中文摘要
鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的一种传染病，临床表现为急性败血症、肠炎、气囊炎、心包炎、肝周炎等。近年来随着规模化养殖的发展，该病发病率逐年增高，在世界范围内，给养禽业造成严重经济损失。目前治疗鸡大肠杆菌病主要是依靠抗生素，但随着抗生素的滥用，畜禽等动物性食品安全受到了极大影响，耐药性也不断增加。现代药理学研究证明中药在抗菌、抗病毒等方面具有重要作用，且可以抑制细菌耐药性的产生，这对于解决致病性大肠杆菌严重的耐药性问题、有效防治畜禽感染性疾病具有重要意义。
小柴胡汤，首见于东汉医家张仲景的《伤寒杂病论》，由柴胡、黄芩、半夏、党参、生姜、大枣组成，具有清热解毒、燥湿止痢的功效。目前对小柴胡汤抑制鸡大肠杆菌病作用尚未见报道，鉴于此，本研究建立了一个稳定的鸡大肠杆菌病模型，探究小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的防治作用及安全性研究，为防控鸡大肠杆菌病和小柴胡汤复方中药开发提供数据支持。
通过胸肌注射108cfu/m L的菌液0.4 m L，建立鸡大肠杆菌病模型，鸡群死亡率达到60%。攻毒雏鸡会产生全身性的病变和脏器损伤；在攻毒后36 h，鸡群的体温显着下降，死亡率最高，且在此时发现不同脏器菌载量和血液中细菌含量达到峰值；雏鸡的生化指标AST和ALT在攻毒后48 h达到峰值，且显着高于空白组。
在成功建立鸡大肠杆菌病模型的基础上，对小柴胡汤的有效剂量进行筛选。通过使用4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg、0.25 g/kg剂量的小柴胡汤对模型雏鸡进行治疗。结果表明，各剂量给药组雏鸡临床症状均有不同程度的好转，4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg剂量组均取得较好疗效，经多方面考量，最终选择1 g/kg作为小柴胡汤的临床推荐剂量。为进一步验证小柴胡汤对于鸡大肠杆菌病的治疗作用，进行临床试验，将160只12日龄雏鸡随机分为8组，分别为空白对照组、模型组、小柴胡汤2 g/kg组、小柴胡汤1 g/kg组、小柴胡汤0.5 g/kg组、预防组（1 g/kg）、同时给药组（1 g/kg）和西药组。结果显示：小柴胡汤各剂量组对鸡大肠杆菌病的疗效良好，小柴胡汤2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg组雏鸡存活率可达90%以上，均高于西药治疗组。病鸡生长发育状况良好，小柴胡汤给药组可以显着提高病鸡增重水平，且以预防组增重效果最佳；高剂量的小柴胡汤可以极显着降低生化指标和血清炎性因子分泌；小柴胡汤各给药组均可以抑制由鸡大肠杆菌病引起的各器官指数升高；且与模型组相比，各给药组均可以降低脏器中的细菌载量。
最后对小柴胡汤对鸡的安全性进行了评估，在上述试验的基础上，以临床推荐剂量的1倍、5倍、10倍剂量的小柴胡汤对雏鸡进行给药，连续用药7天后，继续观察7天。期间观察各组鸡的临床表现，检测鸡的血液学指标、血液生化指标和病理组织学变化等，对小柴胡汤的安全性进行综合评价。结果显示1倍、5倍、10倍剂量的小柴胡汤未能引起雏鸡死亡和其它毒性反应，各项血液学指标和血清生化指标未见异常，病理组织学观察各脏器也未见不良影响。表明小柴胡汤在临床上较高的安全性。
综上所述，本试验建立了一个稳定的鸡大肠杆菌病模型，通过该模型验证了小柴胡汤可以有效预防和治疗鸡大肠杆菌病，证明小柴胡汤在临床上有较高的安全性。结果表明，小柴胡汤对鸡大肠杆菌病具有明显的临床防治效果和较高的安全性，在防治鸡大肠杆菌病具有良好的应用价值。
关键词： 鸡大肠杆菌病；小柴胡汤；治疗效果；安全性评价。
Abstract
Chicken colibacillosis is an infectious disease caused byAvianpathogenicEscherichia coli. Its clinical manifestations are acute septicemia, enteritis, ballooninflammation, pericarditis, pericarditis and so on. In recent years, with the developmentof large-scale farming, the incidence of the disease has increased year by year, which hascaused serious economic losses in the poultry industry all over the world. At present, thetreatment of chicken colibacillosis mainly depends on antibiotics, but with the abuse ofantibiotics, animal food safety such as livestock and poultry has been greatly affected,and drug resistance is also increasing. Modern pharmacological studies have proved thattraditional Chinese medicine plays an important role in antibacterial and antiviral, andcan inhibit the production of bacterial drug resistance, which is of great significance forsolving the serious problem of drug resistance of pathogenic Escherichia coli andeffectively preventing infectious diseases of livestock and poultry.
Xiaochaihu Decoction was first seen in the Theory of typhoid and MiscellaneousDiseases written by Zhang Zhongjing, a physician of the Eastern Han Dynasty. It iscomposed of Bupleurum, Scutellaria baicalensis, Pinellia ternata, Codonopsis pilosula,Ginger and Jujube. At present, the inhibitory effect of Xiaochaihu Decoction on chickencolibacillosis has not been reported. In view of this, this study established a stable modelof chicken colibacillosis to explore the prevention and control effect and safety ofXiaochaihu Decoction on chicken colibacillosis, so as to provide data support for theprevention and control of chicken colibacillosis and the development of compoundtraditional Chinese medicine with Xiaochaihu Decoction.
The model of chicken colibacillosis was established by injecting 108cfu/m L ofbacteria solution 0.4 m L, into the chest muscle, and the mortality rate of chickens reached60%. At 36 hours after challenge, the body temperature of chickens decreasedsignificantly, and the mortality was the highest, and it was found that the bacterial load indifferent organs and the content of bacteria in blood reached the peak at this time, and thebiochemical indexes AST and ALT reached the peak at 48 hours after challenge, which were significantly higher than those in the blank group.
On the basis of successful establishment of chicken colibacillosis model, theeffective dose of Xiaochaihu Decoction was screened. The model group chickens weretreated with Xiaochaihu Decoction at the dose of 4 g/kg, 2 g/kg, 1 g/kg, 0.5 g/kg and 0.25g/kg. The results showed that the clinical symptoms of chickens in each dose group wereimproved in varying degrees, and 4 g/kg, 2 g/kg, 1 g/kg and 0.5 g/kg groups all achievedgood curative effect. After various considerations, 1 g/kg was selected as therecommended clinical dose of Xiaochaihu Decoction. In order to further verify thetherapeutic effect of Xiaochaihu Decoction on colibacillosis in chickens, 160 12-day-oldChicken were randomly pided into 8 groups: blank control group, model group,Xiaochaihu Decoction 2 g/kg group, Xiaochaihu Decoction 1 g/kg group, XiaochaihuDecoction 0.5 g/kg group, prevention group (1 g/kg), simultaneous administration group(1 g/kg) and western medicine group. The results showed that each dose of XiaochaihuDecoction had a good effect on chicken colibacillosis. The survival rates of chicks in 2g/kg, 1 g/kg and 0.5 g/kg groups was more than 90%, which was higher than those inwestern medicine treatment group. The growth and development of chickens is good,which can significantly improve the weight gain level of diseased chickens, and theweight gain effect of prevention group is the best; high dose of Xiaochaihu Decoction cansignificantly reduce biochemical indexes and serum inflammatory factor secretion;Xiaochaihu Decoction can inhibit the increase of organ index caused by Escherichia coli,and compared with the model group, each administration group can reduce the bacterialload in organs.
Finally, the safety of Xiaochaihu Decoction to chickens was evaluated. On the basisof the above experiments, the chickens were given Xiaochaihu Decoction with 1 time, 5times and 10 times of the recommended clinical dose. after continuous administration for7 days, the chickens were observed for 7 days. During this period, the clinicalmanifestations of each group of chickens were observed, and the hematological indexes,blood biochemical indexes and histopathological changes of chickens were detected, andthe safety of Xiaochaihu Decoction was comprehensively evaluated. The results showedthat the 1-, 5-and 10-fold doses of Xiaochaihu Decoction could not cause chicken deathand other toxic reactions, and no abnormal serological and serum biochemical indexes were found, and no adverse effects were found in various organs under histopathologicalobservation. It shows that Xiaochaihu Decoction is safe in clinic.
To sum up, this experiment established a stable model of chicken colibacillosis,which verified that Xiaochaihu Decoction can effectively treat chicken colibacillosis, andproved that Xiaochaihu Decoction has high clinical safety. Xiaochaihu Decoction hasobvious clinical control effect and high safety on chicken colibacillosis, and has goodapplication value in the prevention and treatment of chicken colibacillosis.
Keywords: Chicken colibacillosis; Xiaochaihu Decoction;Therapeutic effect; Safetyevaluation.。
前 言
鸡大肠杆菌病是目前养鸡业中死亡率高、危害极大的一种疾病，在禽业生产中广泛发生，且该病经常与其他病并发或者继发，故防治较难。尤其近年来，随着规模化、集约化养鸡业的蓬勃发展，鸡大肠杆菌病的发生率持续上升，在世界范围内对养鸡业造成严重的经济损失，成为禽类养殖最主要的疫病之一。
应用抗生素仍然是目前治疗鸡大肠杆菌病最有效的措施，但是由于临床生产中的盲目用药和不合理用药：如剂量使用不当，投药途径不当，不注意轮换用药等。使大肠杆菌耐药严重，导致治疗效果降低或者无治疗效果。所以，研发更加安全有效的药物已成为迫切需求，而中药因其无残留、不易产生耐药性的特点，越来越被人们所接受。
小柴胡汤由柴胡、黄芩、半夏、党参、生姜、大枣组成，首见于《伤寒论》，而在《鸡谱》中也有记载，可用于治疗鸡的疫病，由于目前尚未有目前对小柴胡汤抑制大肠杆菌作用的研究，也没有临床治疗的案例，故在本研究中对小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的有效性和安全性进行评价，为开发更加安全、有效的中药制剂防治鸡大肠杆菌病提供理论依据。
第一篇 文献综述
1、 鸡大肠杆菌病概述 。
鸡大肠杆菌病是一种由鸡致病性大肠杆菌局部或全身感染引起的急性或慢性传染病，由于感染鸡的日龄、抵抗力、大肠杆菌的致病性和感染途径不同，导致许多症状和不同病型的产生，是鸡类养殖的常见病和高发病。全球80%鸡大肠杆菌病是由鸡致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli，APEC）的流行血清型O1、O2、O18和O78引起的，感染后会造成鸡群死淘率增加，饲料转化率降低，雏鸡生长受阻，发育不良，产蛋鸡无产蛋高峰或产蛋高峰期时间较短等现象，给世界范围内养鸡业造成严重经济损失。
1.1、 病原研究。
大肠杆菌属革兰氏阴性短杆菌，两端钝圆，单个或成双存在，无芽孢，大多数菌株具有鞭毛和菌毛，能运动，通常无可见荚膜，但常有微荚膜。大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并可发酵葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖等产酸产气，在麦康凯琼脂培养基上呈红色菌落[1]。大肠杆菌抗原主要有O、K、H三种根据菌体抗原，可以将大肠杆菌分为若干血清型，根据鞭毛抗原（H）和荚膜抗原（K），再将之分为若干亚型[2]，构成了大肠杆菌丰富的血清型。目前为止已确定的大肠杆菌O抗原有173种，K抗原有80种，H抗原有56种，F抗原有17种，并且随着研究的深入，这些数字有可能逐年增加[3][4]。大肠杆菌在自然界中广泛存在，也是畜禽肠道的正常栖居菌，许多菌株无致病性，而且对机体有益，能合成B族维生素和维生素K供宿主利用，并对许多病原菌有抑制作用。大肠杆菌中一部分血清型的菌株具有致病性，当鸡体健康、抵抗力强时不致病，而当机体健康状况下降，特别是在应激情况下就表现出致病性，使感染的鸡群发病。
1.2、 流行病学。
目前致病性大肠杆菌的血清型众多，分为Ol、O2、O35、O78等60余种[5]，不同地区的优势血清型差异较大，且同一地区的流行优势血清型也并不完全相同。贾雪波等[6]研究结果表明，2016年在安徽、山东部分地区分离的大肠杆菌，主要的致病血清型仍然是O1、O2和O78，这与国内外的报道一致；杨立军等[7]在对福建省的150个分离菌株的血清型检测结果表明，大肠杆菌O1、O2和O78不是流行的优势血清型，表明大肠杆菌优势血清型存在地域差异；于学辉等[8]从四川、云南和重庆地区分离出的大肠杆菌优势血清型包括O76、O78、O92和O93。
大肠杆菌血清型众多，但是目前鸡大肠杆菌病疫苗所包含血清型种类却有限，不能达到预期的免疫效果，造成免疫失败[9]。发病鸡和带菌鸡是主要传染源，通过水平传播（消化道和呼吸道）和垂直传播（经卵传播），对于不同品种和不同日龄的鸡对本病易感性差异不明显。
鸡大肠杆菌病常与鸡的其他呼吸道疾病和支原体疾病相互继发促进，大肠杆菌作为动物肠道内的共生菌，能够通过与其他致病菌发生基因水平转移和基因重组而获得致病力[10]。自20世纪80年代起，鸡大肠杆菌病呈单纯感染，而在90年代后期则转变为混合感染。就目前国内情况看，大肠杆菌病主要分为原发性、诱发性、继发性3类感染。原发性鸡大肠杆菌病主要由APEC血清型决定，感染比例通常不超过45%；诱发性鸡大肠杆菌病通常是由支原体和沙门氏菌等感染雏鸡随后诱发鸡大肠杆菌病；继发性鸡大肠杆菌病以混合感染为主，主要包括与病毒性疾病如新城疫、传染性法氏囊炎和传染性支气管炎混合感染，或者与鸡痘、鸡念珠菌病、鸡传染性鼻炎混合感染。宿主鸡被其他病原体感染后抵抗力下降，随后环境中的大肠杆菌随病毒进入机体，致使机体感染发病[11]，进一步导致病情复杂化。
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1、鸡大肠杆菌病概述
2、鸡大肠杆菌病模型的研究
3、中药治疗鸡大肠杆菌病的现状.
第二篇 研究内容
第一章 鸡大肠杆菌病模型的建立
1、材料.
2、方法.
3、结果
4、讨论
5、小结.
第二章 小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的有效剂量筛选
2、方法
3、结果.
4、讨论
第三章 小柴胡汤防治鸡大肠杆菌病的作用研究
1、材料
2、方法
3、结果.
4、讨论.
5、小结.
第四章 小柴胡汤对鸡的安全性研究
1、材料
2、方法
3、结果
4、讨论，
5、小结.
结 论
通过中兽医理论指导，运用现代实验研究技术，通过建立动物模型并进行临床治疗实验，验证了小柴胡汤的有效性和安全性，得出以下结论：
1.通过胸肌注射的方式，对雏鸡进行人工接种108cfu/m L大肠杆菌菌液0.4 m L，可以成功建立典型且稳定的鸡大肠杆菌病模型。
2.使用4 g/kg、2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg、0.25 g/kg剂量的小柴胡汤治疗患病雏鸡，经综合疗效以及经济方面的考虑，选择1 g/kg作为临床推荐剂量。
3.通过灌服方式，连续以2 g/kg、1 g/kg和0.5 g/kg剂量小柴胡汤给药3天，可有效治疗鸡大肠杆菌病，存活率可分别达到100%、90%、90%，证明小柴胡汤对防治鸡大肠杆菌病具有良好的疗效。
4.通过灌服方式给药，连续7天以1 g/kg、5 g/kg、10 g/kg剂量对雏鸡灌服小柴胡汤，未能引起任何不良影响，表明小柴胡汤在临床上有较高的安全性。
参考文献.
