济川养生驻颜不老方治疗肾虚型颈椎病的药效学分析

　　济川养生驻颜不老方( JYZBF) 出自黄济川先生的临床效验方,由冬虫夏草、鹿茸、红参、仙茅、老龟板、山茱萸等数十味药材组成,具有填精补髓、益阴扶阳、强筋壮骨、除皱消斑、增强免疫、增强活力之功效,该方为补肾良方.现代中药验方特别是补肾方已应用于老年肾虚型颈椎病、气虚血淤肾虚型颈椎病的治疗[1 -2].JYZBF 可用于中医辨证为肾虚型人群的养生保健或疾病预防,还可用于肾虚型导致的各类疾病的治疗,成都肛肠专科医院将其广泛应用于治疗肾虚型颈椎病患者,疗效显着.现选择大鼠肾虚型颈椎病模型[3],进行该方的药效学实验研究.

　　1 实验部分

　　1. 1 仪器、试药与动物

　　CKX31 型光学显微镜 ( 日本奥林巴斯) ; SN -697 型全自动双探头放射免疫 γ 计数器( 上海原子核研究所日环仪器一厂) .雌二醇( E2) 放射免疫分析药盒( 北京北方生物技术研究所) ; 乙二胺四乙酸( EDTA) ( 成都市科龙化工试剂厂) ; 济川养生驻颜不老方药酒( 成都肛肠专科医院医院) ; 其余试剂为分析纯.♀SPF 级 Wistar 大鼠[四川省医学科学院实验动物研究所,合格证号: SCXK( 川) 2008 - 24]30 只,体重 200 ± 10 g.

　　1. 2 方法与结果

　　1. 2. 1 药物的制备 准确量取济川养生驻颜不老方药酒,用生理盐水稀释 3 倍,制成酒精度为 12 的供试药液( 10 mL 相当于原生药材 0. 33 g) .

　　1. 2. 2 大鼠肾虚型颈椎病模型的建立 采用动静力失衡大鼠椎间盘退变模型复合去卵巢肾虚模型构建肾虚型颈椎病模型[4].选择 20 只大鼠,ip 戊巴比妥钠( 30 mg·kg- 1) 麻醉,无菌下操作,经腰腹侧正中进入,分开腰部筋膜,分离暴露卵巢,结扎输卵管和周围血管后,摘除卵巢,同法摘除另一侧卵巢;将大鼠颈后部剪毛和清洁后,在颈背部正中纵向切口,长约 2. 0 ~2. 5 cm,切开皮肤后,横向切断颈夹肌和头、颈、寰最长肌,切除颈髂肋肌与头半棘肌,再依次切除棘上和棘间韧带; 术后缝合好切口,正常饲养 2 月后,即造成大鼠肾虚型颈椎病模型.

　　1. 2. 3 大鼠分组与给药 将 20 只模型大鼠随机均分为给药组和模型组,另取正常大鼠 10 只作为正常组.给药组大鼠分别于 8: 00、18: 00 ig 给予药液2 mL,模型组、正常组大鼠 ig 生理盐水 2 mL,连续15 d.

　　1. 2. 4 子宫及附件的形态和质量分析 大鼠用戊巴比妥麻醉后,取出子宫及附件,肉眼观察子宫及附件的形态、体积和大小.模型组较正常组的子宫体积变小,输卵管管径明显变细,表明造模成功,但与给药组比较,子宫及附件形态无明显变化.称取子宫及附件质量,正常组大鼠去除双侧卵巢后再称取子宫和附件的质量,每组随机取 8 个样本.表 1 显示: 模型组与正常组大鼠差异显着,但与给药组比较无显着性差异,表明从子宫及附件质量分析,JYZBF药酒的药效并不显着.

　　1. 2. 5 血清中 E2的含量测定 大鼠用戊巴比妥麻醉后,腹主动脉采血 2 mL,摇匀放入水浴中 20 min,于 2 × 103r·min- 1离心 10 min,分离出血清置- 20 ℃ 保存,每组随机取 8 个样本用放射免疫法测定血清中 E2的含量.表 1 显示: 模型组大鼠较正常组的血清中 E2含量明显降低( P <0. 05) ,表明造模成功; 与模型组、正常组相比,给药组大鼠的血清中E2含量有显着性差异( P <0. 05) ,表明 JYZBF 药酒对大鼠肾虚型劲椎病大鼠具有治疗作用,表现为调节大鼠血清 E2含量达到或接近正常水平.

　　1. 2. 6 颈椎间盘的组织病理学观察 取大鼠的颈椎间盘,用配方甲醛固定 24 h.清水冲洗后,用20% EDTA 脱钙 4 周,脱水、透化、包埋,横断面切片,HE 染色.在光镜下观察椎间盘组织的病理学数据.颈椎间盘 HE 染色后,正常组大鼠的颈椎间盘结构清晰显示纤维环规则排列,中央大髓核清晰可见,钙化的软骨下分布有均匀的血管,透明软骨钙化清晰可见,细胞组织分布均匀; 模型组大鼠的已出现退行性改变,与正常组相比,椎间盘纤维环出现裂隙或者排列紊乱,髓核严重破坏或皱缩并不可见,钙化的软骨下分布血管不可见,细胞数量减少; 给药组大鼠的出现退行性改变,但较模型组轻微,中央大髓破坏或皱缩,钙化的软骨下血管可见.从颈椎间盘组织病理学的形态学分析,JYZBF 药酒的药效并不显着,但具有一定的改变组织供血的效果.

　　1. 2. 7 数据处理 采用 SPSS 10. 0 软件进行统计分析,数据用珋x ± s 表示,多组间比较采用 Anova 方差分析.

　　2 讨论

　　肾虚与颈椎病间存在密切的关系[5].临床上,性激素的水平在一定程度上可反应肾气的衰退,通常作为肾虚证的现代指标[6].文中选择肾虚型颈椎病模型大鼠为模型动物,从形态学和功能学两个方面进行效验方的初步功效学研究,济川养生驻颜不老方可显着改善肾虚型颈椎病模型大鼠的功能学指标,但对形态学指标改善不显着,对肾虚型颈椎病出现的子宫及附件形态萎缩、质量减轻、颈椎间盘结构破坏等指标的改善效果不显着,但对一些功能学指标如肾虚型颈椎病出现的雌二醇降低、颈椎间盘结构破坏导致的血管分布不均有显着改善作用.

　　参考文献:

　　[1] 江建春,李晨光,周泉,等. 益气化瘀补肾方对大鼠肾虚型颈椎病的作用机制[J]. 中西医结合学报,2008,6( 12) :1280 -1285.

　　[2] 王拥军,施杞,江建春,等. 益气化瘀补肾方治疗气虚血瘀肾虚型颈椎病大鼠的机制研究[J]. 中西医结合学报,2009,7( 1) : 53 -58.

　　[3] 施杞,郝永强,彭宝淦,等. 动静力平衡失调与颈椎病 - 颈椎病动物模型的实验研究[J]. 上海中医药大学学报,1999,13( 1) : 52 -56.

　　[4] 江建春,李晨光,梁倩倩,等. 大鼠肾虚型颈椎病模型的建立[J]. 中西医结合学报,2008,6( 10) : 1034 -1039.

　　[5] 张宜,施杰,李福安,等. 温针治疗肾虚型颈椎病的远红外热断层扫描研究[J]. 中医临床研究,2011,3( 5) : 8 -9.

　　[6] 杨俊姝,郝建新. 性激素与肾虚证"实质"的相关性研究进展[J]. 湖北中医学院学报,2008,10( 3) : 60 -62.