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对Allen's打击法制备动物脊髓损伤模型的临床护理

来源:未知 作者:学术堂
发布于:2016-01-13 共3319字
摘要

  脊髓损伤 (spinal cord injury,SCI) 所造成的截瘫等严重功能障碍给患者本人、社会和家庭带来了巨大的经济损失与负担,也是临床上常见的治疗比较棘手的骨科创伤疾患。临床相似性、可调控性和可重复性常作为理想的 SCI 动物模型的标准[1].建立标准的动物 SCI 模型成为了研究脊髓损伤的前提基础,因 Allen's[2]打击法模型制作过程与临床发病过程相似度较高,所以被广泛应用于挫伤型 SCI 的动物实验[3].而制备后使其长时间的存活,保持模型的稳定性,提高模型样本量成为实验顺利开展的前提基础。为了使 SCI 模型具有较好的稳定性,本实验应用 Allen's 打击法制备大鼠动物 SCI 模型,两组给予不同的术后护理,观察两组大鼠死亡率和并发症,分析有效的护理对造模后大鼠的作用,并分析大鼠的死亡原因,为后期治疗 SCI 提供前提条件及实验数据,现报道如下。

  1 材料与方法。

  1.1 实验动物与分组。

  1.1.1 实验动物 清洁级成年 SD 大鼠 40 只,雌雄不限,体重 (200±20)g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供 [ 生产许可证:SCXK( 鄂 )2010-0007].

  1.1.2 实验分组与 SCI 模型的建立 40 只大鼠,随机分成两组 (A 组普通饲养组和 B 组饲养护理组 ),每组 20 只,适应性喂养 1 周后准备造模。用 Allen's 法 (10 g 重物 5 cm高度垂直打击 ) 建立挫伤型 SCI 大鼠模型。以 T10 棘突为中心切开背部正中 T9~11棘突部皮肤,刀柄分离棘突两侧肌肉,暴露棘突及椎弓板,咬骨钳咬除棘突及椎板,暴露脊髓,用 Allen's 打击器对准 T10节段脊髓垂直打击,打击高度 5 cm,重量 10 g,直径 2 mm,打击成功可见大鼠尾巴出现痉挛性摆动,双下肢躯体回缩样扑动,呈迟缓性瘫痪。

  1.2 饲养及术后护理方法。

  1.2.1 A 组 本组内大鼠术后每只动物肌肉注射青霉素16 万 U/d,连续 1 周。每日定量供应充足饲料和水,在安静、通风、清洁环境下分笼饲养,辅助排尿,每日一次更换鼠笼内垫料,保持鼠笼内干燥、清洁。

  1.2.2 B 组 本组内大鼠除以上普通饲养外并加强以下护理:(1) 红外线照射:术后创口红外线照射治疗,2 次 /d,1 h/ 次;(2) 辅助排尿:大鼠每日辅助排尿至少 2 次,早晚各一次,排尿时,左手撑起大鼠腹部,右手触摸找到充盈的膀胱,按出膀胱底部,自上而下轻柔挤压,逼迫尿液排出,注意轻柔,避免过力导致膀胱破裂,尿道阻塞者性膀胱穿刺 (10 ml 注射器针头穿刺膀胱抽出潴留尿液 );(3) 辅助运动:大鼠每日辅助运动 1 次,每次半小时。

  辅助运动时,先予大鼠腹部按摩 2~3 min,后将大鼠置于斜坡栏上,一手将大鼠尾巴拎高过大鼠头部,促使其爬坡,增强运动;(4) 防止褥疮:挤压膀胱排尿后,及时清理会阴或包皮,使其保持干燥,每日检查 2 次大鼠,若肢体有被尿液浸湿及时用温肥皂水清洗,并用电吹风吹干。

  1.3 观察指标。

  1.3.1 BBB 功能评分 在模型制备手术前 1 d 及术后 1 d、术后 1 周、2 周、4 周行 BBB 评分[4]

  用以评价术后运动功能。采用双人双盲法。取 2 个测评均值作为每次记录值。

  1.3.2 模型情况 (1) 模型存在的并发症情况:模型制备后开始至术后 4 周期间,记录大鼠存在的并发症情况;(2) 模型死亡时间:模型制备后开始记录各组内死亡大鼠的死亡时间,至术后 4 周为止。

  1.4 统计学处理。

  采用 SPSS 17.0 统计软件对所得数据进行统计处理,计量资料用均数 ± 标准差 (x-±s) 表示,若不满足正态性及方差齐性采用秩和检验;计数资料比较采用 字2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

  2 结果。

  2.1 模型发生并发症情况。

  造模后,大鼠均为双下肢瘫痪,无活动,损伤平面以下肌张力降低,对针刺无明显反应;术后 1 周,大鼠活动少,进食饮水减少,尿潴留现象普遍存在,伴有血尿、脓尿、脓血尿及腹部胀气,大便困难,少数出现尿失禁,存在肢体自噬、伤口感染、褥疮、慢性消耗性死亡等并发症,也有不明原因的突然死亡,详见表 1.

  2.2 BBB 评分评价。

  造模 4 周后共获得 18 只模型大鼠的完整 BBB 评分数据,A 组与 B 组大鼠 BBB 评分比较,差异无统计学意义 (P>0.05)。造模后 1、2、4 周各组大鼠的 BBB 评分组内比较差异均无统计学意义 (P>0.05),模型制备前 1 d 分别与模型制备后 1 d、1 周、2 周、4 周各组大鼠的 BBB评分组内比较差异均有统计学意义 (P<0.05),模型制备后1 d 分别与 1、2、4 d 各组大鼠的 BBB 评分组内比较差异均有统计学意义 (P<0.05)。详见表 2.

  2.3 两组大鼠死亡时间比较。

  大鼠 SCI 模型制备后,A 组大鼠共死亡 16 只,存活 4 只;B 组大鼠共死亡 6 只,存活 14 只;A 组大鼠总死亡数较 B 组多,且 A 组死亡时间在在一周左右出现密集区,B 组死亡时间无明显密集区。A 组大鼠死亡率为80%,B 组大鼠死亡率为 30%,A 组大鼠死亡率明显高于B 组,两组比较差异有统计学意义 (P<0.05),详见表 3.

  3 讨论。

  动物模型的科学性和稳定性是评价治疗措施的重要前提条件,本实验运用 Allen's 打击法制备 SCI 大鼠动物模型,其制作过程简单且与临床 SCI 的还原度相对较高,具有一定的科学性[5-6],BBB 评分法为目前公认较为准确、可靠的运动功能评价手段[7].各组模型在造模前及造模后的评分组内比较差异有统计学意义 (P<0.05),表明 SCI打击有效。B 组经过加强护理饲养,模型剔除数量明显减少,差异有统计学意义 (P<0.05),表明加强饲养护理有助于维持模型稳定性,防止模型丢失率。死亡时间情况统计表显示加强护理组未见明显死亡时间密集区,A 组在造模后 1 周出现明显死亡时间密集区。全部存活下来且能在实验周期内持续获取观察指标的实验动物,从运动行为学角度,可以认为 SCI 模型造模成功且稳定。

  有关文献研究表明 SCI 实验动物模型 1 周内的失死亡率可高达 50%~70%[8-9].本研究结果提示,可以通过以下相应措施保持 SCI 模型的稳定性,减少模型大鼠并发症和死亡率:用于 SCI 的实验动物应选用体质较好,耐手术能力强的大鼠为实验动物;造模时规范手术方案及手术时间,减少因手术创伤引起的死亡;因泌尿系统破坏是导致 SCI 模型丢失的最主要原因,所以着重注意治疗尿路系统疾病,适量使用抗生素并定期予以更换种类,人工辅助排尿手法柔和适中,定时适度排尿,切忌粗暴过力,以免尿道水肿及外生殖器水肿外翻,保持外阴及肢体干洁,控制饲养密度,大鼠体型虽小,但因大鼠厮打自噬它噬情况不在少数,所以笔者认为若条件允许尽量实行单笼饲养,尽可能的减少标本丢失,增强下肢及腹部被动运动,保持大便通畅,也可减少下肢水肿及褥疮引起的模型丢失。提高模型成型质量、保证模型存活数量、保持模型稳定性对实验的成功至关重要。因此要从取材、建模、护理、饲养方面详细计划和保证实施质量,才能为实验的后期研究提供前提条件。

  综上所述,本实验展示并陈述了 SCI 模型造模过程中可能出现的一系列模型丢失情况,以及运用相应饲养护理措施得以保持 SCI 模型的稳定性,增加样本量,为进行 SCI 机制的相关实验研究及治疗创造了条件。

  参 考 文 献。

  [1] 肖年来,姚共和 . 急性脊髓损伤模型的建立 [J]. 中国中医骨伤科杂志,1999,7(6):49-51.

  [2] Allen A R.Surgery for experimental lesions of sponal cord equivalentto crush injury of fracture dislocation of spinal column:a preliminaryreport[J].JAMA,1911,57(2):878-880.

  [3] 杨迎暴,英杰 . 脊髓损伤模型的建立及其评价标准 [J]. 中华创伤杂志,2002,8(3):187-190.

  [4] Basso D M,Beattie M S,Bresnahan J C.A sensitive and reliablelocomotor rating scale for open filed testing in rats[J].Neurotrauma,1995,12(1):1-21.

  [5] 李一帆,陈东,张大威,等 . 急性大鼠脊髓损伤 Allen's 法模型的改良及电生理评价 [J]. 中国实验诊断学,2010,14(8):1169-1172.

  [6] 熊春翔,宗少晖,曾高峰,等 . 大鼠 Allen's 脊髓损伤模型的建立及评价 [J]. 广西医科大学学报,2011,28(2):215-217.

  [7] 吕静 . 大鼠脊髓损伤模型的建立及行为学评分 [D]. 长沙:中南大学,2011.

  [8] Roy F D,Yang J F,Gorassini M A.Afferent regulation of legmotorcortex excit-ability after incomplete spinal cord injury[J].Neurophysiol,2010,103(4):2222-2233.

  [9] 赵久晗,张朝东 . 骨髓间质干细胞对急性脊髓损伤大鼠模型神经功能修复的影响 [J]. 中国全科医学,2007,6(11):894-896.

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