微卫星标记检测大白猪和长白猪种群的遗传多样性(2)

　　2 结果。

　　2. 1 扩增结果。

　　PCR 产物经 2% 的琼脂糖凝胶检测，扩增片段大小与预期结果相符（ 图 1） .大白猪和长白猪在19 个微卫星位点分别检测到 84 和 89 个等位基因，两群体共享 57 个等位基因，平均含有 4. 42 和 4. 63个等位基因（ 表 2） .19 个位点中 S0005 位点等位基因最多有 14 个，Sw2406 和 S0218 位点等位基因最少各 3 个（ 表 3） .

　　2. 2 等位基因和杂合度分析。

　　19 个微卫星位点的平均杂合度相对较高，其中长白猪略高于大白猪分别为 0. 6066 和 0. 5877,均在 0. 5 ~0. 7 之间（ 表 2） .大白猪群中 S0005 位点的杂合度最高为 0. 8395 检测到杂合体 43 个，S0178位点 的 杂 合 度 最 低 为 0. 1515 仅 检 测 到 8 个。

　　Sw2406 位点共检测到 221、233、251 bp 3 个等位基因，而 251 bp 等位基因仅存在于大白猪群中，在长白猪群中并没有检测到该等位基因，表明 251 bp 等位基因为大白猪特有的等位基因； 长白猪 S0178 位点的杂合度最高为 0. 7570,S0218 位点的杂合度最低为 0. 0204,在 S0218 位点仅检测到 167 bp 和 169bp 两个等位基因而 169 bp 等位基因在长白猪群中只检测到一个。此外，Sw857 144 bp、Sw936 117 bp、S0143 168 bp、S0155 152 bp 和 S0178 109 bp 这 5 个位点在两群体间的分布和含量差异极显着。结果表明相同位点的等位基因个数和杂合度在不同群体差异极显着。

　　2. 3 多态信息含量。

　　两个群体中 S0005 位点的多态信息含量最高为0. 8102,S0178 位点多态信息含量最低 0. 1387,大白猪和长白猪的平均多态信息含量分别为 0. 5271 和0. 5652. S0005、 S0218、 S0068、 Sw2410、 S0097、Sw122、Sw2406、S0355 位点的多态信息含量在大白猪群普遍高于长白猪群，而其他 11 个位点则反之（ 表 2） .19 个微卫星位点中 S0005 位点的多态性信息含量最高为0. 8696,Sw2406 位点多态信息含量最低为 0. 3328,平均多态信息含量为 0. 6388（ 表3） .结果表明大白猪和长白猪两个群体间的平均多态信息含量差异无显着性（ P > 0. 05） ,没有表现直接的线性关系。

　　2. 4 F-统计和遗传结构分析。

　　通过微卫星座位的 F-统计以及 Nm 来检验群体间的遗传分化程度和迁移率（ 表 3） .群体的固定指数 Fst 为 0. 0273 -0. 5218,均值为 0. 2145,而 Fis 和Fit 指数有正有负，如 S0178、S0218、IGF1、S0228、S0355、Sw1067 位点的 Fis 值均为正值，而 Fit 除了SOO68 为负值外其他 18 个位点均为正值。Fis 和Fit 出现正值表明群体基因型分化显着。 Nm 为0. 2291 - 8. 9075,平均值为 1. 5320.Nm 越小表明群体的遗传结构越相似。群体遗传结构分析表明，两猪群遗传分化结构稳定（ 图 2） ,一方面可能因为它们是纯系品种，另一方面则主要是因为两猪群在19 个位点的等位基因较少，共享极为有限的等位基因。

　　3 讨论。

　　3. 1 群体的多样性。

　　微卫星标记以其分析方法便捷、操作简单等优点，在亲子鉴定、辅助标记和群体遗传多样性等方面得到广泛应用。研究表明 19 个微卫星位点之间的多样性差异存在显着性（ P > 0. 05） ,主要表现在相同位点的等位基因频率在大白猪和长白猪群体中的分布差异有显着性（ P >0. 05） ,如在 S0178 位点 109bp 的等位基因在大白猪种群出现的频率最高，而长白猪种群在 109 bp 处等位基因仅检测到 3 个。其中 19 个位点特异性等位基因出现在长白猪群的频率较高。如 S0178 位点处 121、123、125 bp 等位基因，Sw936 位点处 117 bp 等位基因，S0228 位点处230 和 234 bp 等位基因和 S0155 位点处 152 bp 等位基因仅在长白猪种群中被检测到，而 Sw857 位点处 144 bp 和 S0143 位点处 168 bp 等位基因仅在大白猪被检测到，可能与长白猪具有较高的杂合度有关。可将 S0155、S0143、S0178、Sw857 和 Sw936 位点作为长白猪和大白品种鉴定的候选微卫星位点。李何君等[17]和 Costa 等[18]分别应用 12 和 14 对微卫星引物对美系、英系、法系大约克夏猪群体和欧洲野猪进行品系鉴定及个体鉴定，鉴定正确率均为100% ,本研究选取的 5 对候选品种鉴定引物均在两者的研究之列，说明该位点是准确、有效、可靠的品系鉴定位点。此外，分别对大白猪和长白猪群体的观测杂合度和期望杂合度进行卡方检验，表明两群体差异无显着性 （ P > 0. 05） ,符合封闭群条件（ 参照实验用小型猪遗传质量控制，北京地方标准：DB11 / T 828. 3 2011） .可从分子水平明确两种群的遗传背景，反映出大白猪和长白猪两群体之间的遗传差异并作为“活的仪器”广泛应用于病毒的感染实验，疫苗的检定和评价，为遗传保种和实验动物化提供良好的分子基础。

　　遗传多样性的衡量指标通常为群体的平均杂合度和多态信息含量，大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为 0. 5271 和 0. 5877; 长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为 0. 5652 和0. 6066.大白猪和长白猪两个品种的平均杂合度与平均多态信息含量与赵振华等[19]和巩元芳等[20]对国内大白猪和长白猪的研究结果相比较低，表明该种群与国内纯系品种相比人工选育的程度更高，遗传结构更趋稳定。此外，19 个微卫星座位的平均杂合度比 Li 等[21]对台湾欧洲纯系品种猪的研究结果略高，表明它们的选育程度非常接近，遗传结构比较稳定，更适合选用于标准的实验动物材料。

　　3. 2 群体的遗传分化与变异。

　　Fis 值和 Fit 值均有正有负，表明群体的等位基因和基因型分化显着，主要表现为相同位点的等位基因在不同品种间的分布差异显着（ P >0. 01） .而Fst 值表示群体间的分化程度，Fst 的平均值为0. 2145 与赵振华等[19]和杨彤彤等[22]相比此次引进种群的分化程度显着（ P >0. 01） 低于国内部分纯种猪群[15].Nm 值越小表示群体间的遗传结构越相似，Nm 的平均值为 1. 5320 也显着（ P > 0. 01） 低于杨彤彤等[22]对我国部分纯系猪的研究。与国内部分保存的纯系猪相比又一次证明了中国农业科学院哈尔滨兽医研究所引进的大白猪和长白猪两纯系种群群体内分化较小遗传结构稳定适合用于实验动物材料，这可能与该种群的长期人工选育有关。（图表略）

　　参 考 文 献。

　　[1] Molina RM,Cha SH,Chittick S,et al. Immune response againstporcine reproductive and respiratory syndrome virus during acuteand chronic infection [J]. Vet Immunol Immunopathol,2008,126: 283 - 292.

　　[2] Drew TW. The emergence and evolution of swine viral diseases:to what extent have husbandry systems and global trade contribu-ted to their distribution and diversity? [J]. Rev Sci Tech,2011,30（ 1） : 95 - 106.

　　[3] Lunney JK,Ho CS,Wysocki M,et al. Molecular genetics of theswine major histocompatibility complex,the SLA complex [J].Dev Comp Immunol,2009,33: 362 - 374.

　　[4] 张德福，戴建军，吴彩凤，等。 小型猪实验动物化研究现状及其应用前景[J]. 猪业科学，2009,3: 74 -76.