生物技术论文
葡萄新品系“龙紫宝”为酿酒葡萄新品种，亲本不详。“龙紫宝”葡萄生长势健壮，在正常管理条件下，当年扦插的葡萄苗其新梢就能长到2 m以上，扦插后第2年即可结果，且果实品质优良。“龙紫宝”根系数量多、抗寒、抗冻、抗旱能力强，并具有极强的抗霜霉病能力，在河北中北部地区可以自然越冬[1].
在此项研究中，主要以“龙紫宝”葡萄当年生枝条的腋芽为外植体进行组织培养，目的在于寻求建立高效、稳定的“龙紫宝”葡萄组培工厂化育苗技术体系。
1 材料与方法
以当年生“龙紫宝”枝条的腋芽为供试材料。
1.1 外植体诱导
选择生长健壮的“龙紫宝”1年生枝条，将叶片剪下，枝条剪成5~6 cm长的小段，用洗涤灵水轻轻刷洗表面，注意不要破坏腋芽，刷洗完成后置于流动水中冲洗2 h左右。在无菌条件下用75%酒精浸泡茎段30 s,无菌水冲洗2遍，然后用0.1%升汞加几滴吐温的溶液浸泡茎段8 min,无菌水冲洗3遍[2].在无菌条件下切取腋芽接种于添加不同浓度KT（0.4、0.8、1.6、2.4 mg·L-1）和NAA（0.1、0.2 mg·L-1）的GS培养基上进行诱导培养。每个处理接种50瓶，每瓶1个腋芽，30 d后统计外植体诱导率[3].
1.2 组培苗增殖培养
以 GS 为 基 本 培 养 基 ,添 加 KT（0.6、1.2、1.8 mg·L-1）、NAA（0.05、0.10 mg·L-1）。将高1.5~2.5 cm 的单株无菌苗转接入增殖培养基中培养，每个处理接种5瓶，每瓶10个嫩芽，40 d后统计增殖率。
1.3 培养条件
基本培养基中均加入35 g·L-1蔗糖、8.0 g·L-1琼脂，pH 值 5.8.培养室温度（23±2）℃，光照强度2 000~2 500 lx,光照时间 15 h·d-1.
2 结果与分析
2.1 外植体诱导
不同激素组合对外植体腋芽诱导的影响不同（表 1），3 号 培 养 基（GS+KT 0.8 mg·L-1+ NAA0.1 mg·L-1）的萌芽率最高，芽生长状况也最好，其次是4号培养基。因此，“龙紫宝”葡萄的最适诱导培养基为GS+KT 0.8 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖35 g·L-1+琼脂 8 g·L-1.
2.2 组培苗增殖
随着KT浓度增加，葡萄组培苗的增殖倍数也随之增加，但是当KT达到1.8 mg·L-1时，组培苗开始大量长出愈伤组织，增殖倍数降低，影响组培苗的正常生长（表2）。
对表 2 数据进一步做方差分析，结果表明，F0.01（2,24）=5.61,KT（F=163.08）、KT × NAA（F=20.76）的影响达到极显着水平。说明 KT 是影响葡萄组培苗增殖的最主要因素，而NAA能够促进增殖组培苗的高生长，并与KT存在交互作用，进而影响葡萄组培苗的增殖效果。由表2可知，最佳增 殖培养基是GS+KT 1.2 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+蔗糖35 g·L-1+琼脂 8 g·L-1,此时“龙紫宝”葡萄增殖芽多且生长健壮，底部愈伤组织数量较少。
3 结 论
以“龙紫宝”葡萄腋芽为外植体，尝试对其进行诱导及增殖培养试验，得到最佳诱导培养基为GS+KT 0.8 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖 35 g·L-1+琼脂8 g·L-1,诱导萌芽率最高达到88%.最佳增殖培养基为 GS+KT 1.2 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+ 蔗糖35 g·L-1+琼脂 8 g·L-1,增殖倍数最高达到8.7倍。上述试验的成功，为进一步探讨“龙紫宝”葡萄生根培养及工厂化快繁研究奠定了技术基础。
参 考 文 献：
[1] 王浩。葡萄新品系‘龙紫宝’越冬性研究[D].秦皇岛：河北科技师范学院，2012:19-20.
[2] 曹孜义，刘国民。实用植物组织培养技术教程[M].兰州：甘肃科学技术出版社，1999:43-44.
[3] 王艳辉，刘丽霞。 金叶复叶槭组培技术研究[J].辽宁林业科技，2014,（4）：44-45.