口腔鳞状细胞癌中SATB2、NANOG和OCT4的表达及价值

　　口腔鳞状细胞癌（ oral squamous cell carcinoma,OSCC） 是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。OSCC 的预后不佳，在现行的治疗方法下，有超过 50% 的口腔鳞癌患者在5 年内因癌或其并发症死亡[1].研究发现，肿瘤组织中有部分细胞与胚胎干细胞极为相似，具有自我更新的生物学特性，与口腔癌的侵袭性生长、颈淋巴结转移等关系密切，被称为肿瘤干细胞（ cancer stem cell,CSC） .在恶性肿瘤的发生发展过程中，干细胞相关转录调节因子发挥了重要的调节作用。

　　特异 AT 序列蛋白 2（ special AT-rich sequencebinding protein 2,SATB2） 是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白，在调控胚胎干细胞分化及成骨细胞分化中充当分子节点[2].同源域转录因子（ octamer-binding transcription factor,OCT4）和 NANOG,在细胞分化中起到关键性作用。OCT4与 NANOG 联合 SOX2 等编码的转录因子对于维持各自干细胞类型具有极其重要的作用，是囊胚的 3个谱系分化的关键。新的研究发现，人类表达 OCT4与 NANOG 基因的成体干细胞可能是癌变启动的靶细胞之一[3].NANOG 不仅是干细胞多能性的重要调节因子，而且在肿瘤发生过程中扮演重要角色[4].OCT4 是一种 8 聚体结合转录因子，主要作用是维持干细胞的多潜能性和自我更新[5 -6].新近的研究证实 OCT4 在食道癌、膀胱癌、肺癌和头颈部癌等实体肿瘤中异常高表达，与癌肿的发生发展及预后关系密切[7 -12].

　　本研究检测 SATB2、NANOG、OCT4 在口腔鳞癌组织中的表达情况，探讨这 3 种干细胞转录调控因子与口腔鳞癌发生及相关临床病理特征的关系，为口腔鳞癌肿瘤干细胞研究提供参考。

　　1 材料与方法。

　　1. 1 口腔鳞癌组织标本。

　　选取南京医科大学附属口腔医院口腔颌面外科2011 年-2013 年 48 例口腔鳞癌石蜡标本，入选标准： 原发口腔癌，术前未接受放、化疗，原发灶扩大切除术和/或颈淋巴清扫术，术后常规病理证实为口腔鳞状细胞癌。根据 WHO TNM 分期标准和病理学分级标准确定患者的临床分期、病理分级等。其中男29 例，女 19 例，平均年龄 53. 5 岁（ 39 ~ 79 岁） .鳞癌分级中Ⅰ级 28 例，Ⅱ级 19 例，Ⅱ ~ Ⅲ级 1 例，局部浸润 34 例，无浸润 14 例，淋巴结转移者 20 例，无淋巴结转移 28 例，TNM 分期： Ⅰ ~ Ⅱ期 18 例，Ⅲ ~Ⅳ期 30 例。16 例正常组织标本取自非肿瘤部分，常规病理证实为口腔正常黏膜。

　　1. 2 免疫组织化学染色。

　　1. 2. 1 试剂 兔抗人 Satb2 多克隆抗体（ 北京博奥森公司） ,鼠抗人 OCT4（ C - 10） 单克隆抗体（ Santa-Cruzsc 5279 ） ,羊抗人 Nanog 多克隆抗体 （ Santa-Cruzsc - 30331 SP） ,二抗试剂盒（ 北京中杉金桥生物技术有限公司） ,DAB 显色试剂盒（ 福州迈新生物技术开发有限公司） .

　　1. 2. 2 免疫组织化学染色 标本经切片 （ 5 μm）后，常规二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化，3% H2O2封闭10 min,微波法抗原修复，经 5% 正常山羊血清封闭20 min,滴加一抗（ 1∶ 200） ,4 ℃ 过夜。过夜后，根据一抗不同分别室温下滴加二抗 20 min,PBS 充分洗涤后 DAB 显色。复染后脱水透明封片镜检。用PBS 缓冲液代替一抗做空白对照。

　　1. 2. 3 阳性判定 以肿瘤细胞胞核出现棕黄色染色颗粒为阳性细胞。双盲评价染色切片。采用半定量积分法判断评价染色结果，即染色强度和阳性细胞的（ 以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性） 比例计分判定[13].染色强度定义为： 0 - 无着色； 1 - 浅棕黄色颗粒； 2 - 着棕黄色； 3 - 着色呈深棕色。通过随机计数 5 个高倍镜视野的各 200 个肿瘤细胞，阳性细胞比例（ 百分比） 计分定义为 1: < 10%; 2: 11%~40% ; 3: 41% ~ 60% ; 4: > 60% .免疫组化积分 = 染色强度 + 阳性细胞比例计分，< 3 分为阴性，≥3 为阳性。

　　1. 3 统计学分析统计学分析应用 SPSS 17. 0,采用 χ2检验对表达水平与患者的临床病理因素行统计分析（ α =0. 05） .