延边地区90岁以上老人细胞遗传学研究

　　1 引言

　　随着中国经济的快速发展，人民的生活水平不断提高，中国人民的寿命也不断提高，现在中国人的平均寿命已经达到 75 岁。中国将逐渐走进老年社会。人体衰老是有机体固有的规律。研究人类长寿的原因是探讨延长寿命、揭开长寿之谜的重要途径之一。衰老的机制目前尚不十分清楚。Hayflick 发现，细胞质对细胞衰老的速度不起作用，确定细胞继续分裂增殖能力的物质在细胞核内.细胞核的主要成分是遗传的物质基础即染色体。因此，研究染色体变化与衰老之间的关系是当前老年医学研究的重要课题。我国对老年人细胞遗传学研究不多，我们对延边地区 90 岁以上老人进行细胞遗传学研究，对其中 30 例做了细胞遗传学分析。

　　2 研究对象

　　30 例均为 90 岁以上的长寿老人，年龄 90~107岁，男性 11 人，女性 19 人，均为汉族。大部分为城市居民，生活都能自理，少数人还能参加适当的体力劳动。采血前全面体检，以无遗传病、三个月内无病毒感染及一年内未受 X 线照射者为选例对象。以延吉市人民医院细胞遗传室 2012 年检查的60 名壮年人染色体资料为对照组。

　　3 制备细胞培养及染色体标本

　　3.1 培养基的组成

　　RPM164（日本产）80ml,小牛血清（长春生物制品所）20ml,PHA（Difco）1ml,双抗（青链霉素各 1 万单位/ml）1ml,混匀，以 5 %碳酸氢钠调 PH至 7.2,分装每瓶 4ml,冰箱保存。

　　3.2 培养与制法

　　常规静脉采血 1ml（肝素抗凝），用 6 号针头将23 滴抗凝血接种于培养瓶内，置于 37℃耐恒温箱内培养 72h.培养期间每隔 12h 轻轻摇晃培养瓶一次，以便使血细胞充分利用营养物资。收获前 6h 加秋水仙素，气干法制片，姬姆萨染色 15min.

　　3.3 求分列指数

　　在高倍镜下随机统计 1,000 个有核细胞，记录分裂中期细胞数。求出分裂指数。选出 16 名青壮年人的分裂指数为对照组。

　　3.4 染色体核型分析

　　先在低倍镜下选择背景清晰，染色体收缩适度，无重叠或重叠不超过二个和无失散现象的分裂中期相，再用油镜观察每个分裂中期和染色体的数目、形态。只记录 2n 加减 2 的染色体数，再按 WHO推荐的方法做染色体畸变分析，每种畸变均经 2 人以上核对证实。每份标本观察 50~100 个细胞分裂相。

　　4 检查对象分组及检测结果

　　把 30 份标本阅完并详细填写表格后，再按被检查对象的性别、寿斑及长寿家族史分为三组，以观察染色体畸变与性别是否相关。检查结果如下。

　　4.1 分裂指数

　　试镜组共统计淋巴细胞 30,000 个，其中分列中期细胞 1,762 个，分裂指数为 5.87%对照组共统计16,000 个淋巴细胞，其中分列中期细胞为 992 个，分裂指数为 6.20%.

　　4.2 染色体众数（表 1）

　　从表 1 可以看出，实验组超二倍体与对照组比较，差异非常显着（ p<0.05 ）。表明延边地区长寿组二倍体降低，超二倍体明显增高。其他各项变化不明显。【1】

　　
　　4.3 染色体自然畸变率（表 2）

　　两组相比较，实验组染色体型畸变率及染色单体型畸变率明显增高，而经统计学处理后并无显着差异。但畸变细胞总数经 x2检验，p<0.05.试验组的双着丝点体和单体裂隙都比对照组高，然而并无统计学意义。【2】

　　
　　5 各组染色体畸变的关系

　　5.1 性别与染色体畸变的关系

　　11 例男性中共分析分裂中期细胞 850 个，19 例女性中分析分裂中期细胞 1,611 个，染色体数目的变化与染色体畸变率经统计学处理均无明显差异，表明性别与染色体畸变之间没有关系。女性中有 9个单倍体，系 1 人标本中所见，因情况特殊，未做统计学处理。

　　5.2 长寿家族史与染色体畸变的关系

　　在受检的 30 人中，长寿家族史明显的共 28 人。以 80 岁以上作为长寿家族史标准，则有长寿家族史者 16 人，无长寿家族史者 12 人。将两组染色体众数与自然畸变进行比较，无明显差异 .

　　5.3 寿斑与染色体的关系

　　根据综合报告中对寿斑分度的标准，30 例受检人中，无寿斑者 8 人，寿斑（+）者 14 人，（++）者 8 人。各组染色体众数与自然畸变率无明显差异。

　　6 讨论

　　6.1 分裂指数

　　增值是细胞生命现象重要特征之一。但正常细胞的分列能力不能超过一定的限度。余祥美等报道[2],人到 80 岁以后淋巴细胞在离体培养下分裂指数显着下降。可是 Hayfick 发现，培养细胞增殖次数与供体年龄之间没有显着差别。Scheider 则报道培养细胞增殖次数与供体年龄成反比。本实验细胞分裂指数为 5.87%明显高于余氏所报道的，而与周氏报道的接近[3].可见老人的细胞仍然具有旺盛的分裂能力。

　　6.2 染色体自然畸变率

　　人体外周血淋巴细胞染色体畸变的自然频率越来越受到重视。因为利用染色体畸变率这个指标，可以观察环境因素对细胞结构遗传性的影响。染色体畸变自然率为 1~3%.本实验实验组畸变细胞总数为 2.11%.对照组为 1.38 %.p<0.05 具有统计学意义。文献报道，畸变细胞数随年龄增长而增加，80岁以上的人可达 3.0%.本实验结果与文献报道一致。

　　6.3 性别与染色体畸变的关系
　　
　　文献报道，成年女性非整倍体可达 13 %,男性为 7 %.Court 等报道，女性在 55 岁以后，男性在65 岁以后就容易丢失性染色体。本实验组女性非整倍体细胞 13.84 %,略高于男性 12.47 %.而染色体畸变细胞总数男性 2.24 %,则略高于女性 1.99 %.说明长寿老人的性别与染色体畸变关系不密切。

　　参考文献
　　
　　[1] 孙祥燮，人类衰老的细胞生物学[J].科学（中译本），1980,5:20-27.
　　[2] 余祥美等，巴马县 29 名高龄老人细胞遗传学分析[J].中华老年医学杂志，1982,1（2）：70-74
　　[3] 周焕庚等。人体微量血液体外培养制备染色体标本的简易方法[J].中华医学杂志，1974,54（6）：368-370.
　　[4] 沈关心，癌肿患者淋巴细胞亚群的研究[J].武汉医学院学报，1984,13（1）：17