兔尿生成的影响因素实验是生理学泌尿系统的经典实验, 此实验为生理学实验教学中的必做内容之一。 尿生成的过程包括: 肾小球的滤过作用、肾小管与集合管的重吸收作用以及分泌作用。
凡是影响这些过程的因素, 都会因影响尿生成从而引起尿量变化。因葡萄糖有渗透性利尿的作用,所以一般常规的实验条件中都会使用葡萄糖。
家兔的血容量占体重的 8.7%(7%~10%)[1],也 有 文 献 记 载 为 5.46%[2]。 空 腹 血 糖 浓 度 为(107.7±11.5)mg/100 mL[3]。 在尿生成实验中 , 常采用输尿管插管技术,为了便于插管,常使用 3 kg左右的家兔。 按 3 kg 体重计算,家兔的血容量最高为300 mL,血糖含量为(323.1±34.5)mg。按肾糖阈160~180 mg/100 mL 计算,血糖含量超过480~540 mg时开始出现尿糖 , 即 : 给 家兔注入 250 mg以上的葡萄糖即可超出肾糖阈。 在兔尿生成实验中,一般的用量大多为 20%的葡萄糖 15 mL,即葡萄糖 3 000 mg。 实验中,给家兔静脉输入 3 000 mg葡萄糖,远远超过肾糖阈,利尿的实验效果明显。
但也有人使用 10%的葡萄糖 15 mL 或者 10%的葡萄糖 5 mL, 即葡萄糖含量分别为 1 500 mg 和500 mg。 为了更加明确实验中葡萄糖的用量 ,本 实验使用不同量的葡萄糖, 观察对尿量生成的效果和血糖浓度的影响。
1、材料与方法.
1.1 主要仪器与试剂 全自动生化分析仪 (KHB卓越 330),BL-420F 生物机能实验系统(成都泰盟公司),氨基甲酸乙酯(天津市光复精细化工研究所),葡萄糖(天津市北方天医化学试剂厂)。
1.2 动物与分组 健康成年雄性家兔 18 只 , 体重 3 kg 左右,实验前禁食 12 h,正常饮水,随机分成 3 组,即:葡萄糖 500 mg 组(A 组);葡萄糖 750 mg组(B 组);葡萄糖 1 000 mg 组(C 组),每组 6 只。
1.3 实 验方法 20% 氨 基甲酸乙酯溶液麻醉家兔(1 g/kg,iv),仰卧位固定于兔台,做输尿管插管术。 耳缘静脉输注生理盐水(20~30 滴 / min),以维持尿量 6~8 滴/min。 使用 BL-420F 生物机能实验系统记录家兔尿滴, 分别在实验前尿滴稳定时及使用葡萄糖后尿滴最密集的时间点, 记录家兔尿滴, 并在相同时间点使用抗凝试管采集家兔的静脉全血 1 mL,离心后使用葡萄氧化酶法分别测定使用葡萄糖前后家兔的静脉血糖含量。
1.4 统 计 学 处 理 利 用 SPSS10.0 软 件 处 理 数据,实验数据以均值标准差表示。 比较用 t 检验,P<0.05 为具有显著差异 。
2、结果
2.1 静 脉输入 10% 葡 萄糖 5 mL 对 家兔尿量和血糖的影响 表 1 显示, 输入 10%葡萄糖 5 mL,家兔的血糖浓度虽然有所增加(P<0.05),但尿量无明显变化(P>0.05)。
葡萄糖 5 mL, 即葡萄糖含量分别为 1 500 mg 和500 mg。 为了更加明确实验中葡萄糖的用量 ,本 实验使用不同量的葡萄糖, 观察对尿量生成的效果和血糖浓度的影响。
2.2 静脉输入 10%葡萄糖 7.5 mL 对家兔尿量和血糖的影响 表 2 显示,输入 10%葡萄糖 7.5 mL,家兔的血糖浓度增高(P<0.05),尿量增加较为明显(P<0.05)。
2.3 静 脉输入 10% 葡 萄糖 10 mL 对 家兔尿量 、血糖及尿糖的影响 表 3 显示,输入 10%葡萄糖10 mL, 家兔的血糖浓度明显增高 (P<0.05), 尿量增加非常明显(P<0.05)。
3、讨论
尿生成实验的调节实验中, 目前多数教材采用的葡萄糖用量为 3 000 mg,远远超出了兔的肾糖阈,其实验效果非常明显。按理论计算给家兔输入 500 mg 葡萄糖即可出现渗透性利尿。但实验结果显示,给家兔输入 500 mg 葡萄糖,没有出现利尿现象,考虑是因为葡萄糖进入血液后,有一部分作为营养物质利用,还有一部分转化储存起来,使血糖浓度无明显升高。而给家兔输注 750 mg 葡萄糖,尿中开始出现尿糖,证明该剂量使家兔的血糖浓度明显超出肾糖阈,出现渗透性利尿现象。给家兔输注 1 000 mg 葡萄糖,血糖明显升高,尿量明显增多,实验效果显著。 本实验中,给家兔分别静脉输注 750 mg 和 1 000 mg 葡萄糖, 都会出现尿量增多现象,且具有统计学意义。但从直观实验现象看, 建议学生实验时使用 1 000 mg 葡萄糖,因为该浓度使家兔尿量增多效果更加明显。 本实验旨在证实在家兔尿生成实验中, 葡萄糖的用量不需要 3 000 mg, 最低使用 750 mg 葡萄糖即可出现明显的实验现象,既可以节省实验耗材,又可避免实验结果持续时间过长,影响下一步实验。
主要参考文献
1 谢 景田 ,赵 静 ,崔 庚寅 . 生 理学实验 . 第 3 版 , 北 京 : 高 教出版社,2009:222.
2 田 岛嘉雄等 . 实验动物学各论 . 日 本东京 : 朝仓书店 ,1972.
3 王 开富 ,钱 振坤 ,柳 重威等 .130 只家兔空腹血糖及糖化血红蛋白正常值的测定.同济医科大学学报,1993,22(4):293.