摘要：目的 探析病理诊断中病理技术HE染色的临床价值。方法 将2016年4月～2018年6月作为病例时段, 于2017年6月前对我院病理科接收的石蜡切片86例实施未改进病理技术HE染色看作参照组;于2017年6月后对我院病理科接收的石蜡切片86例实施改进病理技术HE染色看作研究组。对所有被选者采取染色标本制作学质谱观察。结果 病理技术改进前胃镜活检和肝胆、子宫内膜和胃肠等染色结果情况均明显低于改进后 (P<0.05) 。结论 在临床病理诊断中, 病理诊断技术已成为金标准, 改进HE染色技术对切片质量的提升, 以及染色标准率的提高具有促进作用, 从而能有助于诊断准确率的提升。
关键词：HE染色,病理技术,病理诊断
在疾病诊断中, 临床一直将病理诊断看作为金标准, 然而因操作人员技巧、处理质量和切片染色效果等因素, 容易导致诊断准确性受影响。从实际的病理技术应用中发现, 诊断检查操作的开展存在一定的局限性[1]。由于受标本固定时间不合理等因素影响, 无法彻底进行组织脱水, 从而能严重影响制片质量[2]。对此, 为避免上述情况的发生, 使临床病理诊断效果能有所提升, 对HE染色操作流程的调整非常重要。本文以石蜡切片86例为对象, 经采取病理技术HE染色, 现做诊断报道如下。
1 资料与方法
1.1 对象资料
将2016年4月～2018年6月作为病例时段, 于2017年6月前对我院病理科接收的石蜡切片86例实施未改进病理技术HE染色看作参照组, 其中包括39例胃镜活检, 8例肝胆, 28例子宫内膜, 11例胃肠。于2017年6月后对我院病理科接收的石蜡切片86例实施改进病理技术HE染色看作研究组, 其中包括40例胃镜活检, 7例肝胆, 29例子宫内膜, 10例胃肠。
1.2 方法
1.2.1 HE染色:
为保证制片质量, 操作人员在取材时应遵照相关操作要求并严格执行, 禁止取材又厚又肥, 避免组织制片、脱水受影响。脱水、包埋和制片组织。
1.2.2 操作方法
(1) 在6 5℃的烤箱内将切片烘烤15～30分钟后置于二甲苯内进行三次脱蜡, 每次脱蜡时间为5分钟。 (2) 应用梯度的乙醇把二甲苯依次脱去, 乙醇浓度则是逐渐递减, 即无水-95%-85%-75%, 30s/次, 随后实施自来水冲洗。 (3) 给予苏木精染液染色, 控制染色在5～10分钟左右。 (4) 经1%浓度盐酸酒精分化, 采取水洗。 (5) 充分流水冲洗不低于15分钟, 细胞核颜色在此期间会发生变化, 直至变为蓝色。 (6) 用1%浓度伊红液染色半分钟至1分钟, 随后用自来水略洗。应用无水遗传和95%乙醇、85%乙醇和75%乙醇脱水, 控制每次脱水时间在半分钟。 (7) 二甲苯透明, 每次60s, 共三次。 (8) 盖片封片, 在相应位置贴标签。
1.2.3 改进:
在病检中对大小不等的标本实施处理, 具体有脱水、染色与固定分开, 随后制片工作的开展可依照不同组织的特性进行, 用苏木精对细胞核充分染色直至成鲜蓝色, 黏液染为灰蓝色, 把钙盐颗粒、软骨基质染为深蓝色;用伊红液把细胞间质染为桃红色、阿粉红色, 胞浆内嗜酸性颗粒细胞染为鲜红色。一般情况下, 弹力纤维多以亮粉红色为主, 胶原纤维多以淡粉红色为主;蛋白性液体以粉红色为主, 红血球以橘红色为主。由于自身细胞和自身着色程度有一定的关联性, 可依照病理变化、生活周期情况进行变化。
1.3 观察指标
比较观察病理技术改进前后胃镜活检和肝胆、子宫内膜和胃肠等染色结果情况。
1.4 统计学分析
把SPSS 23.0软件作为数据统计分析, 计数资料以n (%) 表示, 采用连续校正x2检验。以0.05为界点, 当P大于界点值时无统计学意义;P小于界点值时有统计学意义。
2 结果
病理技术改进前胃镜活检和肝胆、子宫内膜和胃肠等染色结果情况均明显低于改进后 (P<0.05) 。表1示。
3 讨论
常规组织染色质量在病理科中能严重影响病理诊断结果, 同时还会对患者病情的判读产生误差, 从而延误患者病情, 使其错过最佳治疗时机, 对病患病情状态的改善能产生严重影响。细胞核染色质量在HE染色期间能对HE质量进行确定, 因此, 就病理科技术人员而言, 对染液有效、合格配置非常重要。病理技术人员需要对各式常规切片所需染液的染色配制、原理等情况充分了解掌握[3]。由于染色质量和固定时间、包埋和脱水及取材等多种因素, 均会对HE染色结果产生一定程度的影响。所以, 将组织送检前, 先对其实施固定, 保证组织和活体均有较为相似的形态及成分, 而且还能更好抑制自溶情况的产生。一旦组织原有结构受损, 或发生消失情况, 则易使制片质量下降, 对诊断病情产生影响[4]。待组织固定结束后, 组织可由工作人员在规定时间内送至病理室进行受检, 一旦固定时间偏长, 则会影响组织质量, 易使其出现变脆和变硬等情况, 导致最佳切片效果无法获取, 使诊断结果受影响。
有研究表明[5], 室温可在固定时维持在25℃左右, 如果在低温状态下加以固定, 则应适当将固定时间延长。浸泡方法在病理技术中是一种比较常见的手段, 医院病理科可实施此方法进行。通常在无特殊情况下, 应用10%浓度中性福尔马林固定液对所有离体后的外检组织加以固定。组织送检固定期间, 要确保有充足的固定液, 一般和组织相比, 固定液量需高出其>10倍, 大标本≥总标本8倍。大部分组织固定时间需控制在24小时内, 最长也需<48小时。取材时, 操作人员明确制定取材范围, 归纳、分类工作的开展应依照不同标本进行, 对取材方法、工具合理选择, 避免发生组织结构发生挤压, 从而影响组织结构。另外, 工作人员还要对取材厚度、大小等情况合理控制。
在制作切片时, 病理科工作人员要想使其良好性得到保障, 组织脱水环节是必不可少的。依照科室工作特点, 合理制定一套脱水程序, 同时还要熟练掌握制片好坏。制片难度会因组织脱水不佳及过度而加大, 进而能严重影响HE染色结果。所以, 工作人员除了要对脱水机定期维护外, 还要对脱水试剂定期更换, 从而能有效避免组织脱水受影响。此外, 有研究表明, 良好石蜡切片的制作, 也是对HE染色产生影响的关键, 通常将石蜡切片厚度控制在3.5～4μm, 针对有特殊要求的组织, 切片厚度可控制在2～3μm。切片厚度过薄或太厚, 均无法取得清晰的HE染色细胞核, 影响核浆对比, 导致诊断结果受影响。为确保HE染色质量, 除上述所述外, 染色也尤为重要。在本次研究中, 对石蜡切片86例进行病理技术HE染色, 经对比改进技术开展前后发现, 改进后的病理技术HE染色能有效提高病理诊断准确率, 有较好的临床应用价值。
总而言之, 在病理诊断中, 虽然病理技术HE染色能起到决定性作用, 使切片质量提升, 临床诊断准确性提高, 并且已成为临床病理诊断的金标准, 但临床仍需要对HE染色研究和相关报道进行不断深入, 便于后期为病症治疗方案、临床诊断提供数据支持。
参考文献
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