探讨AEG-1在唾液腺肿瘤中的表达和意义

　　唾液腺肿瘤占口腔颌面部肿瘤的22.7%，其组织病理类型众多且生物学行为各异。在唾液腺上皮性良、恶性肿瘤中，以多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌最为常见，对唾液腺肿瘤的生物学行为和治疗的研究多数集中在上述3种肿瘤。针对唾液腺肿瘤生物学行为的多样性，学者们进行了大量研究，但机制尚未明了，同时对其生物学行为和肿瘤患者的预后亦缺乏理想的判断指标。随着生物靶向治疗的日益开展，寻找与唾液腺肿瘤生物学行为密切相关，可以准确预测肿瘤患者预后的生物学标志物一直是学者们研究的热点。星形细胞上调基因1（astrocyte　elevated　gene-1，AEG-1）是近年新发现的一种与多种肿瘤关系密切的癌基因。众多研究表明，AEG-1基因在肿瘤的发生、发展以及肿瘤细胞的侵袭和肿瘤组织新生血管形成中起着重要作用。

　　AEG-1基因作为一种新的癌基因，正逐渐成为肿瘤研究的热点。本研究通过免疫组化检测唾液腺肿瘤组织中AEG-1的表达，初步探讨AEG-1在唾液腺肿瘤中的表达和意义。

　　1、材料与方法

　　1.1一般资料

　　选取2008年10月—2012年5月在中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科行手术治疗的唾液腺肿瘤患者组织病理标本85例。其中，多形性腺瘤37例，黏液表皮样癌21例（高分化9例、低分化12例），腺样囊性癌27例（16例伴神经浸润）；并选取同期15例非肿瘤手术切除的正常唾液腺组织作为对照。所有病例术前均未行放射治疗、化学治疗及其他相关的抗肿瘤治疗。

　　1.2实验方法

　　1.2.1免疫组化染色兔抗人AEG-1多克隆抗体购自英国Abcam公司，二步法免疫组化试剂盒购自北京中杉生物技术公司，参照公司说明书进行操作。DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性胶质瘤组织切片作阳性对照。

　　1.2.2结果判断于200倍视野下观察整张切片，选取3~5个免疫组化“热点”进行观察。免疫组化染色阳性细胞数≥10%为阳性。

　　1.3统计学处理

　　采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。

　　P＜0.05为差异具有显著性。

　　2、结果

　　2.1AEG-1在正常唾液腺和唾液腺肿瘤组织中的表达

　　唾液腺组织中未见AEG-1表达（图1）。唾液腺肿瘤组织中，AEG-1的阳性表达定位于细胞质，呈棕色（图2～6）。21例黏液表皮样癌AEG-1的阳性率为54%（11/21），27例腺样囊性癌AEG-1的阳性率为48%（13/27），37例多形性腺瘤的阳性率为27%（10/37）。肿瘤组织中，AEG-1的阳性率显著高于正常唾液腺组织（2/15，13%）（χ2=8.634，P=0.013）（Kruskal　Wallis检验），恶性肿瘤组（黏液表皮样癌和腺样囊性癌）AEG-1的阳性率（24/48，50%）显著高于良性肿瘤（多形性腺瘤，27%）（Z=-2.131，P=0.033，r=0.232）（Mann-WhitneyU、WilcoxonW检验详见表1。

　　2.2AEG-1在唾液腺恶性肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系

　　AEG-1在唾液腺恶性肿瘤组织中的表达与肿瘤原发灶的大小密切相关，晚期肿瘤组（T3+T4）AEG-1阳性率为80%（8/10），显著高于早期肿瘤组（T1+T2）（16/38，42%）（Z=-2.110，P=0.035，r=0.308）（Mann-Whitney　U、Wilcoxon　W检验）。

　　虽然2例伴有远处转移的肿瘤均为AEG-1阳性，但与无远处转移组AEG-1表达的比较无显著差异（精确概率法）。唾液腺恶性肿瘤AEG-1的表达与患者年龄、性别无关（P＞0.05）（Mann-Whitney　U、Wilcoxon　W检验）。

　　在16例伴神经浸润的腺样囊性癌组织中，8例AEG-1阳性（50%）；11例无神经浸润的组织中，5例阳性（45%），AEG-1的表达与神经浸润与否无关（P=0.865）；9例高分化黏液表皮样癌组织中，4例AEG-1阳性（44%）；12例低分化组织中，7例阳性（58%），AEG-1的表达与肿瘤分化程度无关（P=0.602）。

　　3、讨论

　　AEG-1是2002年发现的新基因，具有原癌基因的特性。研究表明，AEG-1可由PI3K/AKT信号通路和c-Myc诱导表达，AEG-1也可以激活PI3K/AKT信号通路和诱导c-Myc表达，进而促进细胞恶变。同时，AEG-1还可活化NF-κB和MAPK、Wnt等信号通路。因此认为，AEG-1在诱导细胞恶性转化中发挥重要作用。Srivastava等的研究表明，AEG-1高表达可诱导小鼠肝细胞癌的形成。Gnosa等的研究证明，在正常结肠黏膜上皮、早期结肠癌组织、伴淋巴结转移的结肠癌组织和伴肝转移的结肠癌组织中，AEG-1的mRNA和蛋白表达水平依次升高；同时，AEG-1的表达与肿瘤的分期密切相关，推测AEG-1的表达升高在结肠癌的发生、发展中发挥重要作用。本研究结果显示，AEG-1在唾液腺肿瘤中的阳性率显著高于正常唾液腺组织；同时，恶性肿瘤组织的阳性率显著高于良性肿瘤，提示AEG-1的表达与唾液腺肿瘤的发生和恶变有关，在唾液腺肿瘤发生和恶变过程中起着一定作用。

　　在多种恶性肿瘤组织中，表达增强的AEG-1在恶性肿瘤的发生、进展、侵袭、转移中发挥重要作用。Jiang等的研究表明，AEG-1表达与结肠癌患者的Duke分期和远处转移密切相关；多因素分析显示，AEG-1是结肠癌患者的独立预后因子。刘凯军等的研究表明，AEG-1表达与胃癌患者肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关，提示AEG-1可能通过调控p53和增殖细胞核抗原的表达而促进胃癌的发生和进展。本研究结果显示，AEG-1与唾液腺恶性肿瘤的原发灶大小密切相关，肿瘤越大，AEG-1的阳性率越高，提示AEG-1可能起着促进细胞生长、减少凋亡的作用，这与Ke等的发现吻合。另外，虽然无显著差异，本实验结果仍显示，低分化组黏液表皮样癌AEG-1的阳性率高于高分化组，这种差异可能也与AEG-1促进细胞生长有关。腺样囊性癌的嗜神经性是一种较为特殊的生长方式，Toth等认为，腺样囊性癌组织中的肌上皮细胞向施万细胞转化，可能是其神经侵袭的机制。本实验虽然显示，伴神经浸润组AEG-1的阳性率高于无神经浸润组，但无显著差异，可能与样本量少有关，有待进一步研究。

　　综上所述，AEG-1在唾液腺恶性肿瘤组织中的表达明显升高，并与肿瘤的临床分期密切相关，提示AEG-1在唾液腺肿瘤的发生与恶变过程中可能起着一定作用。

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