神农香菊的根尖压片技术探析

　　神农香菊 （Dendranthema indicum var. aromaticum） 是菊科菊属野生种中新资源植物 , 为野菊的变种，本文主要研究神农香菊的根尖压片技术。

　　1 试验材料

　　本实验以栽植到东北林业大学苗圃的神农香菊为研究材料，取其地上部分进行扦插繁殖，取根尖进行试验。

　　2 试验方法

　　剪取植株的茎段，插于自制的水培箱中，放在恒温培养箱中水培生根，温度控制在 25℃，等到根长为 1~2cm 时备用。

　　（1）预处理：上午 9:00~10:00 或下午 14:00~15:00 切取根尖2~3mm,每一株选择健壮根尖5~8个，放于1.5ml的离心管中，用 0.002M 的 8- 羟基喹啉、冰水混合物放在 4℃冰箱中分别预处理 7h、12h、24h,筛选出最适合的预处理试剂和预处理时间。

　　（2）固定：预处理结束后，弃去预处理液，加入固定液（无水乙醇：冰醋酸 =3:1），放置在 4℃冰箱中固定 24h.

　　（3）解离：弃去固定液，用蒸馏水反复冲洗 2~3 遍，加入1mol/L HCL 溶液，置于 60℃水浴锅中分别解离 4min、6min、8min、10min,选出最适合的解离时间。

　　（4）染色：弃去解离液，用蒸馏水反复冲洗 2~3 遍，分别用卡宝品红、醋酸洋红染色液染色 30min,选出最适合的染色剂。

　　（5）压片：将染色后的植物根尖放在载玻片上，用滤纸吸干染料，用刀片切掉根冠，切取 1mm 根尖放到另一载玻片上，滴加适量 45% 的醋酸，用镊子夹取盖玻片，让盖玻片的一侧先接触醋酸，在一角垫上双面刀片，然后轻轻盖上盖玻片；用竹竿轻敲盖片，使盖片下的细胞分散开，成雾状，用力不要过大，避免使染色体断裂或丢失；把载玻片放于酒精灯外焰上加热，目的是使细胞膨胀，染色体分散，烤后立即用拇指垫滤纸压片，使细胞裂开，染色体从细胞质中出来。

　　（6）镜检：在 10×100 倍显微镜下，选择中期分裂相较好的 20 个细胞，统计染色体数目，分析神农香菊的倍性。

　　3 结果与分析

　　3.1 不同预处理条件对根尖压片的影响

　　由表 1 可知，8- 羟基喹啉和冰水混合物两种预处理液对神农香菊根尖染色体形态的观察影响显着，用冰水混合物预处理时，任何预处理时间都不能看到清楚的染色体形态，而用 8- 羟基喹啉在任何预处理时间下，均能看到变短加粗的染色体，其中以预处理7h时效果最好，染色体变短变粗，分散效果好。因此，选择 8- 羟基喹啉预处理 7h 为神农香菊根尖染色体观察的最佳预处理条件。

　　3.2 不同解离时间对根尖压片的影响

　　由表 2 可知，用 1mol/L HCL 在 60℃水浴锅中解离 4、6min时，细胞壁不能被破坏，存在于中层的果胶物质和一些细胞质不能很好的分解，细胞重叠成团，不易扩散；解离 10min 时，则细胞壁结构被破坏，根尖过软，压片时容易造成染色体流失，不易观察；解离 8min 对于神农香菊根尖来说是最适合的，此时根尖软化程度刚好，压片容易，细胞分散均匀，易染色。

　　3.3 不同染色剂对根尖压片的影响

　　基于以上的处理条件下，卡宝品红染色剂更适合神农香菊染色体进行染色。醋酸洋红对神农香菊染色体进行染色时，整个细胞全呈红色，染色体形态和数目不能清楚的分辨；而用卡宝品红对神农香菊染色体进行染色时，细胞质仅显示浅紫色，染色体则显示深紫色，二者能够明显的区分，易于进行染色体数目和形态的观察。

　　4 结论

　　通过上述研究，我们认为选择 8- 羟基喹啉预处理 7h 为神农香菊根尖染色体观察的最佳预处理条件；解离 8min 时根尖软化程度刚好，压片容易，细胞分散均匀，易染色。用卡宝品红对神农香菊染色体进行染色时，细胞质仅显示浅紫色，染色体则显示深紫色，二者能够明显的分，易于进行染色体数目和形态的观察。

　　参考文献：
　　[1] 何淼 , 董春燕 , 冯博等 . 神农香菊组织培养和植株再生 [J]. 东北林业大学学报 ,2010,38（7）：64-66.
　　[2] 孙明 , 张启翔 . 神农香菊花蕾的组织培养 [J]. 植物生理学通讯 ,2005,41（3）：348.