司法鉴定论文
对于早期药物流产胎儿用于亲子鉴定的案例近年文献报道较少，而在实际法医物证鉴定工作中，药物流产胚胎用于检材的案例却逐年增多。通常医院妇产科在进行早期药物流产时往往不考虑流产物作为法医学生物检材使用，一般对流产物不需做进一步的筛选，甚至有些流产者在家中排出流产物，这就给需要用早期药物流产胚胎作为法医学亲子鉴定生物检材带来不便，增加了获取有效检材的难度。本文以实际工作中遇到的案件“妊娠40天人流胚胎亲子鉴定”经验为例，对早期药物人流胚胎用作法医学亲子鉴定时，如何能够更好地收集检材，更加准确地从流产排出组织碎块中准确地选取目标生物检材提出建议，为妇产科医生和法医物证司法工作者提供有益的借鉴和参考。
1、资料与方法
1.1 资料来源
2015年5月安徽世平司法鉴定所接案1例亲子鉴定，女方25岁，孕期约40天，于2015年5月26日到医院进行药物流产。
1.2 样本的处理与DNA提取
对获取的药物流产胚胎和组织碎块进行清洗干净（见图1），寻找检材目标，为了确定检材的准确性，分别选取两种组织碎块，第1种是一面光滑另一面粗糙的不规则形状的组织碎块，第2种是整体绒毛状的组织碎块（见图2），用镊子和手术刀片分别在不规则形状组织碎块的光滑面（见图2箭头1）和粗糙面（见图2箭头2）、整体绒毛状组织碎块表面（见图2箭头3），切取面积约0.5 cm2大小的检材。为了避免取样的偶然性误差各设3个重复样本，所取检材用眼科剪剪碎，放入1.5 ml离心管中，加入200μl 5%Chelex-100（w/v）提取液，反复振荡后，置于恒温振荡器上，56℃保温30分钟，中间摇晃混匀2次，然后100℃保温5分钟，中间再摇晃混匀1次，最后10000 r/m离心3分钟。
图1 清洗干净的药物流产胚胎组织碎块
图2 两种不同的药物流产胚胎组织碎块
（箭头1:不规则形状的组织碎块光滑面；箭头2:不规则形状的组织碎块粗糙面；箭头3:整体绒毛状的组织碎块）
1.3 PCR扩增与电泳检测
上述离心上清液1μl,采用中德美联AGCU-EX22试剂盒在9700型PCR扩增仪（美国ABI公司）上按照试剂盒操作说明进行复合扩增，反应体系为10μl.设立阳性（9947A）和阴性对照（阴性对照是只含PCR反应体系的空白管）。扩增结束后取1μl扩增产物与0.3μl内标和10μl去离子甲酞胺混合，3500 rpm离心5分钟，置3130XL型遗传分析仪（美国ABI公司）上全自动毛细管电泳，Collection软件收集数据，用Gene Mapper ID v 3.2软件进行等位基因分型结果分析。同时取胚胎疑父和母亲血样制成的血痕滤纸片进行PCR扩增和电泳检测。
2、结果
通过与母亲和疑父基因位点比对，可确认父亲和母亲应提供的位点，21个常染色体STR基因座和1个性别位点分型结果显示（见表1），1组与胚胎生母21个常染色体STR基因座完全相符，并且性别位点也是一致的，说明第1组取材可能就是母亲的样本DNA信息；第2组的常染色体STR基因座分型包含了胚胎生母全部21个常染色体STR基因座的位点，每个基因座多出来的位点都可以在胚胎疑父的常染色体STR基因座分型中找到，说明第2组取材是胎儿和母亲的混合物，包含母亲与胎儿的混合DNA信息；而第3组的21个常染色体STR基因座位点有一半来自生母，一半来自疑父，说明第3组取材是胎儿样本，含有胎儿自身的DNA信息。分析不同药流胚胎组织部位检材21个常染色体STR基因座和1个性别位点检测结果，胎儿与疑父在所有位点都符合遗传规律，胎儿与母亲在所有位点也都符合遗传规律，胎儿Amelogenin性别基因座检出X和Y染色体基因位点，提示为男性胎儿，见表1所示。
表1 不同部位检材21个常染色体STR基因座和1个性别位点检测结果
1组代表不规则形状的组织碎块光滑面；2组代表不规则形状的组织碎块粗糙面；3组代表整体绒毛状的组织碎块
3、讨论
胎盘是由胎儿的丛密绒毛膜和母体的基蜕膜共同组成的圆盘形结构，有资料认为早孕期在胎盘的胎儿面覆盖有滋养层及胚外中胚层发育并退化而成的平滑绒毛膜（胎盘光滑面）及羊膜，为胎儿成分，而胎盘的粗糙面是由剥离后的胎儿丛密绒毛膜及母体的基蜕膜组成。但在实际的早期药物流产中，会出现各种各样的流产物，对于单一的一块明显的胎囊组织的情况则较好判断鉴定用取材部位，如果流出物为多块不规则胚胎组织碎块（本案中情况），则必须挑选可以准确用于鉴定的检材。本案中多个不规则胚胎组织碎块基本上都是一面光滑、一面粗糙，其中找到了一块整体绒毛状的碎块，检测结果表明，此早期药物流产物中，这种整体绒毛状的碎块可以准确提供流产胎儿的DNA信息，而其他碎块无论光滑面还是粗糙面都不能准确提供流产胎儿的DNA信息，粗糙面多为胎儿和母亲的混合DNA信息，光滑面更可能提供胎儿母亲的DNA信息，这与已有研究结果存在不同，原因可能是所获流产排出物和取材不同所致。该研究报道所获流产物为一6 cm×7 cm大小胎盘，此胎盘一面光滑（平滑绒毛膜面），一面粗糙（蜕膜面），从光滑面及粗糙面各取材两处，依次从表面刮取绿豆粒大小组织和0.2 cm×0.2 cm×0.5 cm深部组织块，其检测结果表明，粗糙面刮取物的DNA分型与母亲一致，而光滑面刮取物的DNA分型是胎儿的，认为使用胎盘进行亲子鉴定，其首选部位应是胎盘光滑面的刮取物，取胎盘较深部位得到的样品为母亲和胎儿混合品。还有文献报道了妊娠40天胎儿绒毛组织亲子鉴定1例，但该文献没有说明如何判断筛选胎儿绒毛组织。
早期药物人流都在怀孕7周以前进行，就是因为胎儿与胎盘都还处于不稳定的状态。这时包裹在受精卵外侧的绒毛还没有与子宫内膜形成稳定连接，流产时通常会成游离状态存在。一般药物流产胚胎组织排出时，由于胎盘胎儿都没有成形，只是简单的血块样绒毛组织，同时伴有不同数量和大小的子宫蜕膜碎块，胎囊混在其中往往不易挑选。胎囊是刚刚发育的胚胎组织，经过药物处理流产出来时是血块样结构，血块状的胎囊在清水中漂洗便会成为绒毛状，可以看到白色的绒毛，但是不易分辨出来。胎囊完整的话，是白色绒毛球样的，或呈长条状，直径大小约在1~2 cm范围。当胎儿部分的绒毛组织不明显时，就给这一法医学生物检材的获取带来难度。
目前，有关早期胎盘组织如何取材用于亲子鉴定的报道非常有限，特别是早期药物流产物作为生物学检材的文献报道很少。而笔者实际工作中遇到多起需要通过早期药物人流胚胎亲子鉴定的案件，由于医院妇产科医生与法医物证亲子鉴定单位在业务上没有交集，不能从早期药物流产物中准确筛选出胎囊，常常使得从医院拿到的早期药物流产物不能很好地适用于法医物证亲子鉴定生物学检材。这就要求从事鉴定的人员也需要具有足够的经验，能够准确地从早期药物流产物中挑选出目标检材用于法医物证亲子鉴定。本案的结果表明，在众多的流产胚胎组织碎块中寻找绒毛团样结构，可能可以更准确地选取目标生物检材，获取胎儿的DNA信息，为广大妇产科医生和法医物证鉴定人员提供借鉴和参考。