运用高效液相色谱法测定黄精丸中阿魏酸的含量

　　黄精丸是由当归黄精 2 味组成的中成药，具有补气养血等功效，用于气血两亏，身体虚弱，腰腿无力，倦怠少食。 其中黄精具有补气养阴，健脾润肺，延年驻颜之功[1]; 当归性甘、辛，温。 归肝、心、脾经。 为伞形科植物的干燥根，是临床常用中药，有活血调经、润肠止痛之功效[2],当归含有内酯类、生物碱类、有机酸类或酚类以及中性油类等多种成分[3].在 2010 年版中国药典一部中，阿魏酸作为当归质量控制的指标成分。 本文采用 HPLC 的方法测定黄精丸中的阿魏酸含量。

　　1 仪器、试药及样品

　　Agilent 1200 高效液相色谱仪，Agilent 1260DAD 检测器，Agilent 1200 Als 自动进样器，AgilentChemStation 工作站； 分析天平（ 北京 Sartorious 仪器有限公司） ; KQ-500 型超声波清洗器（ 昆山超声仪器有限公司） .

　　对照品阿魏酸（ 批号 110773-201012） 购买于中国食品药品检定研究院，水为超纯水，乙腈为 HPLC级（ 赛默飞世尔科技有限公司） ,磷酸为分析纯（ 北京化工厂） .

　　黄 精 丸 3 批 （ 批 号： 13010113、13010114、13010115） 市售。

　　2 溶液的配制

　　2. 1 对照品溶液

　　精 密 称 取 含 量 为 99. 6% 阿 魏 酸 对 照 品12. 90 mg,置 1 000 mL 容量瓶中，加甲醇适量使其溶解 并 稀 释 至 刻 度，摇 匀，作 为 对 照 品 溶 液（ 0. 0129 mg·mL- 1） .

　　2. 2 供试品溶液

　　取本品大蜜丸，剪碎，取 0. 4 g,精密称定，加等量的硅藻土研碎，过 40 目筛，混合均匀，置圆底烧瓶中，精密加 70% 甲醇 20 mL,称定重量，加热回流30 min,放冷，再称定重量，用 70% 甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，用微孔滤膜（ 0. 45 μm） 滤过，取续滤液，即得。

　　2. 3 阴性样品溶液

　　按处方配比，取除当归的黄精药材，粉碎成细粉，过 40 目筛，按“2. 2”项下方法配制出对照品溶液。

　　3 色谱条件

　　色谱柱： Aglient TC-C18 （ 4. 6 mm × 250 mm,5 μm） 分析柱； 流动相： 以乙腈-0. 085% 磷酸溶液（ 20∶ 80） ; 检测波长 316 nm; 柱温 35 ℃； 流速流速1. 0 mL·min- 1; 进样量： 10 μL.

　　在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各 10μL,分别注入色谱仪，结果表明样品中其他成分对阿魏酸的测定无干扰，见图 1.

　　4 方法学考察

　　4. 1 线性关系的考察

　　分别吸取 0. 0129 mg·mL- 1对照品溶液 1,3,5,7,9 μL,注入液相色谱仪，以进样量 （ μg） 对色谱峰面积积分值（ Y） 作标准曲线，并进行回归，计算得回归方程为：

　　Y = 3 173. 381 395X - 0. 286 500 r = 0. 999 998结果表明阿魏酸进样量在 0. 0129 μg ~ 0. 1161 μg的范围内峰面积呈良好线性关系。

　　4. 2 稳定性试验

　　精密 称 取 黄 精 丸 供 试 品 （ 批 号 13010113）0. 400 9 g,照“2. 2”项下方法，分别在 0、1、3、5、8、12、24 h 进样测定，以峰面积计算，阿魏酸峰面积的 RSD 为 0. 99% ,结果表明黄精丸自制备在 24 h内稳定。

　　4. 3 精密度试验

　　取同一批号的黄精丸样品（ 批号 13010113） 1份，按“2. 2”项下方法制备和测定，含量测定方法按拟定的色谱条件连续进样 6 次，以峰面积计算，RSD为 0. 56%,小于 3%,精密度良好。

　　4. 4 重复性试验

　　取同一批号的黄精丸样品（ 批号 13010113）6 份，按“2. 2”项下方法制备和测定，含量测定方法按拟定的色谱条件进行测定，测得阿魏酸的平均含量 （ n = 6） 为 2. 3121 mg·丸- 1,RSD 为 0. 19%,结果表明重复性良好。

　　4. 5 加样回收率试验称取已知含量的同一批黄精丸样品 （ 批号13010113,阿魏酸含量为 0. 255 3 mg·g- 1） 6 份，每份约 0. 2 g 精密称取，分别精密加入阿魏酸对照品溶液 56. 55 μg,按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按正文色谱条件测定其含量，结果平均回收率（ n = 6） 为 99. 96%,RSD 为 2. 70%,表明本实验具有良好的回收率。

　　5 样品含量测定

　　精密称取黄精丸样品 3 批，每批两份，按“2. 2”项下方法制备供试溶液，按拟定的色谱条件进行测定。 按外标法计算阿魏酸的含量，结果见表 1.

　　6 讨 论

　　不同的提取方法，溶剂及提取时间对实验结果有着较大影响。 本实验对不同的提取方法（ 超声提取、回流提取） 、提取时间（ 20 min、30 min、40 min）及溶剂（ 100% 甲醇、70% 甲醇） 进行了考察，实验结果显示，回流加热提取率高，70% 甲醇比 100% 甲醇提取的含量要高，回流加热提取30 min,40 min 的含量比回流加热提取 20 min 的含量高，但回流加热提取 30 min 与 40 min,信号已无差别，所以提取工艺选择回流加热时间为 30 min,提取溶剂为 70%甲醇。

　　采用中国药典方法以乙腈-0. 085% 磷酸溶液（ 20∶ 80） 为流动相对阿魏酸进行 HPLC 法测定，分离较好，基线较低，节省了时间与溶剂，保持了柱效的稳定性，分离较理想。

　　本法用 HPLC 法测定黄精丸中阿魏酸，样品处理方法简单，稳定，重复性良好，可用于黄精丸药丸的质量控制。

　　参 考 文 献

　　[1] 魏宪纯，李明杰，张春蕾。 九转黄精丸对衰老小鼠皮肤及血清中脂褐质含量影响的研究[J]. 中医药信息，2009,26（ 6） : 51 - 52.

　　[2] 国家药典委员会。 中华人民共和国药典[M ]. 第一部。 北京： 中国医学科技出版社，2010: 124.

　　[3] 杨帆，肖远胜，章飞芳，等。 当归化学成分的 HPLC-MS/MS 分析[J]. 药学学报，2006,41（ 11） : 1078 -1083.