对Allen's打击法制备动物脊髓损伤模型的临床护理

　　脊髓损伤 （spinal cord injury,SCI） 所造成的截瘫等严重功能障碍给患者本人、社会和家庭带来了巨大的经济损失与负担，也是临床上常见的治疗比较棘手的骨科创伤疾患。临床相似性、可调控性和可重复性常作为理想的 SCI 动物模型的标准[1].建立标准的动物 SCI 模型成为了研究脊髓损伤的前提基础，因 Allen's[2]打击法模型制作过程与临床发病过程相似度较高，所以被广泛应用于挫伤型 SCI 的动物实验[3].而制备后使其长时间的存活，保持模型的稳定性，提高模型样本量成为实验顺利开展的前提基础。为了使 SCI 模型具有较好的稳定性，本实验应用 Allen's 打击法制备大鼠动物 SCI 模型，两组给予不同的术后护理，观察两组大鼠死亡率和并发症，分析有效的护理对造模后大鼠的作用，并分析大鼠的死亡原因，为后期治疗 SCI 提供前提条件及实验数据，现报道如下。

　　1 材料与方法。

　　1.1 实验动物与分组。

　　1.1.1 实验动物 清洁级成年 SD 大鼠 40 只，雌雄不限，体重 （200±20）g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供 [ 生产许可证：SCXK（ 鄂 ）2010-0007].

　　1.1.2 实验分组与 SCI 模型的建立 40 只大鼠，随机分成两组 （A 组普通饲养组和 B 组饲养护理组 ），每组 20 只，适应性喂养 1 周后准备造模。用 Allen's 法 （10 g 重物 5 cm高度垂直打击 ） 建立挫伤型 SCI 大鼠模型。以 T10 棘突为中心切开背部正中 T9~11棘突部皮肤，刀柄分离棘突两侧肌肉，暴露棘突及椎弓板，咬骨钳咬除棘突及椎板，暴露脊髓，用 Allen's 打击器对准 T10节段脊髓垂直打击，打击高度 5 cm,重量 10 g,直径 2 mm,打击成功可见大鼠尾巴出现痉挛性摆动，双下肢躯体回缩样扑动，呈迟缓性瘫痪。

　　1.2 饲养及术后护理方法。

　　1.2.1 A 组 本组内大鼠术后每只动物肌肉注射青霉素16 万 U/d,连续 1 周。每日定量供应充足饲料和水，在安静、通风、清洁环境下分笼饲养，辅助排尿，每日一次更换鼠笼内垫料，保持鼠笼内干燥、清洁。

　　1.2.2 B 组 本组内大鼠除以上普通饲养外并加强以下护理：（1） 红外线照射：术后创口红外线照射治疗，2 次 /d,1 h/ 次；（2） 辅助排尿：大鼠每日辅助排尿至少 2 次，早晚各一次，排尿时，左手撑起大鼠腹部，右手触摸找到充盈的膀胱，按出膀胱底部，自上而下轻柔挤压，逼迫尿液排出，注意轻柔，避免过力导致膀胱破裂，尿道阻塞者性膀胱穿刺 （10 ml 注射器针头穿刺膀胱抽出潴留尿液 ）；（3） 辅助运动：大鼠每日辅助运动 1 次，每次半小时。

　　辅助运动时，先予大鼠腹部按摩 2~3 min,后将大鼠置于斜坡栏上，一手将大鼠尾巴拎高过大鼠头部，促使其爬坡，增强运动；（4） 防止褥疮：挤压膀胱排尿后，及时清理会阴或包皮，使其保持干燥，每日检查 2 次大鼠，若肢体有被尿液浸湿及时用温肥皂水清洗，并用电吹风吹干。

　　1.3 观察指标。

　　1.3.1 BBB 功能评分 在模型制备手术前 1 d 及术后 1 d、术后 1 周、2 周、4 周行 BBB 评分[4]

　　用以评价术后运动功能。采用双人双盲法。取 2 个测评均值作为每次记录值。

　　1.3.2 模型情况 （1） 模型存在的并发症情况：模型制备后开始至术后 4 周期间，记录大鼠存在的并发症情况；（2） 模型死亡时间：模型制备后开始记录各组内死亡大鼠的死亡时间，至术后 4 周为止。

　　1.4 统计学处理。

　　采用 SPSS 17.0 统计软件对所得数据进行统计处理，计量资料用均数 ± 标准差 （x-±s） 表示，若不满足正态性及方差齐性采用秩和检验；计数资料比较采用 字2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果。

　　2.1 模型发生并发症情况。

　　造模后，大鼠均为双下肢瘫痪，无活动，损伤平面以下肌张力降低，对针刺无明显反应；术后 1 周，大鼠活动少，进食饮水减少，尿潴留现象普遍存在，伴有血尿、脓尿、脓血尿及腹部胀气，大便困难，少数出现尿失禁，存在肢体自噬、伤口感染、褥疮、慢性消耗性死亡等并发症，也有不明原因的突然死亡，详见表 1.

　　2.2 BBB 评分评价。

　　造模 4 周后共获得 18 只模型大鼠的完整 BBB 评分数据，A 组与 B 组大鼠 BBB 评分比较，差异无统计学意义 （P>0.05）。造模后 1、2、4 周各组大鼠的 BBB 评分组内比较差异均无统计学意义 （P>0.05），模型制备前 1 d 分别与模型制备后 1 d、1 周、2 周、4 周各组大鼠的 BBB评分组内比较差异均有统计学意义 （P<0.05），模型制备后1 d 分别与 1、2、4 d 各组大鼠的 BBB 评分组内比较差异均有统计学意义 （P<0.05）。详见表 2.

　　2.3 两组大鼠死亡时间比较。

　　大鼠 SCI 模型制备后，A 组大鼠共死亡 16 只，存活 4 只；B 组大鼠共死亡 6 只，存活 14 只；A 组大鼠总死亡数较 B 组多，且 A 组死亡时间在在一周左右出现密集区，B 组死亡时间无明显密集区。A 组大鼠死亡率为80%,B 组大鼠死亡率为 30%,A 组大鼠死亡率明显高于B 组，两组比较差异有统计学意义 （P<0.05），详见表 3.

　　3 讨论。

　　动物模型的科学性和稳定性是评价治疗措施的重要前提条件，本实验运用 Allen's 打击法制备 SCI 大鼠动物模型，其制作过程简单且与临床 SCI 的还原度相对较高，具有一定的科学性[5-6],BBB 评分法为目前公认较为准确、可靠的运动功能评价手段[7].各组模型在造模前及造模后的评分组内比较差异有统计学意义 （P<0.05），表明 SCI打击有效。B 组经过加强护理饲养，模型剔除数量明显减少，差异有统计学意义 （P<0.05），表明加强饲养护理有助于维持模型稳定性，防止模型丢失率。死亡时间情况统计表显示加强护理组未见明显死亡时间密集区，A 组在造模后 1 周出现明显死亡时间密集区。全部存活下来且能在实验周期内持续获取观察指标的实验动物，从运动行为学角度，可以认为 SCI 模型造模成功且稳定。

　　有关文献研究表明 SCI 实验动物模型 1 周内的失死亡率可高达 50%~70%[8-9].本研究结果提示，可以通过以下相应措施保持 SCI 模型的稳定性，减少模型大鼠并发症和死亡率：用于 SCI 的实验动物应选用体质较好，耐手术能力强的大鼠为实验动物；造模时规范手术方案及手术时间，减少因手术创伤引起的死亡；因泌尿系统破坏是导致 SCI 模型丢失的最主要原因，所以着重注意治疗尿路系统疾病，适量使用抗生素并定期予以更换种类，人工辅助排尿手法柔和适中，定时适度排尿，切忌粗暴过力，以免尿道水肿及外生殖器水肿外翻，保持外阴及肢体干洁，控制饲养密度，大鼠体型虽小，但因大鼠厮打自噬它噬情况不在少数，所以笔者认为若条件允许尽量实行单笼饲养，尽可能的减少标本丢失，增强下肢及腹部被动运动，保持大便通畅，也可减少下肢水肿及褥疮引起的模型丢失。提高模型成型质量、保证模型存活数量、保持模型稳定性对实验的成功至关重要。因此要从取材、建模、护理、饲养方面详细计划和保证实施质量，才能为实验的后期研究提供前提条件。

　　综上所述，本实验展示并陈述了 SCI 模型造模过程中可能出现的一系列模型丢失情况，以及运用相应饲养护理措施得以保持 SCI 模型的稳定性，增加样本量，为进行 SCI 机制的相关实验研究及治疗创造了条件。

　　参 考 文 献。

　　[1] 肖年来，姚共和 . 急性脊髓损伤模型的建立 [J]. 中国中医骨伤科杂志，1999,7（6）：49-51.

　　[2] Allen A R.Surgery for experimental lesions of sponal cord equivalentto crush injury of fracture dislocation of spinal column:a preliminaryreport[J].JAMA,1911,57（2）：878-880.

　　[3] 杨迎暴，英杰 . 脊髓损伤模型的建立及其评价标准 [J]. 中华创伤杂志，2002,8（3）：187-190.

　　[4] Basso D M,Beattie M S,Bresnahan J C.A sensitive and reliablelocomotor rating scale for open filed testing in rats[J].Neurotrauma,1995,12（1）：1-21.

　　[5] 李一帆，陈东，张大威，等 . 急性大鼠脊髓损伤 Allen's 法模型的改良及电生理评价 [J]. 中国实验诊断学，2010,14（8）：1169-1172.

　　[6] 熊春翔，宗少晖，曾高峰，等 . 大鼠 Allen's 脊髓损伤模型的建立及评价 [J]. 广西医科大学学报，2011,28（2）：215-217.

　　[7] 吕静 . 大鼠脊髓损伤模型的建立及行为学评分 [D]. 长沙：中南大学，2011.

　　[8] Roy F D,Yang J F,Gorassini M A.Afferent regulation of legmotorcortex excit-ability after incomplete spinal cord injury[J].Neurophysiol,2010,103（4）：2222-2233.

　　[9] 赵久晗，张朝东 . 骨髓间质干细胞对急性脊髓损伤大鼠模型神经功能修复的影响 [J]. 中国全科医学，2007,6（11）：894-896.