医学技术论文
十二烷基磺硫酸钠-琼脂糖凝胶（SDS-AGE）电泳和琼脂糖凝胶电泳技术是近几十年发展用于分离非浓缩性蛋白尿进而鉴别生理性和病理性蛋白尿的方法，可对肾脏病理定位及程度判断。我科2013~2015在临床上采用SDS-AGE电泳法和琼脂糖凝胶电泳法对68例尿液蛋白定性和尿微量蛋白定量阳性标本进行非浓缩尿蛋白电泳，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 标本来源：68例患者尿标本选用尿液蛋白定性（+~+++）和尿微量蛋白定量（58±10mg/L）阳性标本进行同时检测。
1.2 仪器与材料：SDS-PAGE电泳和琼脂糖凝胶电泳采用HYDRAYS（法国Sebia）半自动电泳仪，配套试剂及标准带卡板由Sebia公司提供。Uritest-300尿液自动分析仪（中国桂林）及Quick Road-67107快速免疫比浊分析仪（芬兰orion），所用试剂及试纸条均为原装。
1.3 方法：①琼脂糖凝胶电泳：取10μl尿液标本于加样梳上，在琼脂糖凝胶板上电泳，分离，干燥电泳后，染色（酸性紫罗兰），脱色，烘干完毕后，扫描，电脑编辑电泳曲线打印最终结果。
②SDS-AGE电泳：取20μl SDS溴酚蓝稀释液加入80μl已处理尿液，混匀，吸取5μl加入凝胶加样孔中（5孔/板），扩散10min,在十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶上电泳，分离，干燥电泳完毕后，染色（酸性紫罗兰），脱色，扫描，电脑编辑电泳曲线打印最终结果。尿液蛋白定性采用尿干化学法及尿微量蛋白定量采用透射比浊法，上述试验均按操作说明书进行检测。
1.4 结果判定：SDS-AGE电泳区分生理性和病理性蛋白尿类型：以凝胶膜片正极和负极之间1/2（膜片中间处）的白蛋白区带为界限，白蛋白上方到正极为小分子，白蛋白下方到负极为大分子。白蛋白两侧为大分子及小分子。评估标本中蛋白带的分子量范围；将尿样本中的蛋白区带与标准带卡板位置比较。琼脂糖凝胶电泳：以蛋白质带电荷量来区分，白蛋白带负电荷最高，因此泳动在凝胶的前端，其余球蛋白依次为：α1、α2、β、γ来区别。同时采用琼脂糖凝胶尿蛋白电泳扫描A和γ百分含量结果及γ/A.
判断：选择性蛋白尿γ/A≤10%,非选择性蛋白尿γ/A≥50%.尿液蛋白标准带：以（TP,A及γ/A正常）血清稀释50倍作为标准质控品。
2 结果
68例尿液蛋白定性（+~+++）和尿微量蛋白定量（58±10mg/L）患者，SDS-AGE电泳和琼脂糖凝胶电泳试验结果为混合性8例（11.8%），肾小球性蛋白尿15例（22.1%），肾小管性蛋白尿28例（41.2%），生理性蛋白尿7例（10.3%），溢出性蛋白尿2例（2.9%）及假阳性蛋白尿8例（11.8%）.SDS-AGE凝胶膜片尿蛋白电泳图谱，见图1;琼脂糖凝胶膜片尿蛋白电泳图谱，见图2;琼脂糖凝胶尿蛋白 电 泳 扫 描A和γ百 分 含 量 结 果 及γ/A（%,x珚±s），见表1.
3 讨论
SDS-AGE电泳是以SDS与蛋白质结合，形成带负电荷SDS-蛋白质复合物，消除了原来尿蛋白分子中的电荷差异，并利用琼脂糖凝胶的选择性成分及多孔性，根据蛋白质各组分子量大小不同来分离蛋白尿[1,2].而琼脂糖凝胶电泳是以在碱性环境下，尿液蛋白以带负电荷量多少来分离[3,4].蛋白尿是指尿中蛋白质排泄增多称为蛋白尿，可分生理性和病理性两类[1].图1显示：（5泳道）白蛋白出现为生理性蛋白尿；（4泳道）白蛋白，α1微球蛋白33KD及溶菌酶15KD为肾小管性蛋白尿；（3泳道）白蛋白，转铁蛋白80KD,IgA165KD出现为肾小球性蛋白尿；（2泳道）白蛋白，α1微球蛋白33KD,溶菌酶15KD,转铁蛋白80KD,IgG160KD及IgA165KD出现为混合性蛋白尿；（1泳道）白蛋白，转铁蛋白80KD,IgG160KD,IgA165KD,α1微球蛋白33KD,溶菌酶15KD及本周氏蛋白游离轻链10KD出现为混合性蛋白尿伴游离轻链[2,5-8].图2及表1显示：（2,3泳道）肾小球性蛋白尿，白蛋白，α1（α1-抗胰蛋白酶），β（转铁蛋白）及γ（免疫球蛋白）出现，选择性蛋白尿，以中分子、大分子为主；（4泳道）肾小管性蛋白尿，清蛋白，α2（α2-巨球蛋白），β（β2-微球蛋白），γ（免疫球蛋白）出现，非选择性蛋白尿，以中分子和小分子为主；（8泳道）混合性蛋白尿，白蛋白，α1（α1-抗胰蛋白酶），α2（α2-巨球蛋白），β（浓转铁蛋白及β2-微球蛋白），γ（免疫球蛋白）出现，非选择性蛋白尿，以高分子、中分子及小分子为主；（5泳道）溢出性蛋白尿，清蛋白，γ（本周氏蛋白轻链）出现，非选择性蛋白尿，以中分子及小分子为主；（6,7泳道）生理性蛋白尿，清蛋白出现；（9泳道）假阳性尿，无区带出现[1-4].从上述两种电泳的原理，操作方法及结果比较可知：
SDS-AGE电泳效果较好，可对尿蛋白电泳后按各组蛋白质亚基分子量大小排列，评估标本中微量蛋白分子量范围，由此可直观地反映肾小球和肾小管早期损伤部位，可对微量尿蛋白及正在治疗过程中的肾病作动态分析，具有很高的价值。并在一定意义上相当于肾组织活检[2,8].而琼脂糖凝胶电泳受尿中各种因素干扰，尿蛋白区带未必能准确到相应位置上，可能有迁移影响，如需诊断还需SDS-AGE电泳来鉴定。个人认为，两种试验检测敏感性好，诊断符合率高，方法简便、省时、分辨率高、胶片可保存等优点，应加强其在临床中的应用。
【参考文献】
[1]魏明竟，余善丁.临床检验学[M].北京：科学技术文献出版社，1994.148-160.
[2]杨辛，张庆五.尿蛋白电泳区分生理性和病理性蛋白尿的实验室分析研究[J].现代医学检验杂志，2006,21（5）:58-59.
[3]杨辛，张庆五.用琼脂糖凝胶膜片作介质进行非浓缩尿蛋白电泳[J].现代医学检验杂志，2008,23（1）:105-106.
[4]沈建江，罗君.尿蛋白电泳在肾脏疾病诊断中的临床应用[J].中国医药指南，2012,9（6）:345-347.
[5]石同才，郭海龙.肾性蛋白尿的实验室诊断与鉴别诊断[J].实用医技杂志，2012,19（8）:23-24.
[6]沈霞.电泳技术的现状和发展[J].中华检验医学杂志，2010,33（11）:120-121.
[7]刘彩红，郭志鹏.SDS-AGE在糖尿病损伤诊断中的应用[J].山东医药，2014,29（11）:245-247.
[8]吴宇芳，关晓东.肾脏病患者尿蛋白测定及其病理活检对比分析[J].现代预防医学，2007,34（4）:56-58.