成都地区女性献血者HLA抗体阳性率

　　与移植排斥相关的抗原称为组织相容性抗原，主要组织相容性抗原的编码基因称为组织相容性复合物（MHC），人类 MHC 编码的抗原首先在白细胞上发现，成为人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA），具有高度多态性，根据分布和功能分为Ⅰ和Ⅱ类抗原。HLA 抗原主要存在于细胞膜上，血清中存在微量的可溶性 HLA 抗原。HLA-Ⅰ抗原分布极为广泛，存在于大多数有核细胞，HLA-Ⅱ主要分布在抗原提呈细胞表面。HLA 抗原在输血，骨髓和器官移植中有重要作用，因输血、妊娠可产生 HLA 抗体，如果血浆中存在HLA 抗体，输注后可引起受血者出现发热反应，血小板输注无效，严重可引起输血相关急性肺损伤（transfusion related a-cute lung injury,TRALI）。Triulzi 等[1]报道美国 6 家血液中心参与的 1 项前瞻性研究发现，无妊娠史的女性，男性无输血史和有输血史献血者 HLA 抗体阳性率分别是 1. 7%,1. 0% 和 1. 7% ,较低且无显着性差异。因此我们主要针对女性献血者进行研究，通过筛查女性献血者 HLA-Ⅰ/Ⅱ抗体，了解成都地区女性献血者 HLA 抗体阳性率。

　　1 材料与方法

　　1. 1 对象 随机选取血液中心 2013 年 2 月 ~ 2014 年 1 月女性献血者 298 名，年龄 19 ~ 56 岁。抽取静脉血 5 mL/人，至于 EDTA 抗凝管中，离心后，取上清血浆置 1. 5 mL EP 管中，置于 -20℃保存。

　　1. 2 试剂与仪器 HLA 抗体筛查试剂盒（ #QS12G,#BCSG）（北京博富瑞基因诊断技术有限公司），试剂批号 HLA-I 类试剂（绿色）3000595;HLA-II 类试剂（粉红）3000618.Star 全自动加样仪 （ HAMILTON）、FAME2420 全自动酶 免 分 析 仪（HAMILTON）离心机（KUBOTA8420）1. 3 方法 用 Star 全自动加样仪稀释液 SD 1∶ 1 稀释阴阳性对照、献血者血浆，每孔加稀释好的血清 50 μL.用 FAME全自动酶免分析仪进行检测，37 ℃ 水浴 30 min,洗板 4 次。

　　用稀释液 SD 1∶ 100 稀释抗-IgG,除空白孔，每孔加已稀释的抗-IgG 50 μL,37 ℃30 min,洗板 4 次。用 0. 5 mL 去离子水溶解1 瓶 PNPP 粉末，然后用底物缓冲液1∶ 100 稀释，除空白孔，每孔加已稀释的 PNPP 100μL,室温避光30 min.加终止液，所有孔加 100 μL,空白孔再加 100 μL 去离子水。405 ~410nm 读值，490nm 或 630nm 为参照波长。阳性结果判断：OD 值 > 阴性对照平均值的 2 倍，即被判断为阳性。1. 4 统计学分析 采用 SPSS 12. 0 统计软件进行卡方检验及相关数据描述，以 P <0. 05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　298 名献血者 4 种 HBO 血型表现型中的 HLA 阳性率存在差异（χ2= 10. 829,P < 0. 05）（ 表 1），随着年龄的增长，HLA阳性率逐渐上升（表 2），各年龄段阳性率间的差异有统计学意义（χ2= 1. 823,P = 0. 481）。电话回访阳性献血者，9 人因电话关机，号码变更，停机等原因未联系上。成功问询了 65位献血者的输血史和妊娠史（包括生育和流产），均有妊娠史，其中 3 人有输血史，随妊娠次数增加，阳性比例增加（表3）。对成都地区 HLA 阳性率和其他地区 HLA 阳性率两两进行卡方比较，结果显示成都地区 HLA 抗体阳性率为24. 83% 高于广州地区的 10. 78% （χ2= 8. 961,P < 0. 05） 及潍坊地区的9. 24%（χ2= 29. 468,P < 0. 05），与北京地区的 HLA阳性率 27. 37 无差异（χ2= 0. 244,P > 0. 05）（ 表 4）。【1】

　　
　　3 讨论

　　成都地区女性献血者中，HLA 抗体阳性率为 24. 83%（HLA-Ⅰ单阳 19. 46% ,HLA-Ⅱ单阳 2. 35% ,双阳 3. 02% ）。

　　山东和北京调查已经生育女性的 HLA 阳性率，成都和广东调查普通女性献血者人群。我们的研究结果高于广州和山东潍坊地区，与北京结果接近。年龄和血型分布，HLA 阳性率没有显着差异，通过妊娠次数分类，3 次及以上妊娠构成比最高。李新菊等[3]调查发现 1 次、2 次和 3 次及以上妊娠女性 HLA 抗体阳性率分别为 4. 86%、12. 99% 和 23. 44%.献血者中，HLA 抗体最常见于多次妊娠女性[5-7].国外文献报告显示产生 HLA 同种免疫的可能性随妊娠次数增加而增加，HLA 抗体从无妊娠史妇女的 1% ~ 9% 增加至多次生产妇女的 32% ~38%[8-10].异体血液输注可诱发献血者形成抗体，但 HLA 抗体在有输血史献血者中的流行率低，男性有和无输血史献血者之间的抗体阳性率无差异[1].

　　目前国外很多国家采取预防措施，有效降低的 TRALI 的发生率，如向临床提供男性血浆，采用男性献血者血浆悬浮混合手工血小板。英国、加拿大、奥地利筛查女性单采血小板献血者的白细胞抗体，筛查结果阴性，可以捐献血小板，阳性献血者只能捐献全血，血浆用于制备血浆蛋白，不用于临床输注[8].排除女性或多次妊娠女性献血者的富含血浆制品（血浆和血小板）可预防 TRALI,自 2003 年以来，英国排除女性献血者捐献富含血浆的制品，向临床提供的新鲜冰冻血浆（FFP）主要来自男性献血者，这项措施导致 TRALI 伤报道病例大幅下降[11].

　　我国虽然执行计划生育政策，电话回访 HLA 抗体阳性献血者，发现部分献血者生育 2 个小孩，大部分献血者有多次流产史，本研究发现 HLA 抗体阳性率随妊娠次数增加呈增长趋势，成都地区 HLA 抗体阳性率的分布情况与国外报告结果相似，有必要对有妊娠史女性单采血小板献血者进行HLA 抗体的筛查，提高输血安全性。