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成都地区女性献血者HLA抗体阳性率

来源:未知 作者:小韩
发布于:2015-10-15 共2050字

  与移植排斥相关的抗原称为组织相容性抗原,主要组织相容性抗原的编码基因称为组织相容性复合物(MHC),人类 MHC 编码的抗原首先在白细胞上发现,成为人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA),具有高度多态性,根据分布和功能分为Ⅰ和Ⅱ类抗原。HLA 抗原主要存在于细胞膜上,血清中存在微量的可溶性 HLA 抗原。HLA-Ⅰ抗原分布极为广泛,存在于大多数有核细胞,HLA-Ⅱ主要分布在抗原提呈细胞表面。HLA 抗原在输血,骨髓和器官移植中有重要作用,因输血、妊娠可产生 HLA 抗体,如果血浆中存在HLA 抗体,输注后可引起受血者出现发热反应,血小板输注无效,严重可引起输血相关急性肺损伤(transfusion related a-cute lung injury,TRALI)。Triulzi 等[1]报道美国 6 家血液中心参与的 1 项前瞻性研究发现,无妊娠史的女性,男性无输血史和有输血史献血者 HLA 抗体阳性率分别是 1. 7%,1. 0% 和 1. 7% ,较低且无显着性差异。因此我们主要针对女性献血者进行研究,通过筛查女性献血者 HLA-Ⅰ/Ⅱ抗体,了解成都地区女性献血者 HLA 抗体阳性率。

  1 材料与方法

  1. 1 对象 随机选取血液中心 2013 年 2 月 ~ 2014 年 1 月女性献血者 298 名,年龄 19 ~ 56 岁。抽取静脉血 5 mL/人,至于 EDTA 抗凝管中,离心后,取上清血浆置 1. 5 mL EP 管中,置于 -20℃保存。

  1. 2 试剂与仪器 HLA 抗体筛查试剂盒( #QS12G,#BCSG)(北京博富瑞基因诊断技术有限公司),试剂批号 HLA-I 类试剂(绿色)3000595;HLA-II 类试剂(粉红)3000618.Star 全自动加样仪 ( HAMILTON)、FAME2420 全自动酶 免 分 析 仪(HAMILTON)离心机(KUBOTA8420)1. 3 方法 用 Star 全自动加样仪稀释液 SD 1∶ 1 稀释阴阳性对照、献血者血浆,每孔加稀释好的血清 50 μL.用 FAME全自动酶免分析仪进行检测,37 ℃ 水浴 30 min,洗板 4 次。

  用稀释液 SD 1∶ 100 稀释抗-IgG,除空白孔,每孔加已稀释的抗-IgG 50 μL,37 ℃30 min,洗板 4 次。用 0. 5 mL 去离子水溶解1 瓶 PNPP 粉末,然后用底物缓冲液1∶ 100 稀释,除空白孔,每孔加已稀释的 PNPP 100μL,室温避光30 min.加终止液,所有孔加 100 μL,空白孔再加 100 μL 去离子水。405 ~410nm 读值,490nm 或 630nm 为参照波长。阳性结果判断:OD 值 > 阴性对照平均值的 2 倍,即被判断为阳性。1. 4 统计学分析 采用 SPSS 12. 0 统计软件进行卡方检验及相关数据描述,以 P <0. 05 为差异有统计学意义。

  2 结果

  298 名献血者 4 种 HBO 血型表现型中的 HLA 阳性率存在差异(χ2= 10. 829,P < 0. 05)( 表 1),随着年龄的增长,HLA阳性率逐渐上升(表 2),各年龄段阳性率间的差异有统计学意义(χ2= 1. 823,P = 0. 481)。电话回访阳性献血者,9 人因电话关机,号码变更,停机等原因未联系上。成功问询了 65位献血者的输血史和妊娠史(包括生育和流产),均有妊娠史,其中 3 人有输血史,随妊娠次数增加,阳性比例增加(表3)。对成都地区 HLA 阳性率和其他地区 HLA 阳性率两两进行卡方比较,结果显示成都地区 HLA 抗体阳性率为24. 83% 高于广州地区的 10. 78% (χ2= 8. 961,P < 0. 05) 及潍坊地区的9. 24%(χ2= 29. 468,P < 0. 05),与北京地区的 HLA阳性率 27. 37 无差异(χ2= 0. 244,P > 0. 05)( 表 4)。【1】

  
  3 讨论

  成都地区女性献血者中,HLA 抗体阳性率为 24. 83%(HLA-Ⅰ单阳 19. 46% ,HLA-Ⅱ单阳 2. 35% ,双阳 3. 02% )。

  山东和北京调查已经生育女性的 HLA 阳性率,成都和广东调查普通女性献血者人群。我们的研究结果高于广州和山东潍坊地区,与北京结果接近。年龄和血型分布,HLA 阳性率没有显着差异,通过妊娠次数分类,3 次及以上妊娠构成比最高。李新菊等[3]调查发现 1 次、2 次和 3 次及以上妊娠女性 HLA 抗体阳性率分别为 4. 86%、12. 99% 和 23. 44%.献血者中,HLA 抗体最常见于多次妊娠女性[5-7].国外文献报告显示产生 HLA 同种免疫的可能性随妊娠次数增加而增加,HLA 抗体从无妊娠史妇女的 1% ~ 9% 增加至多次生产妇女的 32% ~38%[8-10].异体血液输注可诱发献血者形成抗体,但 HLA 抗体在有输血史献血者中的流行率低,男性有和无输血史献血者之间的抗体阳性率无差异[1].

  目前国外很多国家采取预防措施,有效降低的 TRALI 的发生率,如向临床提供男性血浆,采用男性献血者血浆悬浮混合手工血小板。英国、加拿大、奥地利筛查女性单采血小板献血者的白细胞抗体,筛查结果阴性,可以捐献血小板,阳性献血者只能捐献全血,血浆用于制备血浆蛋白,不用于临床输注[8].排除女性或多次妊娠女性献血者的富含血浆制品(血浆和血小板)可预防 TRALI,自 2003 年以来,英国排除女性献血者捐献富含血浆的制品,向临床提供的新鲜冰冻血浆(FFP)主要来自男性献血者,这项措施导致 TRALI 伤报道病例大幅下降[11].

  我国虽然执行计划生育政策,电话回访 HLA 抗体阳性献血者,发现部分献血者生育 2 个小孩,大部分献血者有多次流产史,本研究发现 HLA 抗体阳性率随妊娠次数增加呈增长趋势,成都地区 HLA 抗体阳性率的分布情况与国外报告结果相似,有必要对有妊娠史女性单采血小板献血者进行HLA 抗体的筛查,提高输血安全性。

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