中草药饲料添加剂对肉鸡免疫指标的作用分析

　　中草药饲料添加剂具有天然性、安全性、无残留和药源广泛等特点，完全满足绿色饲料添加剂的要求: 对畜禽无毒害; 在畜禽产品中无残留，对人类健康无危害，畜禽排泄物对环境无污染。2010 年5 月国家发布的 《绿色食品畜禽饲料及饲料添加剂使用准则》 ( NY/T 471 －2010) 中，将天然植物饲料添加剂单列一条，鼓励使用天然植物饲料添加剂。

　　河南工业大学研发的预防和治疗禽类病毒性疾病的中药组合物 ( 专利: 201010149022) ，具有高效防控病毒性疾病、促进肉鸡生长及提高机体免疫力的性能。将抗病中草药组方转化成中草药饲料添加剂 ( CHA － PT) ，根据肉鸡的生长特点，以不同比例添加到全价肉鸡颗粒饲料中，全程饲喂，研究其对肉鸡免疫性能、血清生化指标及抗氧化特性的影响，为其在生产中的推广应用提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验动物

　　1 日龄科宝 500 肉雏鸡: 自河南开封正大种鸡场购买，300 只，公母不限。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 CHA － PT 粉末的制备按照专利中草药组方，购买中草药 ( 市售) ，经粉碎过 50 目的筛，按比例配制均匀混合制成中草药粉末，自封袋密封，4 ℃贮藏待用。

　　1.2.2 肉鸡全价饲料日粮的配制肉鸡日粮为玉米 － 豆粕型日粮，日粮的组成见表 1。配合全价日粮所达到的营养标准见表 2。【表1-2】

　　
　　1.2.3 肉鸡全价颗粒料的制备对购入饲料原料用锤片式粉碎机进行粉碎，过2. 5 mm 直径的筛子，按配方称取各种原料，用卧式螺旋叶片混合机进行混合，再加入不同量的添加剂，再次混匀 10 min; 加水 5%调质约 2 min，采用环模压缩比为 1∶8，以环模直径为 3. 0 mm 制 1 ～ 3周龄颗粒饲料，以环模直径为 4. 5 mm 制 4 ～6 周龄颗粒饲料。制出的 1 ～ 3 周龄颗粒饲料经粉碎机二次破碎。冷却至料温 ＜ 20 ℃ 后装袋，阴凉干燥处贮藏。

　　1.2.4 试验设计及动物分组将购入的 1 日龄科宝 500 肉鸡雏逐只称质量，根据体质量，将肉鸡分成 5 个组，每组 6 个重复，每重复 10 只鸡。试验设计见表 3。【表3】

　　
　　1.2.5 肉鸡的饲养管理采用塑料网平面笼养模式，按科宝 500 饲养管理规程饲养。试验期为 42 d。

　　1.2.6 肉鸡的免疫程序根据河南开封正大种鸡场建议的免疫程序进行修改。1 日龄进行母源抗体的检测，根据母源抗体的水平决定新城疫 － 传支首免日龄，具体的免疫程序见表 4。所用鸡新城疫 － 传支二联疫苗 ( LaSota株 + H120 株) 和鸡传染性法氏囊病活疫苗 ( B87株) 均购买于青岛易邦生物工程有限公司 ( YE-BIO) 。【表4】

　　
　　1.2.7 抗体检测根据表 4 所列的检测程序，刺破翅静脉采血。

　　采血后，3 500 r/min 离心 10 min，吸取上层血清于4 ℃ 保存，第 2 天检测抗体水平。采用血凝抑制试验进行新城疫抗体检测，以琼脂扩散试验进行法氏囊抗体检测。每个重复采 3 只鸡，每组采 18 只鸡进行检测。

　　1.2.8 免疫器官指数测定饲养试验结束后，每组随机抽取 18 只一共抽取 60 只鸡进行指标测定。称取活质量后，颈动脉放血致死。解剖观察各脏器变化; 采集解剖鸡只的胸腺、脾和法氏囊，冲淋去血污，在滤纸上吸去水份，修剪组织周围的脂肪，称质量获得各免疫器官的质量，根据活质量计算免疫器官指数。免疫器官指数/ ( mg·g－ 1) = 免疫器官质量/活质量。

　　1.2.9 生化指标测定收集 1. 2. 8 抽取鸡只的颈动脉血，3 500 r/min离心 10 min，吸取上层血清于 4 ℃保存，第 2 天送郑州大学校医院检验科采用日立 7150 全自动生化分析仪进行检测。

　　检测与肝功能相关的生化指标: 丙氨酸氨基转氨酶 ( ALT) 、天门冬氨酸氨基转移酶 ( AST) 和总蛋白 ( TP) 、白蛋白 ( ALB) 、球蛋白 ( GLO)及白球比 ( A/G) 。检测与脂肪代谢相关的指标: 三酰甘油 ( TG) 、胆固醇 ( TC) 、高密度脂蛋白胆固醇 ( HDLC) 和低密度脂蛋白胆固醇 ( LDLC) 。

　　1.2.10 抗氧化能力的测定收集 1. 2. 9 抽取鸡只的颈动脉血清，以南京建成生化检测试剂盒测定血清中总抗氧化能力 ( T －AOC) 、总超氧化物歧化酶 ( T － SOD) 和还原型谷胱甘肽 ( GSH) 的水平。测定方法参照试剂盒说明书操作。

　　1.2.11 数据的分析和统计所有试验数据用 Excel 初步整理后，使用统计分析软件 SPSS18.0 进行处理和单因素 ( Duncan 氏法)分析，各组数据采用平均值 ± 标准误的形式表示，以 P ＜0. 05 为差异显着，以 P ＜0. 01 为差异极显着。

　　2 结果与分析
　　
　　2.1 抗体检测效价

　　在 42 d 的肉鸡饲养中，仅对严重影响鸡群生长的新城疫 － 传染性支气管炎和法氏囊疾病进行防疫。因此，在整个饲养过程中，对新城疫进行 2 次免疫和 3 次抗体效价检测; 对法氏囊进行 2 次免疫和 2 次抗体检测。【表5】

　　
　　从表 5 可见: 新城疫母源抗体水平在 5. 4 左右，相对较低，因此，确定首免的日龄为 5 日龄。

　　新城疫疾病的首免以新 － 支二联弱毒疫苗滴鼻和点眼的方式进行，以刺激机体产生黏膜免疫。在免疫9 d 后检测抗体水平，中草药添加剂组 ( Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组) 的抗体水平维持在抗体临界水平4. 0以上，平均为 4. 43，明显高于 2 个对照组 ( P ＜ 0. 05) ;其中，黄霉素阳性对照组的抗体水平最低为 3. 0;Ⅴ组的新城疫水平最高为 5. 0，高于正常对照 1. 7，提高了抗体的水平; 新城疫二免免疫后 14 d 检测各组抗体水平，各组的抗体水平较首免均有所升高。

　　中草药添加组 ( Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组) 的平均抗体水平升高 0. 57 个滴度，与正常组差异明显 ( P ＜ 0. 05) ;黄霉素药物对照组升高明显，同时结合临床死亡鸡数增加，怀疑有个别鸡只感染隐性新城疫疾病，导致监测抗体水平升高。

　　对法氏囊抗体的检测采用琼脂扩散试验进行。

　　2 次免疫后检测，法氏囊抗体均未出现明显的沉淀线，说明法氏囊免疫刺激机体没有产生高的抗体水平，同时，也说明临床未发生法氏囊疾病的感染。

　　2.2 免疫器官指数

　　试验结束后，各组抽取 30% ( 18/60) 的鸡只进行解剖，观察各组免疫器官均未出现明显的病理变化; 采取胸腺、脾和法氏囊，称质量，计算各组免疫器官指数。

　　胸腺、法氏囊和脾是禽类重要的免疫器官，其质量与其免疫细胞数量及功能密切相关，故免疫脏器指数可在一定程度上反映机体免疫功能的强弱。

　　从表 6 可见: Ⅳ组的胸腺质量和胸腺指数、脾质量和脾指数及法氏囊质量和法氏囊指数显着高于其他组 ( P ＜0. 05) ，胸腺质量较正常组高 5. 2 g，超过正常组胸腺质量的 86. 7%，胸腺指数较正常组高1. 53 mg / g，超过正常组胸腺指数的 60. 5% ; 脾质量较正常组多 1. 7 g，超过正常组脾质量的 94. 4%，脾指数较正常组高 0. 51 mg/g，超过正常组脾指数的 68. 0%; 法氏囊质量较正常组高 1. 4 g，超过正常组法氏囊质量的 140. 0%，法氏囊指数较正常组高 0. 44 mg/g，超过正常组法氏囊指数的 104. 8%，同时，中剂量组肉鸡的生长较快和病死率较低等生产指标最好; 正常饲料的Ⅰ组的免疫指数最低，黄霉素药物添加的Ⅱ组也在一定程度上刺激免疫功能。【表6略】
　　
　　2.3 肝功能指标

　　从表7 可见: 中草药饲料添加剂可极显着提高血清蛋白水平，表现为提高 TP、ALB 和 GLO 含量，且随着添加量的逐渐增加而明显增加 ( P ＜0.01) 。其中，3 个中草药添加组血清 TP 含量平均为 33. 53 g / L，较正常组提高1.83 g/L，提高了5.8%; ALB 含量平均为12. 52 g / L，较正常组提高 0. 42 g / L，提高了 3. 4% 。【表略】

　　ALT 和 AST 代表肝细胞的受损程度，与 I、III、IV 和 V 组相比 II 组能提高血清中 AST ( P ＜ 0. 01)水平，证实在肉鸡全价饲料中添加 120 mg/kg 剂量的黄霉素能造成肝的轻微损伤，说明在肉鸡生长迅速和肝代谢负担加重的情况下，添加化学药物对肝功能具有损伤作用; 添加中草药各组的 ALT 和 AST水平低于正常对照组 ( P ＞0. 05) ，说明中草药添加剂对肉鸡肝具有一定的保护功能。

　　2.4 脂肪代谢的指标

　　检测血清中 TG、TC、LDLC 和 HDLC 的水平，以观察中草药饲料添加剂对肉鸡脂肪代谢的影响。肉鸡养殖具有生长快和生产周期短的特点，同时，肉鸡的快速生长也使得肉鸡易出现肝腹水和胸囊肿等多种疾病。因而，添加促进蛋白和脂肪代谢以及保护肝功能的中草药添加剂，对肉鸡养殖具有重要的作用。饲料添加中草药后，对肉鸡血清中TG、TC 和 LDLC 含量有不同程度的影响，能促进HDLC 结合体内多余血脂，转运并清除血液垃圾;以Ⅳ组与 I 组相比降低 TG、TC 和 LDLC 分别为0. 11、0. 68 和 0. 22 mol / L，降低了 29. 7% 、18. 5%和 28. 6%， 而 提 高 HDLC 0. 41 mol/L， 提高了 16. 4%。

　　2.5 抗氧化指标

　　以试剂盒检测血清中 T － AOC、T － SOD 和GSH 的水平，以检测中草药饲料添加剂对肉鸡抗氧化能力的影响。从表 9 可见: Ⅳ组能极显着地提高血清中 T －AOC 能力 ( P ＜ 0. 01 ) 和 T － SOD 的水平 ( P ＜0. 01) ，也具有提高 GSH 水平的趋势 ( P ＞ 0. 05) 。

　　与正常组相比，提高 T － AOC 和 T － SOD 分别为8. 06 和 9. 15 mol / L，提高了 68. 2% 和 23. 0% ; 黄霉素添加组的 T － AOC 和 T － SOD 最低，可以看出中草药饲料添加剂比化学药物添加剂对肉鸡机体产生较强的抗氧化作用，这与邢广林和马得莹的研究结论类似。

　　3 讨论

　　肉鸡生产企业多以大规模集约化的饲养模型进行肉鸡饲养，饲养密度过大、室内空气容易污浊、温度高、湿度大且卫生环境恶劣，易使肉鸡生长发育不整齐和免疫力受到抑制，导致多种疾病感染，病死率上升。课题组配伍研制的具有预防和治疗效果的中草药抗病添加剂，主要由金银花、板蓝根、蒲公英、黄连、淡竹叶、穿心莲、玄参、生地、麻黄和甘草等 10 多味清热解毒中草药配合而成，其中含有多种有效活性成分，如多糖、黄酮类、甙类、生物碱和有机酸等，针对多种致病因素和途径，发挥双向调节机体免疫，多环节、多层次及多靶点地全方位抵御疾病，提高机体的抗病能力。经实验室动物试验和青岛动物检疫研究所攻毒试验和临床治疗等多方面验证，该添加剂对多种禽类疾病具有高效防控效果。

　　肉鸡具有生长快和饲养周期短的特点，其肌肉的生长速度远远快于内脏的生长发育，尤其是心脏、肝和肺的发育迟缓于肌肉，常常导致多种代偿性疾病的发生，如肝腹水、胸囊肿和腿骨变形等;同时，快的生长率和高的营养代谢水平，使得机体连续不断地产生自由基，自由基的消除主要依赖于机体完整的抗氧化防御系统，即 SOD、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶等酶类和非酶类抗自由基物质，不断地清除自由基使机体免受损害。中草药添加剂含有多种生物活性物质和抗氧化成分，通过“驱邪扶正”调整机体的失衡状态，可以起到健脾理气、帮助消化吸收、增强新陈代谢、提高机体免疫能力和抗氧化的作用。

　　从绿色原生态可持续发展农业的角度来看，中草药饲料添加剂的开发和研究具有广阔的前景。在目前疾病繁杂多发的情况下，中草药多种有效成分的相互作用、多环节、多脏器、多靶点和多途径地发挥双向调节作用，可有效地防控疾病发生、提高机体的免疫和抵抗能力，这是现代西医药治疗无法达到的; 适量的中草药添加剂，不仅能提供生物活性成分，同时，可增加植物性营养，增加风味物质沉积，显现出原始自然的饲养效果，提高产品品质并净化生态环境。

　　4 结论

　　中草药饲料添加剂 CHA － PT，能提高机体的免疫能力，通过促进脂肪代谢，提高机体抗氧化作用，保护肝功能，提高机体的生长能力。

　　参考文献
　　
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　　［4］邢广林，李同树，刘翠艳，等． 甘露寡糖、中药和微生态制剂对肉鸡抗氧化性能的影响［J］． 家畜生态学报，2007(1):47 －51．
　　［5］马得莹，单安山，李群道，等． 中草药、甘露寡糖和抗生素对蛋雏鸡抗氧化机能与血液生化指标的影响［J］． 畜牧兽医学报，2004(4):389 －394．