微生物论文
随着中国综合国力的提高，中医药治疗技术得到了迅速的推广，但是，基础研究不足，治疗缺乏客观数据支持仍然是制约中医药走向国际化的瓶颈。
应用现代生物学、仪器分析及信息学等技术研究中医药的药效、药理等科学问题具有极其重要的意义。铁皮石斛（ Dendrobium officinale） 是一种名贵中药材，是多年生草本植物，又称黑节草（ 云南、贵州） 、铁皮兰（ 通称） ,为兰科石斛属多年生附生草本植物的全草，是九大仙草之一，国家重点保护药物[1],有“除痹下气，补五脏虚劳赢瘦，强阴，久服厚肠胃轻身延年”[2]之效。为了进一步推广铁皮石斛的临床应用，本研究对铁皮石斛影响部分有益菌和有害菌生长的作用进行探讨，现报道如下。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 供试菌株 选取汉逊德巴利酵母菌（ Debaryomy-ces hansenii） 、酿酒酵母菌（ Saccharomyces cerevisiae） 、白色假丝酵母菌（ Candida albicans） 、金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus ） 、大肠埃希菌（ Escherichia coli） 、沙门菌（ Salmon sp. ） 、产气杆菌（ Enterobacter aerogenes） 、铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa） 、保加利亚乳杆菌（ Lactobacillus delbrueckii） 、嗜热链球菌（ Streptococcusthermophilus） 、地衣芽胞杆菌（ Bacillus licheniformis） 和枯草芽胞杆菌（ Bacillus subtilis） 接种到相应的液体培养基中： 保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌于厌氧培养箱中，37 ℃培养 36 h; 汉逊德巴利酵母菌、酿酒酵母菌和白色假丝酵母菌于摇床中，28 ℃、120 r/min 振荡培养48 h;金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、产气杆菌、铜绿假单胞菌、地衣芽胞杆菌和枯草芽胞杆于摇床中，37 ℃、120 r / min振荡培养 24 h,制成一定浓度的菌悬液，备用。
1. 1. 2 药物 铁皮石斛常规细粉由湖南龙石山铁皮石斛基地有限公司提供。
1. 1. 3 培养基 MRS 液体培养基用于培养乳酸菌，YPD 液体培养基用于培养酵母菌，牛肉膏蛋白胨液体培养基用于培养其它细菌，具体配方见参照文献[3].
1. 2 方法
1. 2. 1 药液的制备 称取适量的铁皮石斛常规细粉加入到对应菌种的培养基中，搅拌均匀，使铁皮石斛的浓度分别为 0、0. 02、0. 04、0. 06、0. 08、0. 10 和0. 12 g / mL, 各 3 次重复， 高压蒸汽灭菌后冷却，备用。
1. 2. 2 铁皮石斛对供试菌株的抑促效果检测 向已灭菌的铁皮石斛和液体培养基混合液中加入对应的供试菌菌液 0. 1 mL（ 以未加菌液的培养基混合液作为参比） ,按1. 1. 1 的相应条件进行培养，取样测定A660 nm值[4].
1. 2. 3 统计学分析 用 SPSS 19. 0 软件处理数据，各分组所得计量数据采用平均值 ± 标准差（ x ± s） 表示，两组间均数比较用 t 检验，P <0. 05 为差异有统计学意义。
2 结 果
2. 1 铁皮石斛对酵母菌生长的影响 酵母菌的应用十分广泛，能食用、药用、饲用，是一类肠道有益菌。由图1可知，通过比浊法测得铁皮石斛对所测的酵母菌有明显的促进作用，从数值上看，铁皮石斛对白色假丝酵母菌的促进作用最明显，其次是酿酒酵母菌，对汉逊德巴利酵母菌有一定的促进作用。从图 1 还可以看出，铁皮石斛在0 ~0.12 g/mL 浓度范围内，随着药物浓度的递增，对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌生长的促进作用越明显： 铁皮石斛在0 ~0.08 g/mL 的浓度范围内，随着药物浓度的递增，对汉逊德巴利酵母菌生长的促进作用越明显，但在0.08 ~0.12 g/mL 范围内开始呈现出递减趋势，对汉逊德巴利酵母菌的最佳促菌浓度约为0.08 g/mL.至于铁皮石斛浓度超过 0.12 g/mL 后对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌生长的影响情况，还有待于进一步研究。【1】
2. 2 铁皮石斛对部分有害菌生长的影响 条件致病菌是指因正常菌群（ Normal flora） 与人体之间的平衡关系在一定条件下被打破而引起疾病的菌群[5].由图 2 可知，铁皮石斛对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和沙门菌的生长有抑制作用，对产气杆菌和铜绿假单胞菌的生长没有明显的影响。当铁皮石斛浓度为0. 02 g / mL 时，对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用显着（ P <0. 05） ,铁皮石斛浓度为 0. 06 g/mL 和0. 08 g / mL 时，对大肠埃希菌和沙门菌生长的抑制作用极显着（ P <0. 01） .【2】
2. 3 铁皮石斛对几种益生细菌生长的影响 由表 1 可知，铁皮石斛对保加利亚乳杆菌和枯草芽胞杆菌的生长有促进作用，对嗜热芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌的生长无明显抑促作用。当铁皮石斛浓度为 0. 02 g/mL 时，保加利亚乳杆菌和枯草芽胞杆 菌 便 有 较 大 程 度 的 增 长 （ P < 0. 05 或P < 0. 01 ） ,并且随着铁皮石斛浓度的增加，对保加利亚乳杆菌及枯草芽胞杆菌生长的促进作用越大。【3】
3 讨 论
铁皮石斛是我国传统名贵中药[6],是石斛中的极品。本研究证实，低浓度的铁皮石斛对酵母菌、乳酸杆菌、枯草芽胞杆菌等有益菌具有明显的促生作用，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌等条件治病菌有一定的抑制作用，对产气杆菌、铜绿假单胞菌、嗜热链球菌和地衣芽胞杆菌无明显的抑促作用。
唐开元年间道家经典着作《道藏》记载，中华九大仙草（ 铁皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草） ,铁皮石斛因滋阴补虚效果显着，被列为中华九大仙草之首位。秦末汉初《神农本草经》将铁皮石斛列为上品。铁皮石斛的主要成分是生物碱和多糖[7],富含氨基酸，其中包括 7 种人体必需氨基酸（ 除色氨酸外） 和 3 种半必需氨基酸[8],其中铯（ Se）和铁（ Fe） 的含量较高。现代研究表明，其具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等作用[9,10].中医认为其具有益胃生津，滋阴清热的作用。用于阴伤津亏，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。对治疗胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效[9,11],石斛多糖能促进乳酸菌、双歧杆菌等有益菌，并能有效抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和肺炎球菌等的生长[12,13].研究表明，铁皮石斛能够调整肠道微生态平衡，从而对脾虚便秘有一定的疗效[14].本研究证实了铁皮石斛能促进有益菌的增长，抑制条件致病菌的生长，为铁皮石斛的临床应用提供了客观实验依据。
参考文献
[1] LIU Lian-fang. Latest Research Advance in Caulis Dendrobii[J]. JAnhui Agric Sci,2012,40（ 11） : 6426-6428,6430. （ in Chinese）柳莲芳。 铁皮石斛的最新研究进展[J]. 安徽农业科学，2012,40（ 11） : 6426-6428,6430.
[2] WU Pu,SUN Xing-yan. Sheng Nong's herbal classic[M]. Beijing:People's Medical Publishing House,1982: 21. （ in Chinese）吴普等述（ 魏） ,孙星衍等辑（ 清） . 神农本草经[M]. 北京： 人民卫生出版社，1982: 21.
[3] ZHAO Bin,HE Shao-Jiang. Microbiology experiment[M]. Beijing:science press,2002: 251-261. （ in Chinese）赵斌，何绍江。 微生物学实验[M]. 北京： 科学出版社，2002:251-261.
[4] GUO Kang-xiao,ZHOU Sai-nan,TAN Zhou-jin,et al. Study on In-hibition and Boosting Action of Qiweibaishusan to Intestinal Yeast[J]. Prog Mod Biomed,2013,13（ 27） : 5259-5263. （ in Chinese）郭抗萧，周赛男，谭周进，等。 七味白术散对肠道酵母菌的抑促作用研究[J]. 现代生物医学进展，2013,13（ 27） : 5259-5263.
[5] LU De-yuan. Medical Microbiology[M]. Version 5. Beijing: Peo-ple's Medical Publishing House,2001: 69-70. （ in Chinese）陆德源。 医学微生物学[M]. 5 版。 北京： 人民卫生出版社，2001: 69-70.
[6] HAN Xiao-hong,DUAN Chun-hong,YAN He-jing,et al. Researchadvances on the protocorm liquid suspension culture of Dendrobiumcandidum[J]. J AnHui Agric Sci,2010,38（ 20） : 10570-10572.