有机化学论文
纤维素酶根据酶功能的差异被分为 3 大类: 内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和 β － 葡萄糖苷酶［1］。纤维素酶因其特殊的去污机理［2］，一直以来吸引着人们的研究热情，尤其是它在洗涤剂工业中的应用。纤维素酶与蛋白酶及脂肪酶等酶的去污原理不同，它主要作用于纤维素的无定形区［3］，能够有效地软化和水解纤维素分子与水及污垢形成的凝胶结构，并释放凝胶结构中的污垢，在起到良好洗涤效果的同时还保持了织物的色泽及强度。
随着人们对洗涤剂要求的提高，添加纤维素酶的洗涤剂也日益增多。但由于纤维素酶自身的结构特点，容易形成分子间氢键［4］，使纤维素酶不溶于水及一般的有机溶剂，对其活力的测定造成很大的困难。
国内外有许多关于纤维素酶活力测定的报道［5，6］，很多研究者根据各自的实验目的采用了不同的方法来测定缓冲液条件下纤维素酶的活力，使得测定方法具有多样化，如棉线切断法、滤纸法、分光光度法等［7］，但至今也没有统一的纤维素酶活力的测定方法。
目前针对洗涤剂中纤维素酶的活力进行测定尚未有文献报道。笔者采用纤维素酶羧甲基纤维素( CMC) 酶活的测定方法，并通过单因素试验对温度、pH、波长及吸光度等条件进行了研究。在上述优选条件下，添加液体洗涤剂和洗衣粉背景，考察该方法能否用于测定液体洗涤剂和洗衣粉中的纤维素酶活力。
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂
84 － 1A 型磁力搅拌器，上海司乐仪器有限公司;TGL － 20M 型台式高速冷冻离心机，湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司; UV － 2602 型紫外分光光度计，尤尼柯( 上海) 仪器有限公司。3，5 － 二硝基水杨酸、无水葡萄糖、羧甲基纤维素钠，均为分析纯，天津市光复精细化工研究所; 酒石酸钾钠，分析纯，天津市光复科技发展有限公司; 无水亚硫酸钠，分析纯，天津市北辰方正试剂厂; 纤维素酶，分析纯，国药集团化学试剂有限公司; 硼砂，分析纯，天津博迪化工股份有限公司; 氢氧化钠，分析纯，北京化工厂。液体洗涤剂、洗衣粉，国产市售。
1. 2 溶液的配制
DNS 试剂: 称取 3. 15 g 3，5 － 二硝基水杨酸加入500 mL 蒸馏水中，不断搅拌，水浴至 45 ℃ ，再加入0. 2 g / mL氢氧化钠溶液 100 mL，搅拌至清澈透明( 在加入氢氧化钠溶液过程中，溶液温度不要超过48 ℃) 。
分别加入四水酒石酸钾钠 91. 0 g、苯酚 2. 5 g、无水亚硫酸钠 2. 5 g，继续在45 ℃下水浴加热，同时补蒸馏水300 mL，并搅拌至上述物质全部溶解，冷却至室温，并定容至 1 L，用滤布过滤，将滤液储存至棕色瓶中。
葡萄糖标准液: 精密称取无水葡萄糖1. 000 0 g 加入 80 mL 蒸馏水中搅拌溶解，待完全溶解后定容至100 mL。标记为 10 g / L 的葡萄糖标准液，同时标记配制日期，4 ℃条件下保存。
1. 3 标准曲线绘制
配制不同质量浓度梯度的葡萄糖工作液，如表 1所示。取 8 支试管按表 1 加入蒸馏水和葡萄糖标准液后再加入 1. 5 mL DNS 试剂，充分摇匀后在沸水浴中反应 5 min，迅速冷却至室温，然后用蒸馏水定容至5. 0 mL。用 0 号试管试液作为对照，在 530 nm 波长下测其他各试管试液的吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标绘制标准曲线。