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水貂体内大肠杆菌的药敏试验分析

来源:学术堂 作者:周老师
发布于:2015-12-19 共2849字
摘要

  近年来,山东省水貂养殖业蓬勃发展,水貂年产量居全国第一[1]. 然而疾病的发生给水貂养殖带来巨大威胁,其中大肠杆菌病是水貂常见疾病之一。 水貂大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的一种急性肠道传染病,多发生于 40 ~ 60 日龄幼貂,常呈败血型经过,并伴有严重下痢。 若治疗不及时或不当,会导致动物大量死亡[2 -3]. 临床上主要是使用抗菌药物控制大肠杆菌病的发生,随着药物使用或滥用,大肠杆菌的耐药性增强,而且出现多重耐药菌株[4]. 已有的水貂源大肠杆菌药敏检测发现,菌株对环丙沙星、诺氟沙星、链霉素、四环素、氨苄西林等 5 种药物耐药率均大于50%[5 -7]. 由于各养殖场的用药情况不尽相同,水貂源大肠杆菌对粘杆菌素、大观霉素等药物耐药率、耐药谱型是否增高和扩大,这有待检测。 因此,本实验从山东省胶东地区部分养貂场采集水貂粪样,按细菌常规分离、鉴定方法,获得 8 株大肠杆菌。 采用 K - B 纸片扩散法进行了菌株对 9 种抗菌药物的药物敏感性试验,旨在指导兽医临床合理使用药物,也为大肠杆菌耐药机制研究提供材料。

  1 材料和方法

  1. 1 材料

  1. 1. 1 样本

  2015 年 3 月在山东胶东地区某水貂养殖场无菌采集水貂粪便。 质控菌: 大肠杆菌 ATCC25922 由西南民族大学兽医药理学实验室保存并提供。

  1. 1. 2 主要试剂及培养基

  肠杆菌科细菌生化编码鉴定管( 15* 10) 、麦康凯培养基、伊红美蓝培养基、LB 肉汤、MH 肉汤培养基,MH 琼脂培养基购自杭州微生物试剂有限公司。

  1. 1. 3 药敏纸片

  大观霉素( Spt,25μg/片) 、妥布霉素( Tob,30μg/片) 、阿米卡星 ( Ami,30μg/片) 、粘杆菌素 ( Pmb,25μg / 片) 、萘啶酸 ( Nal,30μg / 片) 、环丙沙星 ( Cip,10μg / 片) 、恩诺沙星 ( Enr,5μg / 片) 、沙拉沙星 ( Sar,5μg / 片) 、左氟沙星( Lev,5μg / 片) ,共 9 种药敏纸片使用原料药购自中国兽药监察所或由成都中牧公司提供。 药敏片按照标准制作方法制作。

  1. 2 方法

  1. 2. 1 大肠杆菌的分离、纯化

  蘸取少量的新鲜粪便划线接种于麦康凯琼脂培养基,37℃培养 24h 后观察菌落的生长情况。 选取典型的玫瑰红色、湿润、边缘整齐、大小适中菌落接种于麦康凯培养基和伊红美兰培养基上,37℃培养 24h 后挑取典型的单菌落进行纯培养[8 -11].

  1. 2. 2 鉴定和保存

  将分离纯化的可疑菌株采用革兰氏染色和生化检验进行鉴定。革兰氏染色及镜检: 菌株经涂片干燥固定,经初染、媒染、脱水与复染后镜检。

  生化鉴定: 将生长特性及革兰氏染色符合大肠杆菌特征的菌株,接种于葡萄糖等肠杆菌科细菌生化编码鉴定管进行鉴定。 经以上方法鉴定为大肠杆菌菌株增菌后,甘油菌于 -20℃保存备用。

  1. 2. 2 药敏试验

  药敏试验采用“K - B 纸片扩散法”[12]. 用灭菌棉拭子蘸取纯大肠杆菌菌液,均匀涂抹于 MH 琼脂培养基,反复几次,每次将平板旋转 60 度,最后沿平板周围涂一圈,以保证菌液涂布均匀。 用镊子夹取药敏纸片贴在琼脂表面,并用镊子轻压固定,放入 37℃恒温箱中培养,24 小时后,量取抑菌圈直径。 药敏结果按照 CLSL 标准进行判断[13].

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