运用高效液相色谱法测定某黄芩制剂中黄芩苷的含量

　　干姜黄芩黄连人参汤出自《伤寒论》之厥阴篇 , 由干姜、黄芩、黄连、人参 4 味中药组成 , 用于治疗胃热呕吐兼肠寒腹痛、下利、肠鸣之上热下寒之证.现代临床多用于治疗胃肠炎[1]、消化性溃疡[2]、腹泻、糖尿病[3]等疾病.干姜芩连人参煎膏剂是在原方基础上进行剂型的改良 , 为了能够有效地控制该制剂的质量、保证其稳定性 , 本课题参考《中国药典》[4]及相关资料 , 采用 HPLC 法对本制剂中主药之一黄芩中黄芩苷的含量进行测定.现报告如下.

　　1 材料与方法

　　1. 1仪器与试药 紫外线分析仪 (ZF-I 型 , 上海顾村电光仪器厂 );高效液相色谱仪 (Waters1515 型 , 美国 Waters 公司 );对照品黄芩苷 ( 批号 :110715-201117) ;甲醇为色谱纯试剂 ;水为二次蒸馏水 , 其他试剂均为分析纯 , 煎膏剂自制 ( 批号分别为 150201、150202、150301、150302、150401、150402).

　　1. 2方法
　　
　　1. 2. 1色谱条件 色谱柱:AgilentExtendODS反相柱(4.6mm×250 mm, 5 μm) ;流动相 :甲醇 - 水 - 磷酸 (45:55:0.2) ;检测波长 :278 nm ;流速 :1.0 ml/min ;柱温 :室温.

　　1. 2. 2溶液的制备
　　
　　1. 2. 2. 1供试品溶液的制备 精密量取样品 0.3 ml, 置 50 ml容量瓶中, 加入60%甲醇定容至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液,作为供试品溶液.

　　1. 2. 2. 2对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量 , 精密称定 , 加甲醇溶解制成 55 μg/ml 的溶液 , 作为对照品溶液.

　　1. 2. 2. 3阴性样品溶液的制备 按处方制备不含黄芩药材的模拟制剂 , 精密量取 0.3 ml, 按照 1.2.2.1 法制备成缺黄芩的阴性样品溶液.

　　1. 2. 3最佳吸收波长的确定 以流动相作为空白对照 , 将黄芩苷对照品溶液和供试品溶液在 200~600 nm 内进行光谱扫描 , 结果黄芩苷在 278 nm 处显示有最大吸收.因此选择278 nm 作为检测波长.

　　2 结果

　　2. 1专属性试验 分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液与阴性样品溶液各 10 μl, 注入液相色谱仪中 , 记录 3 份溶液的色谱图.结果表明 , 阴性样品在与黄芩苷峰相近的保留时间内出现两个干扰峰 , 但测得两峰峰面积均为供试品峰面积的 2%以下 , 因此可以说明阴性对黄芩苷的测定无影响 , 本方法专属性良好.

　　2. 2线性关系的试验 精密称取黄芩苷对照品适量, 加甲醇制成每 1 毫升含 0.203 mg 的对照品贮备液.精密吸取上述贮备液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml, 分别置于 10 ml 量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀.分别精密吸取上述溶液 10μl, 注入液相色谱仪中 , 以进样量为横坐标 , 色谱峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程 Y=2.88×107X+7.45×104,r=0.9992, 结果表明黄芩苷在 0.0203~0.1421 mg/ml 内线性关系良好.

　　2. 3精密度试验 精密吸取供试品溶液 10 μl, 注入液相色谱仪中 , 重复进样 6 次 , 测定黄芩苷峰面积 , RSD 为 1.62%.结果表明仪器精密度良好.

　　2. 4重复性试验 量取同一批样品 0.3 ml, 6 份 , 制成样品溶液 , 进样 10 μl, 记录峰面积.计算得黄芩苷含量平均值为70.25 μg/ml , RSD 值为 2.26%.表明重现性较好.

　　2. 5稳定性试验 精密吸取供试品溶液 10 μl, 每间隔 1 h 进样 1 次 , 8 h 内测定黄芩苷峰面积 , RSD 值为 1.86%.结果表明供试品溶液在 8 小时内稳定性良好.

　　2. 6加样回收率试验 量取样品共 6 份 , 分别精密加入1.75 mg/ml 的对照品溶液 1 ml, 按 2.2.1 法制成样品溶液 , 照样品含量测定方法进行测定 , 计算回收率.见表 1.该法测定黄芩苷的含量方法学合理 , 准确、可靠.【1】

　　
　　2. 7取 6 批中试产品 ( 批号分别为 150201、150202、150301、150302、150401、150402), 按供试品溶液制备方法制备 , 精密吸取 10 μl 样品溶液进样 , 测定黄芩苷含量分别为 11.71 mg/ml、11.86 mg/ml、15.27 mg/ml、15.04 mg/ml、13.49 mg/ml、13.88 mg/ml.

　　3 小结

　　黄芩为方中君药之一 , 在本制剂的临床疗效中起着重要作用 , 所以对其有效成分黄芩苷进行了定量研究 , 结果表明 ,黄芩苷含量测定方法操作简便 , 专属性强 , 回收率高[5-8].

　　本方法的建立 , 可使干姜芩连人参煎膏剂的质量得到控制 ,以确保其在临床应用的安全有效.

　　参 考 文 献
　　
　　[1] 陈岩 . 干姜黄芩黄连人参汤治疗慢性结肠炎 56 例疗效观察 . 新中医 , 2010, 42(10):38-39.
　　[2] 徐州 , 周德端 , 段国勋 , 等 . 干姜芩连人参汤治疗消化性溃疡临床观察 . 四川中医 , 1994(1):23-25.
　　[3] 金末淑 , 陈欣燕 , 姬航宇 , 等 . 仝小林教授运用干姜黄芩黄连人参汤治疗 2 型糖尿病辨证要点分析 . 云南中医学院学报 , 2011,34 (1):32-34.
　　[4] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 . 北京 : 化学工业出版社 , 2010:116.
　　[5] 彭智平 . 基于干姜黄芩黄连人参汤临床有效的煮散工艺研究及其药效学分析 . 中国中医科学院 ,2014:15-16.
　　[6] 郑德柱 . 干姜黄芩黄连人参汤临床应用 . 河北中医 , 1991(5):125-126.
　　[7] 胡俊辉 . 干姜黄芩黄连人参汤中 11 种药效成分的 RP-HPLC测定 . 中药新药与临床药理 , 2014, 1(1):77-81.
　　[8] 陈欣燕,金末淑,姬航宇 , 等 . 仝小林教授运用干姜黄芩黄连人参汤治疗 2 型糖尿病 80 例临床观察 . 中华中医药杂志 ,2013(2):463-465.