BTF3对卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用分析(2)

2.2细胞成像分析慢病毒转染后SKOV3细胞增殖情况将成功构建的shBTF3慢病毒载体转染入SKOV3后，用Celigo细胞成像仪连续检测5d.结果发现实验组SK-OV-3细胞的增殖速率受到显着抑制（图3），shBTF3组细胞与shCtrl组相比，增殖抑制明显，说明BTF3基因与SKOV3细胞的增殖能力显着相关。
　　

　　　

　　
       2.3流式细胞仪检测慢病毒转染后SKOV3细胞周期及凋亡情况shBTF3慢病毒成功感染5d后，对各组细胞分别进行检测。流式细胞仪对各组细胞周期分析显示，实验组处于G1期的细胞比例显着减少，处于S期的细胞显着增多，处于G2期的细胞无显着变化，故而提示BTF3基因与SKOV3细胞的周期分布显着相关，shBTF3能够抑制SKOV3细胞周期于G1期（P<0.05,图4）。流式细胞仪检测慢病毒转染后SKOV3细胞凋亡情况显示，与对照组相比，实验组发生凋亡的SKOV3细胞显着增加（P<0.05），故而提示BTF3基因能够促进SKOV3细胞的凋亡（图5）。
　　
　　2.4 MTT检测慢病毒转染后SKOV3细胞增殖情况将成功构建的shBTF3慢病毒载体转染入SK-OV3后，MTT增殖试验检测发现实验组SKOV3细胞的增殖速率受到显着抑制。提示BTF3基因与SKOV3细胞的增殖能力显着相关（图6）。
　　

　　　

　　　

　　3讨论

       如今，关于BTF3的研究大多是关于生物体或植物的研究，同时也有越来越多的证据显示BTF3的表达与许多肿瘤的发生、发展相关。Wang[5]等在大肠腺癌中的研究表明，BTF3在肿瘤中的表达较正常组织明显增加；而Odreman[6]等在人脑组织星形细胞瘤中寻找表达异常的基因时，也发现BTF3的表达明显增加。王大维[7]等通过免疫组织化学法测定结果表明食管鳞状细胞癌中BTF3表达明显高于正常组织。有研究认为，BTF3的表达水平可能对细胞周期检查点、细胞增殖是很重要的，进一步提示可能与人类肿瘤的发生和发展有着潜在的联系[8].
　　
　　即便如此，仍有较少关于BTF3在卵巢癌中作用机制的相关报道。卵巢癌是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一[9],由于其发病隐匿，缺乏有效的早期诊断方法，70%以上的患者初诊时已属晚期，治疗及预后效果极差，致死率居各类妇科恶性肿瘤首位[10].因此，探寻卵巢癌发生发展过程中的关键分子，对于开发卵巢癌靶向治疗药物具有非常重要的意义[11].本研究首先用RT-PCR技术检测证实了BTF3在卵巢癌细胞中呈高丰度表达，揭示了BTF3与卵巢癌细胞之间存在着联系。随后构建目的基因RNA干扰慢病毒载体，RNAi慢病毒克隆制备并包装，以慢病毒感染目的细胞SKOV3.我们分别从细胞成像、细胞周期与凋亡、细胞增殖等方面研究了BTF3对SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。发现在BTF3表达受抑制的感染细胞中，细胞增殖被抑制，细胞周期停滞于S期，细胞凋亡加速。从而说明BTF3能够通过抑制SKOV3细胞凋亡，改变各个细胞周期细胞数的分布而促进卵巢癌细胞的增殖。
　　
　　另一方面，卵巢癌的发生是与细胞增殖分化有关的原癌基因、抑癌基因互相作用的结果，它组织学类型复杂，特异性症状和早期诊断手段缺乏，从而导致了高死亡率。现如今，基因治疗成为研究热点，erbB,c-myc,k-ras等癌基因，RB,P53,P16等抑癌基因研究较 为 常 见，PIK3CA、AKT2、MTA1、ATG5等基因研究也有报道。通用转录因子3（BTF3）与上述基因是否存在关联，其可否成为卵巢癌诊断的基因标志物以及其在卵巢癌细胞中更多的生物学作用还需要进一步的研究。
　　
　　本研究揭示了BTF3在卵巢癌细胞中呈现高表达状态，并通过构建shBTF3慢病毒转染SKOV3细胞，表明BTF3对卵巢癌SKOV3细胞的生长增殖具有促进作用，考虑BTF3基因在卵巢癌中的表达可能与其发生发展及分级分期密切相关。然而其抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的具体机制目前尚不明确。未来进一步研究BTF3基因在恶性肿瘤中的表达量变化、影响因素、与其他因素的相互作用等，必将为恶性肿瘤的预防、诊断和预后评估提供更大的帮助。
　　
　　参考文献

[1]Baldwin LA,Huang B,Miller RW,et al.Ten-year rel-ative survival for epithelial ovarian cancer[J].ObstetGynecol,2012,120（3）:612-618.
[2]Yang KS,Kim HS,Jin UH,et al.Silencing of NbBTF3results in developmental defects and disturbed gene ex-pression in chloroplasts and mitochondria of higherplants[J].Planta,2007,225:1 459-1 469