苏木精染液的染色力测定与评价

　　苏木精染液的染色力是影响 HE 染色成功的关键因素之一，而染色力随染色时间和切片数量的增加呈进行性下降。实际工作中技术人员大多依据个人经验来决定苏木精染液是否需要更换，缺乏统一标准，造成批间差异大。本文通过测定苏木精染液使用过程中 pH 值的变化来确定染液的酸度值，评价苏木精染液的染色力，为实际工作中苏木精染液的更换提供量化参考指标，从而更好地开展 HE 染色的质量控制。

　　1 材料与方法

　　1. 1 苏木精染液的配制 采用常规使用的改良 Lillie-Mayer苏木精染液，具体配制方法如下[1]: 苏木精 5 g 溶于 50 ml 无水乙醇，50 g 硫酸铝钾充分溶于 650 ml 蒸馏水后与苏木精无水乙醇液充分混合，加入 500 mg 碘酸钠，最后加入甘油300 ml和冰醋酸 20 ml,室温静置 1 周后备用。

　　1. 2 仪器 实验所用染色机为 Leica AutostainerXL,pH 值测定计为 sartorius PB -10.

　　1. 3 方法 随机挑选胃、肠、肺、淋巴结、乳腺、肝等组织蜡块，共 10 块，每个蜡块连切 18 张切片备用； 用新苏木精染液行常规 HE 染色，分别选取第 0、500、1000、1500、2000、2500张切片时测量染液的 pH 值，每一时间点同步选取实验备用片进行染色，并更换新的分化液和蓝化液； 更换苏木精染液后重复本实验 2 次。每批次所染切片均由 2 名高年资病理医师与一名技术主管同时对所染切片进行评价，每张切片 3者评价结果必须一致，评价结果不一致的切片均算不合格片，每一批 10 张切片中有 4 张切片染色评价不合格即可确定染液的染色力不够需更换。

　　2 结果

　　2. 1 pH 值与染色切片数量的关系 3 次实验中，随着染色切片数量的增加，染液的 pH 值也在逐步升高。3 次实验中同一时间点染液 pH 值的均值与染色切片数量的关系见表1.

　　2. 2 pH 值与苏木精染液染色力的关系 不同批次的实验结果显示，苏木精染液染色力在染液 pH 值 1. 51 ~1. 87 间变化小，随着染色切片数的增加，染液 pH 值逐渐升高，而染色力不断下降； 第 2、3 次实验中，染液累积染色切片至 2500,pH 值分别达到 2. 65 和 2. 71 时，染色合格片分别只有 6 和 4张（ 表 2） .

　　3 讨论

　　苏木精 - 伊红（ HE） 染色是组织与细胞学最常用的染色方法之一，苏木精染液的染色力是影响 HE 染色成功的关键因素。苏木精染液的染色力主要受苏木精的氧化状态影响，氧化不足或过度氧化均可影响其染色力。各类苏木精染液配制方法的区别主要在氧化方法的选择及氧化剂用量上。苏木精染液配制过程中加入醋酸主要是调节染液 pH 值，当pH 值处于合适范围时，不仅可以抵消氧化剂的过度氧化、促进氧化苏木精（ 即苏木红） 与铝盐结合形成蓝色色淀、还可维持细胞核呈酸式电离，增强细胞核的选择性着色，减少苏木精沉渣与氧化膜的形成[1].不同方法配制的苏木精染液初始 pH 值可能不尽相同，但确保苏木精染液的酸性环境和稳定染液的 pH 值对苏木精染液的染色力尤为重要。苏木精染液染色力随切片数量的增加呈渐进式下降，其可能的原因： ①染液染色过程中苏木精不断氧化； ②现行 HE 染色不论是手工还是仪器，大多采用浸染式染色方法，切片脱蜡至水化进入苏木精染液前不可避免地带入一些自来水，随着染液的累积使用，使染液的 pH 值逐渐升高，染液的颜色和染色力随之也不断变化[2].为了尽可能减少由于染液的累积使用而导致染液 pH 值升高，有研究者在切片进入苏木精染液前先用 2%冰醋酸水溶液或 10%柠檬酸水处理，以避免切片水洗后带入自来水，很好地稳定了染液的 pH 值，延长了苏木精染液的使用时间[3].本研究 3 次重复试验结果显示：随苏木精染液的累积使用染液 pH 值不断升高； 染液 pH 值维持在一定范围内时染液的染色力稳定，pH 值超出范围后染色力即明显下降，说明需要更换染液。

　　参考文献：

　　[1] 彭 霞。 不同配方苏木精染液染色效果观察[J]. 诊断病理学杂志，2009,01: 66.

　　[2] 郑明军，马华玲。 冰醋酸在苏木精和伊红染色中的不同作用[J]. 诊断病理学杂志，2013,01: 60.

　　[3] 郑明军。 组织细胞成分和染液 pH 值对苏木精-伊红染色的影响[J]. 实用医技杂志，2013,20（ 6） : 668.