酒精性肝损伤是指由于过量饮酒导致的肝脏损伤,是临床常见的肝病之一。包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化及酒精性肝硬变,严重影响人们的生活质量,并且造成巨大的经济损失。近年来,随着人们生活水平的提高,生活模式的转变,酒精性肝病的发病呈逐年上升的趋势,我国的酒精性肝损伤引起的酒精性肝病已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。现代医学治疗本病主要以戒酒、营养支持及预防并发症为主,目前尚无特效药物。因此,寻找一种安全有效的解酒保肝药物已成为目前研究的热点。
本文研究的药物益肝颗粒是本院院内制剂,通过检测血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,肝组织匀浆中测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察益肝颗粒对酒精性肝损伤大鼠模型是否具有保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验
动物选用健康SD大鼠50只,雌雄各半,体重(200±20)g,SPF级,由辽宁长生生物技术有限公司提供,动物许可证号:SCXK2010-0001。
1.1.2 实验药物
茵栀黄颗粒,山东鲁南厚普制药有限公司,药物组成:茵陈、栀子、黄芩、金银花。批准文号:国药准字Z20030028;益肝颗粒,辽宁中医药大学附属第二医院制备,药物组成:茵陈、大黄、赤芍、茯苓、五味子。批准文号:辽药制字Z05010122。
1.2 方法
1.2.1 动物分组
大鼠适应性喂养7d后,以适应实验室环境,尾静脉采血,检测血清ALT、AST水平,以排除非健康因素的影响。根据体重将符合条件的大鼠随机分为正常组、模型组、益肝颗粒低剂量组、益肝颗粒高剂量组、茵栀黄颗粒组,各10只。
1.2.2 动物造模方法
采用白酒灌胃法复制大鼠急性酒精性肝损伤模型,造模与给药同时进行。正常组给予蒸馏水等量灌胃。模型组给予56度白酒7ml/(kg·次),2次/d,时间间隔4h,第1次白酒灌胃1h后给予蒸馏水等量灌胃。益肝颗粒低剂量组给予56度白酒7ml/(kg·次),2次/d,时间间隔4h。第1次白酒灌胃1h后给予浓度为0.39g/ml益肝颗粒水溶液,7ml/(kg·次),1次/d。益肝颗粒高剂量组给予56度白酒7ml/(kg·次),2次/d,时间间隔4h。第1次白酒灌胃1h后给予浓度为0.78g/ml益肝颗粒水溶液,7ml/(kg·次),1次/d。茵栀黄颗粒组给予56度白酒7ml/(kg·次),2次/d,时间间隔4h。第1次白酒灌胃1h后给予浓度为0.012g/ml的茵栀黄颗粒水溶液,7ml/(kg·次),1次/d。实验时间持续28d,第29天处死动物取材。
1.2.3 指标检测实验
各组分别于第29天取材,取材前一天各组实验大鼠禁食不禁水12h,大鼠腹腔麻醉后,剖开腹腔,腹主动脉取血4ml,所得血清按试剂盒说明测定血清ALT、AST、GGT水平。采用免疫放射法测定TNF-α水平。摘取肝脏进行组织匀浆,检测肝组织匀浆中MDA、SOD活性。
1.3 统计学处理方法
统计数据应用SPSS15.0统计软件,采用单因素方差分析,结果以x珚±s表示。
2 结果
2.1 各组大鼠一般情况
正常组大鼠皮毛光泽,行动灵活,食量及大便正常。模型组及各用药组大鼠灌服酒精后,开始呼吸心跳加快,活跃兴奋,约5~10min出现行走不稳,动作迟缓,甚者醉倒,约1h恢复常态;益肝颗粒高、低剂量组饮食基本接近正常组,毛色暗淡,毛质柔软洁净,恢复常态时间相对较短,大便有时不成形;茵栀黄颗粒组大鼠灌胃后出现醉酒状态,精神状态基本正常,毛色欠光泽,饮食、二便基本正常。实验过程中,模型组1只大鼠因灌胃误呛入肺而导致死亡。
2.2 各组大鼠血清ALT、AST、GGT及TNF-α水平的比较结果见表1
2.3 各组大鼠肝组织MDA、SOD活性的比较结果见表2
3 讨论
酒精性肝损伤在祖国医学中归属于“胁痛”“酒癖”“酒疸”“肝着”等范畴,饮酒过度,损伤肝脏是其根本原因,气滞、痰阻、水停、血瘀、阴阳虚损等为疾病发展过程中不同的病理阶段,王肯堂《证治准绳》认为:“酒之为物,气热而质湿”,少量饮酒可以驱寒散邪,舒筋活血,而长期过量饮酒,就会使湿热瘀积体内,形成湿热毒邪,日久可以损伤肝、脾、肾三脏。
本病病位在肝,病机为脾失健运、肝失疏泄,气血痰瘀结于胁下。湿热因素在疾病的发展过程中起关键作用。清热利湿是治疗疾病的根本。益肝颗粒由茵陈、大黄、赤芍、茯苓、五味子组成,具有疏肝利胆,清热利湿作用,其中茵陈为君药,现代药理学研究证实茵陈具有保护肝细胞膜,促进肝细胞再生,改善肝脏微循环,增加肝脏解毒功效,同时茵陈还具有利胆和调节免疫的作用。大黄为臣,大黄具有泻下、解毒、凉血、活血、退黄等功效,可以阻断TNF-α对肝细胞 毒性作用,改善肝脏微循环,增加肝脏 血流量。同时大黄清热泻下,荡涤肠胃,可以加速酒精排出体外,减少酒精在体内的吸收,与茵陈合用可以治疗湿热蕴结之证。茯苓、赤芍、五味子共为佐药,茯苓可以利水渗湿,健脾宁心,脾健则湿化。同时体现了中医“见肝之病,当先实脾”观点。赤芍凉血活血,化瘀止痛,柔肝软坚,可以减低血小板聚集,降低瘦素水平、改善胰岛素抵抗。五味子酸甘化阴入肝血,清利湿热而不伤阴,可以显著降低酒精性肝损伤所引起的ALT、AST活性,抑制MDA的升高,减轻酒精对肝脏的损伤。
TNF-α是体内重要的致炎因子,主要位于肝细胞的胞质内,安红姬等研究发现在大鼠急性酒精性肝损伤模型组不同阶段,TNF-α表达的强度均高于对照组;ALT、AST是体内重要的肝酶,存在于肝细胞质内,在肝细胞受到破坏时,体内ALT、AST均有不同程度升高,是肝细胞损伤的最敏感的指标;MDA是参与氧化应激反应的相关因子,MDA的含量体现的是肝脏脂质过氧化水平;SOD是清除氧自由基的因子,其活性在一定程度上体现了细胞抗氧化、清除氧自由基的能力。通过本研究发现,益肝颗粒可以减少AST释放,降低ALT、GGT的生成;维持肝脏促氧化系统与抗氧化系统的动态平衡,减少脂质过氧化反应的发生,减少MDA的含量,降低肝脏内氧自由基水平,增加肝脏内SOD活性,提高其含量,加速清除氧自由基;益肝颗粒可以减少内毒素的产生,阻断TNF-α的生成,减轻由于TNF-α释放激起的一系列炎性反应,从而减少细胞脂肪变性,减少肝脏细胞坏死,降低肝细胞炎性浸润,起到防治酒精性肝损伤的目的。说明益肝颗粒对酒精引起的肝损伤有一定的保护作用,其作用优于茵栀黄颗粒组。
其中,益肝颗粒高剂量组效果最佳,提示本药治疗效果与剂量具有一定相关性。
参考文献
[1] 鲁晓岚,陶明,罗金燕,等.饮酒与肝病流行病学调查[J].中华肝脏病杂志,2002,10(6):467-468.
[2] 李忠.27例脂肪肝的中医论治[J].青海医药杂志,2008,38(9):84-85.
[3] 孟繁钦,吴宜艳,雷涛,等.茵陈的药理作用及临床应用进展[J].牡丹江医学院学报,2009,30(1):46-48.
[4] 覃雪英.大黄治疗重型肝炎作用机制的研究进展[J].右江医学,2010,38(1):86-88.
[5] 赵文霞,段荣章,苗明三,等.赤芍对大鼠脂肪肝模型胰岛素抵抗及瘦素影响的实验研究 [J].四川中医,2005,23(9):33-34.
[6] 孟宪军,邓静,朱力杰,等.北五味子藤茎总三萜对小鼠酒精性肝损伤的保护作用[J].食品科学,2002,10(6):467-468.
[7] 安红姬,金武丕.TNF-α和NF-κB基因在大鼠急性酒精性肝损伤中的表达及意义义[J].中国现代医学杂志,2011,21(18):2082-2085.
