正交试验优化桔梗总皂苷提取工艺（本科） （药学）

　　题目：正交试验优化桔梗总皂苷提取工艺

　　目 录

　　摘要（详见正文）

　　关键词

　　前言

　　1 实验材料

　　1.1 药材
　　1.2仪器
　　1.3试剂

　　2 方法与结果

　　2.1 桔梗总皂苷的测定方法
　　2.1.1 对照品的配制
　　2.1.2 供试品溶液的制备
　　2.1.3 含量测定
　　2.2 浸膏得率测定方法
　　2.3 正交试验设计
　　2.3.1 药材吸水率考察
　　2.3.2 正交试验设计
　　2.3.3 正交试验及结果分析
　　2.4 验证实验

　　3 讨论

　　参考文献

　　致谢

　　前言：

　　桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodon grandif1orum ( Jacq. )A. DC.的干燥根，其主要活性成分为桔梗皂苷。桔梗性平，味苦、辛，具有宣肺，利咽，祛痰，排之功效，用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑等 [1]。现代药理学研究表明，桔梗皂苷具有抗炎、祛痰、保肝、降血糖、抑制脂肪吸收、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等广泛的药理作用[3]。目前, 提取桔梗总皂苷的主要方法有水提法、超声法、超临界CO2提取法等[4]。为了制定科学经济的桔梗最佳提取工艺，本文以桔梗总皂苷为考察指标，采用正交实验法对桔梗的提取工艺进行研究。

　　1 实验材料

　　1.1 药材

　　品名：桔梗
　　批号：90721
　　生产企业：安徽海鑫中药饮片有限公司

　　1.2 仪器

　　UV757紫外可见分光光度计（上海精科）
　　DZF-200型真空干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂）
　　AG285型电子天平（德国METTLER公司）
　　旋转蒸发器RE-52A（上海亚荣生化仪器厂）
　　玻璃仪器

　　1.3 试剂

　　桔梗皂苷D A0321（成都曼斯特生物制品有限公司）
　　其他试剂均为分析纯

　　2 方法与结果

　　2.1 桔梗总皂苷含量测定方法

　　2.1.1 对照品溶液的配制

　　精密称取桔梗皂苷D对照品 4.03 mg，臵10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度（0.403mg/ml）。

　　2.1.2 供试品溶液的制备

　　精密移取相当于0.5g药材量的水提液1ml，加水至20ml,使其充分溶解，用水饱和的正丁醇溶液萃取5次，每次20ml,合并正丁醇液，回收正丁醇至干，残渣加甲醇溶液溶解并定容至10ml,为供试品溶液。

　　2.1.3 含量测定

　　精密量取对照品溶液0.4ml，供试品溶液0.4ml, 分别臵具塞试管中，水浴挥干，冷却，加10%香草醛溶液0.5ml，加60%浓硫酸5ml[2]，摇匀，60℃水浴保温15min, 取出，冰水浴冷却，随行试剂做空白，在474nm波长处分别测定吸光度，计算含量。

　　2.2 浸膏得率测定方法

　　精密吸取样品液20 ml，臵于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，臵于70?真空干燥箱中干燥，至恒重后于干燥器中冷却30 min，迅速称重，计算，即得。

　　2.3 正交试验设计

　　2.3.1 药材吸水率考察

　　称取干燥药材25g臵于烧杯中，加一定量的足量水，等药材药材完全被浸透后，倒出多余水分，计算出吸水率，结果药材吸水率为150%。

　　2.3.2 正交试验设计

　　

　　2.3.3正交试验及结果分析

　　称取桔梗药材饮片27份，每份25.0g，按照L9(34)正交试验表进行试验，每组试验平行三次。各提取液均浓缩至50ml，按供试品制备方法和含量测定方法进行试验。正交试验结果见表2、表3，方差分析结果见表4、表5。

　　

　　通过比较计算的F值与临界F值的大小，本实验所考察的三个因素（溶剂量、提取时间、提取次数）中其中提取次数具有显著性的差异。优选出的最佳方案为A1B1C3，即用6倍量水，提取时间为1h，提取次数为3次。

　　

　　通过比较计算的F值与临界F值的大小，本实验所考察的三个因素（溶剂量、提取时间、提取次数）中提取次数具有显著性的差异。另外从数据的直观分析，提取时间也影响桔梗总皂苷的提取，且提取时间越长，提取的越充分。所以优选出的最佳方案为A1B3C3，即用6倍量水，提取时间为2h，提取次数为3次。其显著性大小为C>B>A。即提取次数>提取时间>溶剂用量。  结合出膏率与提取总皂苷含量，得最佳提取方案为A1B3C3，即用6倍量水，提取时间2小时，提取次数为3次。 2.4验证试验  为了考察所选择最佳工艺的稳定性，对其进行验证。称取桔梗3份，每份25g，按A1B3C3方案，即用6倍量水提取3次，每次2小时。提取液浓缩至50ml，取20ml，水浴蒸干。

　

　　3、讨论

　　3.1 本试验结果提示，提取桔梗总皂苷宜采用少量溶媒，长时间、多次数的提取工艺。

　　3. 2 考虑到第一次提取时药材对水会有所吸附，所以设计提取方案时第一次所加的水量把吸水率加了进去。

　　3.3 本实验的方法学系采用本教研室以做的研究成果。并且在试验中发现，在测量吸光度时，冰水浴冷却后应快速测量，时间过长会对测量结果有较大影响。

　　3.4 本法有操作简单、快速、生产成本低的优点，适合工业生产。