影响土壤中蛔虫卵检测结果的相关因素

　　蛔虫病是人体最常见的肠道寄生虫病之一，也是我国一项较严重的公共卫生问题，严重危害人民群众的身体健康，阻碍经济发展和社会进步。被蛔虫卵污染的土壤是人类感染的主要来源，为了解我国农村土壤中蛔虫卵污染情况，卫生部于 2011 年下发了《2011年全国农村环境卫生监测项目技术方案》

　　，要求对土壤中蛔虫卵进行检测。锦州市选取凌海市为监测点，从 2011 年开始，每年随机选择 20 个行政村进行采样，3 年共采集了 60 份样品。为配合监测工作的开展，科学有效的检测出蛔虫卵，本文通过对 60 份样品的检测结果进行分析，来探讨影响检测结果的相关因素。

　　1 材料与方法

　　1． 1 仪器
　　CX31 型显微镜( 日本奥林巴斯有限公司) ，ALLegra X －12 型离心机( 美国贝克曼库尔特商贸有限公司) ，XH － C 型漩涡混匀器( 常州润华电器有限公司) 。

　　1． 2 试剂
　　5% 氢氧化钠溶液( 批号: 20120815，生产厂家: 天津市光复科技发展有限公司) ，饱和硝酸钠溶液( 批号: 20120504，生产厂家: 天津市光复科技发展有限公司) 。

　　1． 3 检测方法
　　1． 3． 1 检测标准 采用饱和硝酸盐漂浮法进行检测，参考《粪便无害化卫生标准》( GB7959 －1987)，《土源性线虫病防治技术方案》( 2010 年版)。

　　1． 3． 2 检测步骤 剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒; 然后用孔径 3 mm 的铜筛和孔径为2 mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。取 50 ml 大离心管，放入过筛后的土样 10 g，加5%氢氧化钠溶液至40 ml 或 45 ml 刻度线。放入 10 颗钢珠，用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡 15 min，可反复 3 次 ～4 次，待充分混合后，以 2000 r/min，离心 4 min。弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀，2000 r / min 离心 4 min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上 18 mm ×18 mm 盖玻片。静置 15 min 后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片上镜检，同时再覆上第 2 张盖玻片，如此反复，共计数 3 张盖玻片。

　　1． 4 质量控制
　　1． 4． 1 采样方法 统一 采用 1 m2范围内 5 点取样法，采集表层土壤，深度均在 5 cm ～20 cm 之间，采样量 ＞50 g.
　　
　　1． 4． 2 清洗铜筛 每次将筛过土壤的铜筛进行清洗，晾干后筛下 1 份样品。

　　1． 5 统计分析
　　采用 SPSS 15． 0 统计软件进行数据分析。

　　2 结 果

　　2． 1 采样季节对检测结果的影响
　　2011 年 － 2013年锦州市共采集监测点土壤样品 60 份，每年采集 20份。2011 年 8 月份、2012 年 8 月份采样，2013 年 11月份采样。3 年间蛔虫卵的总体检出率为 58． 3%，2012 年检出率最高为 70% ，3 年间检出率差异无统计学意义( χ2= 1． 782，P ＞ 0． 05) 。2012 年检出活卵数量最高，200 g 样品检出活卵数为 21 个，2013 年最低为 9 个，3 年间蛔虫卵存活率差异有统计学意义( χ2=8． 182，P ＜ 0． 05) ( 表 1) 。【表1】

　　将 8 月份采集的 40 份样品与 11 月份采集的 20份样品检测结果进行比较，11 月份采集样品的检出率和存活率均低于 8 月份，存活率下降比例较大。在采样方法统一的前提下，随着土壤温度的降低，蛔虫卵的检出率和存活率均有所下降( 表 2) 。【表2】

　　
　　2． 2 振荡工具的使用对检测结果的影响
　　挑选出检出蛔虫卵的 5 份平行样品进行振荡效果比较，振荡时间均为 15 min。从 5 份平行样品的检测结果中可以看出，手动振荡的检出数量均多于振荡器振荡。由此可见在本实验室的实验条件下，手动振荡的效果要好于振荡器的振荡效果( 表 3) 。【表3】

　　
　　2． 3 操作手法对检测结果的影响
　　玻片吸附前要求饱和硝酸钠溶液量要恰当，应达到满而不溢出; 覆上玻片后如果出现气泡，此时若马上换另一张玻片再吸，会降低检出率; 如果再补充液体试图将气泡赶走，成功率也会很低，多数情况下气泡未被赶走，而液体溢出，降低检出率。离心管盖的内壁由于震荡时液体会有一定的吸附，因此盖的内壁也需用硝酸钠溶液进行冲洗，否则会降低检出率。

　　2． 4 镜检对检测结果的影响
　　镜下计数时要求检测人员掌握活卵和死卵之间的形态区别，应将含有幼虫的计为活卵，其他阶段的或单细胞的计为死卵。

　　3 讨 论

　　通过锦州市 3 年间采集的 60 份土壤样品中蛔虫卵的检测结果可以看出，在统一采样方法和检测方法并确保质量控制的前提下，采样季节对蛔虫卵检测有一定影响。随着土壤温度的降低，土壤中的蛔虫卵大部分已经死掉，要想获得较高的蛔虫卵存活率应在7 月 － 8 月份进行监测采样，这同《辽宁省农村环境卫生监测项目技术方案》要求是一致的。振荡器的使用应根据实验室情况而定，检测前可将振荡器的振荡效果进行比较，从而选择理想的振荡工具，建议本实验室更换振荡效果好的振荡器。另外操作手法、土壤性质、离心的时间与次数等对检出率均有影响。

　　实验人员只有熟悉掌握检测原理和各种影响因素，进而采用科学的检测方法，才能获得理想的检测效果进而提高土壤中蛔虫卵的检出率。

　　参考文献
　　
　　［1］ 中国人民共和国卫生部． 2011 年全国农村环境卫生监测项目技术方案． 2011 －04 －29．
　　［2］ 中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所． GB7959 －1987 粪便无害化卫生标准［S］． 北京: 中国标准出版社，1987．
　　［3］ 中国人民共和国卫生部．土源性线虫病防治技术方案．2010 －06 －17．
　　［4］ 钱颖骏，诸廷俊，王聚君，等．4 种漂浮法分离土壤中人蛔虫卵的效果比较［J］． 中国病原生物学杂志，2008，3( 4) : 305 －306．
　　［5］ 叶奕英，许政拱，龙祖培，等． 影响土壤蛔虫卵分离因素的实验观察［J］． 广西医学，1982，4( 5) : 230 －232．
　　［6］ 朱均勇，张明华，郭枫． 寄生虫卵饱和盐溶液浮聚法的比较研究［J］． 数理医药学杂志，2002，15( 2) : 173．