“神仙水”是一种日渐流行的新型毒品，常为黄色、橙色、棕色液体。外包装多为与口服液外观相似的小瓶，配以“雪山飞狐”、“兰博基尼”等新颖有趣的品名和炫目的色彩。“神仙水”的成分非常复杂，含有甲基苯丙胺、氯胺酮和MDMA等一种或多种国家管制的一类精神药品，并且常常含有尼美西泮、可待因、愈创木酚甘油醚、美沙芬、咖啡因等多种其它成分，摄入后有明显的欣快感。由于这种液体毒品外观明显区别于人们熟知的海洛因、冰毒等传统毒品，犯罪分子常常故意隐瞒其“毒品”本质，谎称其能解酒提神，或加入饮料中诱骗他人服用，它的危害性也没有受到充分重视，一些食用者即使对其真实成分略知一二，仍然抱着侥幸心理认为不会上瘾，这种液体毒品因而快速流行开来。
目前，检测“神仙水”的仪器分析方法主要是气相色谱法（GC）和气相色谱-质谱联用法（GC-MS）[1-3].虽然气相色谱技术应用较为普遍，但由于检材是水相液体，不能直接进行气相色谱分析，需要经过萃取等方法对样品进行前处理，程序繁琐且定量准确度受到影响，而液相色谱法能够直接分析水相，简便快捷，含量分析准确性高，更适合“神仙水”毒品的定量测定。本文开发了同时检测“神仙水”中3种主要成分甲基苯丙胺、氯胺酮和MDMA的高效液相色谱定量分析方法，以期为相关案件的检验鉴定提供参考。
1 材料与方法
1.1仪器与试剂
岛津Prominenece UFLC超快速液相色谱仪，包括LC-20AD XR型泵、SPD-20A型紫外检测器和SPD-M20A型二极管阵列检测器。甲醇（优级纯，购自国药集团化学试剂有限公司），乙腈（色谱纯，购自美国Fisher Scientific公司）。
甲基苯丙胺、氯胺酮、MDMA标准品（1.0 mg/m L,公安部物证鉴定中心提供）；“神仙水”样品（案件中收缴）。
1.2色谱条件
岛津Inertsil ODS-SP色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 ?m），流动相为磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液A（36mmol/L,0.25%三 乙 胺V/V）-乙 腈B, 梯 度 洗 脱程序中有机相初始浓度5%,梯度程序为5%B（0.01min）-15%B（16 min）-75%B（18min）-75%B（20min），柱温35℃，柱流量1.4 m L/min,检测波长205 nm.
1.3样品前处理方法
取适量“神仙水”样本，以适量甲醇稀释，1 500r/min振荡5 min,以0.22μm滤膜过滤后取1.5 m L装瓶供仪器分析。
2 结果与讨论
2.1样品前处理
由于“神仙水”为水相检材，液相色谱可以直接分析，只需适量稀释即可。因此，前处理过程比较简单，我们选择常用的甲醇作为稀释溶剂，根据经验，目标成分的含量多在0.005 %~5 %之间，因此，可以移取100 ?L样本，定容至10 m L容量瓶中，震荡摇匀、经滤膜过滤后即可进行检测。如果样品浓度超过标准曲线端点，再视情况调整取样量。
2.2波长的选择
为实现对不同波长下色谱响应的考察，采用二极管阵列检测器（DAD）对甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮混合标准溶液进行分析，三种目标物的光谱图如图1a、1b、1c所示。可见，在195~210 nm波长范围内目标物有较强吸收。但考虑到检测波长越低对流动相本底的干扰越大，选择205 nm作为检测波长。
2.3流动相的选择
甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮在高纯水-乙腈的流动相条件下色谱峰形差、柱效低、拖尾严重，因此尝试采用缓冲液及添加改性剂以改善色谱行为。比较了采用高纯水和50 mmol/L的磷酸-磷酸二氢纳缓冲液作为水相流动相时的效果可知，在磷酸缓冲液条件下，甲基苯丙胺、MDMA比在高纯水条件下具有10倍以上的柱效 ;氯胺酮具有5倍以上的柱效，同时峰形大为改善。另一方面，添加三乙胺可以有效缓解拖尾现象。但缓冲液体系对色谱柱会造成慢性损伤并增加仪器维护难度，因而缓冲液和改性剂浓度不宜过高。综上，将流动相确定为磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液（36 mmol/L,添加0.25 %三乙胺）-乙腈体系。
2.4色谱条件优化
建立了甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮的有机相初始浓度-理论塔板数模型和梯度陡度-理论塔板数模型。用单因素实验的方法，对上述3种目标物的液相色谱参数进行优化，结果如图2、图3所示。甲基苯丙胺和MDMA由于结构相近，具有相似的分离机理，同时，氯胺酮的色谱行为也有相同的规律。随有机相初始浓度升高，3种物质的保留时间缩短、柱效降低（色谱峰理论塔板数减小）、响应（峰高）增加；随梯度陡度增加，3种物质的保留时间亦缩短，峰高亦增加，而理论塔板数增加。为保证较高的柱效、分离度和灵敏度，最终确定的梯度程序为5% B （0.01min）-15% B （16 min）-75%B （18min）-75% B （20 min）。优化条件下的甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮混合标准品的色谱图见图 4.
2.5方法验证
2.5.1 线性范围和工作曲线
外标法是实际办案中常用的定量方法，我们建立了甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的外标工作曲线，对其线性情况进行考察。结果表明，3种目 标 物 在1 ~100μg/m L浓 度 范 围 内 均 呈 良 好 线性， 甲 基 苯 丙 胺MDMA、 氯 胺 酮 的 外 标 工 作 曲线 为Y=1281.49X-1784.50、Y=3280.13X+6721.55、Y=1442.96X+848.01,线性相关系数均高于0.9999.以信噪比S/N>3计算，检测限分别为0.2、0.1、0.2μg/m L.
2.5.2 精密度测定
制备1.0、10.0、50.0μg/m L各6份混合标准品溶液，每日伴随标准曲线检测，计算含量，得到日内精密度（相对标准偏差，RSD）；连续测量6 d,计算得到日间精密度。甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮日内精密度均小于1.58 %,日间精密度均小于3.21 %,结果表明精密度良好。
2.5.3 加标回收率测定
实验中对甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的加标回收率进行了考察，以验证所建立的方法是否存在系统性偏差。选取的神仙水样品中，甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的含量分别为0.015 %、0.021 %、0.11 %,精密称取该已知含量的样品12份，分别加入约为已知含量的50 %、100 %的标准品各6份，进行前处理和色谱分析，并计算加标回收率。结果表明，加标回收率在96.08 %~104.39 %范围内，RSD%≤4.37 %,方法不存在系统性偏差。
2.5.4 稳定性实验
取2.5.3项中的样品溶液，用甲醇稀释10倍，取6份于室温下分别放置3、6、12、24、48、96 h,分别进样，甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮峰面积RSD≤2.11% ;取3份于-20℃和室温间反复冻融3次，3种目标物峰面积RSD≤1.85% ;另取3份于-20℃冰箱中分别放置2、5、10 d,3种目标物峰面积RSD≤3.37%.结果表明，神仙水样品在室温放置96 h、-20℃放置10 d以及在室温和-20℃反复冻融3次的条件下均可保持稳定。
2.6案例应用
2015年，在某案件中缴获10瓶疑似“神仙水”毒品，为黄色液体检材。经定性分析，确认各样品中均含有甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮毒品成分。将10瓶液体混合、振荡后，平行取两份各200μL的样品，加入甲醇稀释，定容于10 m L容量瓶中，用如前所述的样品前处理方法和色谱条件进行分析，所得高效液相色谱图如图5所示。甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮样品保留时间分别为9.445、11.485、15.769min,与标准品色谱峰保留时间相差不超过1 %.经计算，甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮毒品含量分别为0.037 %、0.39 %、0.28 %.结果表明，采用本文建立的方法，“神仙水”中3种主要目标成分色谱行为良好，前处理及分析过程快捷、高效、准确、可靠，适用于公安办案中神仙水样品的定量分析。
参考文献
[1]朱彬玲，郑可芳。最新缴获物质“神仙水”案件检验与讨论[J].福建警察学院学报，2014（1）：33-35.
[2]徐鹏，钱振华，刘克林。新型“神仙水”液体毒品的GC/MS检验5例[J].刑事技术，2013（3）：62-64.
[3]钱振华，常颖，徐鹏，等。“开心水”的检验[J].中国药物滥用防治杂志，2011,17（4）：239-242.
