氯强油搽剂抗迟发型变态反应的药理作用探析

　　摘    要：　目的:研究氯强油搽剂抗小鼠迟发型变态反应的药理作用。方法:采用二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液诱发小鼠迟发型变态反应的实验动物模型，建立氯强油搽剂实验动物高剂量组、中剂量组、低剂量组、莫米松乳膏组、模型对照组、基质对照组、空白对照组，观察其对迟发型变态反应的影响，用磷酸组织胺测定小鼠致痒阈。结果:以耳肿胀度为指标，与模型组比较，氯强油搽剂高、中、低剂量组差异均具有统计学意义(P<0.05);以胸腺指数、脾脏指数为指标，氯强油搽剂高、中剂量组与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，低剂量组与模型组比较，差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较，氯强油搽剂高、中、低剂量组磷酸组织胺致痒阈差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:氯强油搽剂局部外用具有良好的抗小鼠迟发型变态反应和止痒作用，适用于临床具有迟发型变态反应特征的皮损治疗。

　　关键词：　氯强油搽剂; 变态反应; 致痒阈;

　　Abstract：　Objective: To study the pharmacological effects of chloramphenicol prednisone liniment on delayed hypersensitivity in mice.Methods: Experimental animal model of delayed hypersensitivity in mice was induced by dinitrochlorobenzene( DNCB) acetone solution,the chloramphenicol prednisone liniment high dose group,medium dose group,low dose group,momethasone cream group,model control group,matrix control group and blank control group for experimental animals were established,and the effects on delayed hypersensitivity were observed. Antipruritic threshold was detected by histamine phosphate. Results: Compared with the model group,there were significant differences among the chloramphenicol prednisone liniment high dose group,medium dose group and low dose group in the index of ear swelling( P < 0.05); there were significant differences among the chloramphenicol prednisone liniment high close group,medium dose group and the model group in the thymus index and spleen index( P < 0. 05),there was no statistically significant difference between the low dose group and the model group( P > 0.05). Compared with the model group,the difference of antipruritic threshold of phosphate histamine in the chloramphenicol prednisone liniment high dose group,medium dose group and low dose group was statistically significant( P<0.05). Conclusion: The topical application of chloramphenicol prednisone liniment has good anti-hypersensitivity and antipruritic effects in mice,which is suitable for clinical treatment of skin lesions with delayed hypersensitivity.

　　Keyword：　chloramphenicol prednisone liniment; hypersensitivity; antipruritic threshold;

　　氯强油搽剂(鄂药制H20111437，规格10 m L)是十堰市太和医院的医院制剂，由氯霉素(10 mg/m L)、泼尼松(0.5 mg/m L)、蓖麻油(14%)、无水乙醇(7%)、清鱼甘油(79%)组成，具有抗菌消炎、抗变态反应的作用，主要用于蚊虫叮咬、脓疱疮、病毒性疱疹的外用治疗[1,2]。近年来，氯强油搽剂在临床上的用途得到扩展，陆续用于小儿重症葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征、慢性腹泻肛周皮损、糜烂性皮损、中耳炎、隐翅虫皮炎、药疹的治疗和护理[3,4]。氯强油搽剂的组方、制备工艺、质量控制方法历经我院药学部多位药师的改进，已形成了一个质量稳定可控、经济、安全、疗效确切的外用经典医院制剂，由于过去条件的限制，缺乏对该制剂药理作用的研究。为指导临床合理安全用药提供理论依据，进一步明确其药理作用，笔者拟对氯强油搽剂抗迟发型变态反应的药理作用进行研究。

　　1 、试药与材料

　　1.1、 药物与试剂

　　二硝基氯苯(DNCB，武汉江岸化试有限公司，批号20161206);4-氨基吡啶(4-AP，郑州阿尔法化工有限公司，批号20170411);磷酸组织胺(武汉江岸化学试剂有限公司，批号20161513);生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号L118060801);莫米松乳膏(湖北宜昌恒安制药生物公司，批号20180319);氯强油搽剂(十堰市太和医院制剂，批号20180416);高剂量氯强油搽剂(含氯霉素20 mg/m L、泼尼松1 mg/m L，临时配制);中剂量氯强油搽剂(含氯霉素10 mg/m L、泼尼松0.5 mg/m L，临时配制);低剂量氯强油搽剂(含氯霉素5 mg/m L、泼尼松0.25 mg/m L，临时配制);氯强油搽剂基质(按氯强油搽剂制备方法制备，不含泼尼松和氯霉素，临时配制)。
 

　　1.2 、实验动物

　　C57BL/6/ICR小鼠，体质量(20±2)g，雌雄各半，由湖北医药学院动物实验中心提供，实验动物许可证号SCXK(鄂)2016-0008，实验动物合格证号SCXK(鄂)2016-0031。实验场所:湖北医药学院动物实验中心。

　　2、 方法

　　2.1、 氯强油搽剂对DNCB致迟发型变态反应的抑制作用[5]

　　取健康小鼠84只，随机分为7组，分别为氯强油搽剂高剂量组、氯强油搽剂中剂量组、氯强油搽剂低剂量组、莫米松乳膏组、模型对照组、基质对照组(不含氯霉素、泼尼松的基质组)、空白对照组，每组各12只，雌雄各半。将每组小鼠腹部剃毛，左耳廓给予相应药物。给药方法:空白对照组小鼠左耳涂搽生理盐水0.05 m L/cm2，模型对照组小鼠左耳涂搽生理盐水0.05 m L/cm2，基质对照组小鼠左耳涂搽氯强油搽剂基质0.05 m L/cm2，莫米松乳膏组小鼠左耳涂搽莫米松乳膏0.05 g/cm2，氯强油搽剂高、中、低剂量组分别左耳涂搽相应浓度的氯霉素泼尼松擦剂0.05 m L/cm2。除空白对照组外，其他6组小鼠在第1次给药24 h后，在腹部剃毛处给予DNCB丙酮溶液(5%)0.05 m L/cm2致敏，第2天再给药1次增强，第6天给予DNCB丙酮溶液(5%)0.05 m L/cm2致敏1 h后，每组小鼠左耳内外两面都均匀涂抹DNCB(5%)0.05 m L/cm2丙酮溶液强化致敏，剂量为20μL/cm2。最后一次强化致敏1 h后处死小鼠，左右耳对应部位分别用直径6 mm的打孔器打取相同面积的耳片，称取双耳片质量，计算耳肿胀度[耳肿胀度=左耳质量(mg)-右耳质量(mg)];依法摘取小鼠胸腺，称重，计算胸腺指数[胸腺指数=胸腺质量(mg)/体质量(g)×10];依法摘取小鼠脾脏，称重，计算脾脏指数[脾脏指数=脾脏质量(mg)/体质量(g)×10)]。

　　2.2、 氯强油搽剂对磷酸组织胺致痒阈的测定[6]

　　取合格小鼠60只，随机分为6组，每组10只，雌雄各半，分别为氯强油搽剂的高、中、低剂量组、莫米松乳膏组(阳性对照组)、模型对照组(生理盐水组)、空白对照组(不含氯霉素、泼尼松的基质组)。实验前24 h，将各组小鼠左后足背剃毛，氯强油搽剂的高、中、低剂量实验组小鼠分别给予相应浓度的氯强油搽剂0.05 m L/cm2;模型组给予生理盐水0.05 m L/cm2;莫米松乳膏组给予莫米松乳膏0.05 g/cm2;空白对照组给予氯强油搽剂基质0.05 m L/cm2。实验前，取零号砂纸磨擦实验动物左后足剃毛部位，磨擦面积约1 cm2，磨擦程度以表皮有轻度出血、轻度损伤为度，备皮成功，每只实验动物在皮损部位滴加磷酸组织胺溶液，浓度为0.01%，用量为每只0.05 m L，随后每5 min给予磷酸组织胺溶液一次，剂量依次按0.01%、0.02%、0.03%递增至0.10%，实验时注意观察动物表现，待小鼠扭头舔左后足时停止给药，所用磷酸组织胺溶液的总剂量既为致痒阈。

　　2.3、 统计学分析

　　应用SPSS13.0软件，计量资料以表示，多组间比较采用方差分析，成对组间结果分析应用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　3 、结果

　　3.1、 氯强油搽剂对DNCB所致小鼠迟发型变态反应抑制作用

　　DNCB可引起除空白对照组以外其他各组小鼠耳肿胀度显着增加，氯强油搽剂高、中、低剂量组耳肿胀度呈递减趋势，各剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);在胸腺指数、脾脏指数中，高、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验结果显示，氯强油搽剂局部外用能显着抑制DNCB诱发的小鼠迟发型变态反应。见表1。

　　表1 氯强油搽剂对DNCB所致小鼠迟发型变态反应的抑制作用

　　注:#与模型对照组比较，P<0.05;*与基质对照组比较，P<0.05

　　3.2、 氯强油搽剂对小鼠磷酸组织胺致痒阈的影响

　　氯强油搽剂各剂量组的磷酸组织胺致痒阈高、中、低剂量组呈递减趋势，三组的致痒阈与模型组和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);氯强油搽剂高剂量组与莫米松乳膏组比较差异无统计学意义(P>0.05)，中、低剂量组与莫米松乳膏组比较差异有统计学意义(P<0.05)。氯强油搽剂高、中、低剂量组对小鼠磷酸组织胺致痒阈具有不同程度的提升效应。见表2。

　　表2 氯强油搽剂对小鼠磷酸组织胺致痒阈的影响

　　注:#与模型对照组比较，P<0.05;*与空白对照组比较，P<0.05

　　4、 讨论

　　氯强油搽剂对DNCB诱导的小鼠迟发型变态反应具有显着的抑制作用，可提升磷酸组织胺致痒阈，这与氯强油搽剂含泼尼松和氯霉素密切相关，糖皮质激素与抗生素联合应用，可产生叠加抗过敏及抗炎的效应，能抑制组胺、毒性物质的形成与释放[7]。氯强油搽剂可能通过抑制组胺的释放抑制小鼠迟发型变态反应，也可能通过抑制N-型钙通道，阻断小鼠神经传导而对瘙痒产生抑制作用。

　　迟发型变态反应是由特异性致敏效应T细胞介导的细胞免疫应答的一种类型，T淋巴细胞产生大量IL-2反作用于中枢免疫器官，胸腺T淋巴细胞诱导早期T淋巴细胞向CD8+单阳性细胞转化，使凋亡的双阳性细胞减少，进而使胸腺增重，胸腺指数变大。大量初始T淋巴细胞同时识别特异性变应原及免疫相关分子发生活化效应，产生包括IL-2在内的多种淋巴因子，刺激CD4+T淋巴细胞大量增殖，造成相应的脾脏重量增加，脾脏指数升高[8]。在小鼠体内，绝大多数蛋白质抗原的迟发型变态反应均可经CD4+T细胞被动转移。皮肤源性瘙痒是由组胺敏感性的无髓C类神经纤维进行传导的，在湿疹、特异性皮炎等皮肤疾病的病理过程中，小鼠迟发型变态反应所释放的炎症介质也与皮肤瘙痒的产生密切相关[9,10]。

　　氯强油搽剂是在20世纪90年代初由我院药学部与皮肤科专家共同拟定的一个医院协定处方制剂，随着制剂的发展、管理的规范，将其申报为医院制剂。该制剂的分散介质为清鱼肝油，还含有一定量的蓖麻油，制备过程中经过超声波的空化效应[11]，使难溶于乙醇的泼尼松被粉碎成极小的微粒分散于油性介质中，形成油性搽剂，具有黏附性，用药后药物能长时间与皮损部位接触，形成油膜防护层，防止药物及皮肤水分流失，有效发挥治疗作用。迟发型(Ⅳ型)变态反应一般在接触抗原24 h后出现。氯强油搽剂对迟发型变态反应的药理作用研究显示，氯强油茶剂对迟发型变态反应具有良好的治疗作用，提示在临床可用于蚊虫叮咬、隐翅虫皮炎等具有迟发型变态反应特征皮肤损伤的治疗。

　　参考文献

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