4所示.
2.8含量测定按照1.11项方法制备供试品及1.2项色谱条件，对盐酸曲马多含量测定，测得数据经计算得到每片含量，且RSD=0.24%.
如表5所示.按上述样品处理方法和色谱条件测定，对盐酸曲马多标准品进行HPLC测定，保留时间为7.99min,如图2（b）所示.所制得盐酸曲马多样品进样得，保留时间为8.02min如图2（a）所示.色谱行为一致，且对测定无干扰.
3 结论
本文建立了盐酸曲马多口服控释片的HPLC检测方法.通过紫外测定确定了HPLC法的检测波长，排出溶剂峰影响故在271nm有较强吸收，提高了检出效果.选择流动相[醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）]-甲醇（65∶35），分离度大于2且时间短.同时增加了空白辅料的色谱图，防止辅料干扰结果.试验研究了HPLC测定方法的专属性、精密度、线性、稳定性、回收率和重复性.试验结果表明，选用HPLC法对盐酸曲马多口服控释片进行检测，准确高效，可满足含量测定的需要.【图略】
参考文献
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