应用化学论文
1 实验材料
平菇深层发酵产纤溶酶、胰酶、酪蛋白、人血纤维蛋白原、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、0.02mol/L磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲溶液、0.02m ol/L 碳酸钠 - 碳酸氢钠缓冲溶液、0.02m ol/LNa2HPO4- NaOH缓冲溶液、0.02mol/L氯化钾溶液- NaOH缓冲溶液。
2 实验方案
2.1 平菇纤溶酶最适作用 pH 的确定
在用缓冲溶液配制的不同pH 值纤维蛋白平板上，用微量取液器分别加酶样10μL,置37℃恒温箱中保温6h 后，测量透明溶圈直径，并计算相对酶活力.
2.2 平菇纤溶酶 pH 稳定性
取适当体积的平菇纤溶酶液与等体积的不同pH值缓冲溶液混合后，置37℃恒温箱中保温 1h、3h、5h、7h、9h、11h、16h、24h 测定酶活，用PBS 做对照。
2.3 平菇纤溶酶最适作用温度
取酶液 10μL点到血纤维平板上，分别置不同温度保温 6h 后，测定残余酶活。
2.4 平菇纤溶酶温度稳定性
取适量酶样分别置不同温度条件下作用，在0.5h,1h,2h,4h 时取样迅速冷却，取10μL点到血纤维平板上置 37℃恒温箱中 6h,测定残余酶活。
2.5 金属离子对平菇纤溶酶活性的影响
选取6 种金属离子，分别为 Cu2+、Co2+、Fe3+、Fe2+、Mg2+、Na+.将不同浓度的金属离子溶液与纤溶酶液等体积混合，在37℃保温18h 后取 10μL混合液点平板，37℃保温 6h 后测定酶活。用双蒸水代替金属离子溶液作对照。
3 实验方法
3.1 平菇纤溶酶最适作用 pH 的确定
将平菇纤溶酶在不同pH值血纤维蛋白平板中37℃保温6h 后测酶活力.结果是平菇纤溶酶在pH值为7.2~7.8 的范围内，相对酶活稳定在54%,表现出较好的作用效果。其最适pH值为7.4.
3.2 平菇纤溶酶 pH 稳定性
通过对1h、2h、3.5h、5h、24h 的相对酶活的统计，该酶在 pH为5.0~9.0 范围内比较稳定。
3.3 平菇纤溶酶最适作用温度
取适量酶样分别置不同温度条件下作用，取酶样10μL点到血纤维平板上置37℃恒温箱中6h 测定残余酶活，可知平菇纤溶酶最适作用温度为45℃，在 34 ℃~45℃均表现出较好作用效果，该范围涵盖人体正常生理体温（37℃），具有开发为溶栓剂药物的潜力。在18℃~45℃范围内随温度的升高酶反应速度加快，酶活力升高；温度高于45℃，酶活力下降。
3.4 平菇纤溶酶温度稳定性
取适量酶样分别置不同温度条件下作用，保存 0.5h、1h、2h、3h,4h 取酶样 10μL点到血纤维平板上置 37℃恒温箱中 6h 测定残余酶活，该酶在31℃至 45℃之间相对酶活稳定在 60% ~80% 之间，而在高温时失活较快。
3.5 金属离子对平菇纤溶酶活性的影响
金属离子溶液和平菇纤溶酶纯酶液各取20μL混匀，根据金属离子对纤溶酶活性的影响，对实验数据进行汇总得出在离子浓度为100m m ol/L时，Na+、Mg2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Co2+的相对酶活分别为 115.5786% 、 113.0103% 、 58.63971% 、 33.59125% 、 0% 、75.8416%,并统计 1m m ol/L、10m m ol/L的数据后可知随着离子浓度增大时，Cu2+、Fe3+、Co2+、Fe2+离子对其产生抑制作用；Na+、Mg2+等离子对酶有激活作用。当离子浓度达到100mmol/L时，Fe3+离子能完全抑制纤溶酶的活性；Na+对酶的激活作用最为明显.
4 结论
本文利用生物化学等实验手段对平菇利用深层发酵产胞外纤溶酶活性物质进行部分酶学性质的研究，结论如下：
1） 此平菇纤溶酶的最适作用 pH 值为 7.4;在 pH5.0~9.0 范围内该平菇纤溶酶的稳定性很好.
2） 此平菇纤溶酶的最适作用温度为 45℃，在 45℃以上时酶活下降较快，在31~45℃时该酶较稳定，由此可见该酶在高温时不稳定，但在人体正常体温条件下可保持稳定。
3） 实验选用的离子在离子浓度最大时 Cu2+、Fe3+、Co2+、Fe2+离子对其产生抑制作用，Na+、Mg2+等离子对酶有很明显的激活作用。
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