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卡维地洛预先干预对脓毒症大鼠心脏的影响

来源:未知 作者:傻傻地鱼
发布于:2015-12-19 共3678字
摘要

  脓毒症( sepsis) 是感染与感染引起的全身炎症反应[1],进一步发展可导致感染性休克和多器官功能障碍综合征,是当前危重病患者死亡的主要原因之一。心脏是脓毒症易损的靶器官之一。现已知炎性反应和交感神经兴奋、氧化应激等参与了脓毒症的病理生理过程。心血管疾病的常用药物卡维地洛作为第 3 代的 β 受体阻滞剂,兼有 α 受体阻滞剂、抗氧化、抗心律失常、抑制中性粒细胞浸润等特性,经过临床观察,长期服用过卡维地洛的患者在发生脓毒症时,治疗效果多较其他未曾服用过此药物的患者好,目前关于卡维地洛对脓毒症心脏的影响研究也不多见,该研究旨在明确卡维地洛预先干预对早期脓毒症大鼠心脏的影响。

  1 材料与方法

  1. 1 试剂与仪器 卡维地洛粉剂( 美国 Sigma 公司) ; 脂多糖( lipopolysaccharide,LPS) ( 上海纪宁实业有限公司) ; 丙二醛( malondialdehyde,MDA) 、超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD) 测试盒( 南京建成生物工程研究所) ; solar3000 多功能心电监护仪( 美国 GE 公司) ; 罗氏 2010 电化学发光仪( 北京英博科贸有限公司) ; LG10-2. 4A 离心机( 北京医用离心机厂) ; 低温高速离心机( D-37520,德国 Sig-ma 公司) ; 紫外分光光度计( 美国 HP 公司) ; 电动玻璃匀浆机( 宁波新芝公司) ; 液相色谱仪( 郑州国达仪器设备有限公司) ; Olympus 光学显微镜( BX51,日本奥林巴斯公司) ; 7170 全自动生化分析仪、JEM-1230 透射电镜( 日本日立分司) .

  1. 2 动物分组及处理 40 只雄性 Wistar 大鼠( 南昌大学医学院实验动物科学部提供) ,体重 250 ~300 g,随机分为脓毒症组( S 组) 、脓毒症卡维地洛预先干预组( CS 组) 、生理盐水对照组( N 组) 和卡维地洛对照组( C 组) ,每组 10 只。① CS 组大鼠给予卡维地洛 10 mg/( kg·d) 灌胃,1 次/d; 4 周后尾静脉注射 LPS( 20 mg/kg) 制备脓毒症模型; ② S 组大鼠给予卡维地洛等容量的生理盐水灌胃,4 周后尾静脉注射 LPS( 20 mg/kg) 制备脓毒症模型; ③ N组大鼠给予与卡维地洛等容量的生理盐水灌胃,尾静脉注射与 LPS 等容量的生理盐水; ④ C 组大鼠给予卡维地洛 10 mg/( kg·d) 灌胃,1 次/d; 4 周后尾静脉注射与 LPS 等容量的生理盐水。

  1. 3 动脉血压、心率测定 以注射 LPS 为时间起点,24 h 后各组实验大鼠于 10% 水合氯醛 300 mg/kg 腹腔注射麻醉后,行右股动脉插管、连接多功能心电监护仪测定动脉血压、心率。

  1. 4 心肌酶谱、血清 N 末端脑钠肽前体( amino-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proB-NP) 检测 测完血压心率后,心脏穿刺取血 4 ml,2ml 用于全自动生化检测仪检测心肌酶谱磷酸肌酸激酶( creatine kinase,CK) 和磷酸肌酸激酶同工酶MB( creatine kinase isoenzyme-MB,CK-MB) ; 2 ml 用于电化学发光法测定大鼠血清 NT-proBNP.

  1. 5 心肌组织处理及心肌 SOD、MDA 和 ATP 检测 取血后立即开胸,迅速取出大鼠全心室,心尖处三分之一液氮冻存以备心肌三磷酸腺苷( andade-nosine triphosphate,ATP) 测定,中间三分之一福尔马林固定以备病理检查,心底三分之一组织匀浆后按试剂盒方法测定 SOD 和 MDA 含量。以反相高效液相色谱法测定 ATP 含量。

  1. 6 病理检查 光镜标本经 10% 中性福尔马林固定,常规石蜡切片,HE 染色后光镜观察,电镜标本经 3%戊二醛溶液固定,1% 锇酸后固定,乙醇 - 丙酮溶液逐级脱水,EPON812 包埋,AO 恒低温切片机切片,醋酸铀和枸橼酸双染色,电镜观察。4 组标本处理、电镜观察条件等均相同。

  1. 7 统计学处理 采用 SPSS 11. 5 软件进行分析。计量资料以珋x ± s 表示。多组间比较采用方差分析。

  2 结果

  2. 1 各组大鼠心率、血压、心功能比较 与 N 组比

  较,S 组大鼠心率明显增快,而 C 组和 CS 组大鼠心率明显减慢,S 组和 CS 组大鼠血浆 CK、CK-MB 和NT-proBNP 浓度均明显增高( P < 0. 05) .与 S 组比较,C 组和 CS 组大鼠血浆 CK、CK-MB 和 NT-proBNP浓度均明显下降( P <0. 05) .与 C 组比较,CS 组血浆 CK、CK-MB 和 NT-proBNP 浓度均明显增高( P <0. 05) ,而心率差异不大。4 组中 S 组血压最低,其次为 CS 组,再次为 C 组,但各组间血压差异无统计学意义( P >0. 05) .见表 1.

  2. 2 各组大鼠心肌 MDA、SOD 和 ATP 浓度比较

  与 N 组比较,S 组心肌 MDA 浓度明显增加,SOD、ATP 浓度明显降低( P < 0. 05) ; CS 组心肌 ATP 明显下降( P < 0. 05) ,但 MDA 和 SOD 浓度与 N 组差异无统计意义( P >0. 05) ; C 组心肌 MDA 浓度明显下降,SOD 浓度明显上升( P <0. 05) ,而 ATP 浓度与 N组差异无统计意义( P >0. 05) .与 S 组比较,CS 组和 C 组心肌 MDA 明显下降,SOD、ATP 浓度上升( P< 0. 05) .与 C 组比较,CS 组心肌 ATP 浓度明显下降( P < 0. 05) ,而心肌 MDA 和 SOD 浓度差异两组差异无统计学意义( P >0. 05) .见表 2.

  2. 3 各组大鼠心肌病理改变 光镜下心肌病理改变: N 组和 C 组心肌细胞排列均匀整齐,横纹清楚,细胞大小均一,心肌细胞间隙无变化。S 组心肌细胞略肥大,心肌细胞排列稍紊乱,CS 组心肌变化介于两者之间。4 组间差异并不显著。
电镜下心肌线粒体改变: C 组与 N 组心肌细胞内线粒体结构完整,形态正常,S 组心肌细胞内线粒体密度降低,体积增大,嵴数量减少,嵴膜清晰度下降,基质电子密度减低,部分粗面内质网增生,增生的粗面内质网常密集成片,形成指纹状结构或围绕变性的线粒体; CS 组心肌细胞线粒体也表现为密度降低,体积增大,峭数量减少,基质电子密度降低,但程度较 S 组减轻。

  3 讨论

  脓毒症患者中大约 40% ~ 50% 会合并心脏功能不全 ( sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD) ,其中出现严重心功能衰竭 ( 心衰 ) 者约7%[2].近 30 年来关于 SIMD 的研究没有取得实际性进展,近年来有心肌保护作用的 β 受体阻滞剂在脓毒症中的应用逐渐受到重视[3].研究[4]显示 β受体阻滞剂可产生抗炎和心肌保护作用,如果预先给予 β 受体阻滞剂可降低脓毒症大鼠的死亡率。

  β 受体阻滞剂可减慢心率、降低心肌耗氧、改善心肌供血。而快速心律失常作为脓毒症的临床特征,一直被认为是对心脏充盈不良、肾上腺素能神经刺激、发热现象的反映。心率也常作为预测感染性休克患者存活率的重要因素[5].本研究显示预先给予 β 受体阻滞剂卡维地洛可明显减慢大鼠在脓毒症时的心率,而对血压无明显不良影响。

  研究[6]显示,脓毒症时心肌受抑制情况常常存在,甚至进展到心功能不全。血清 CK 和 CK-MB 检测对心肌损伤的初步筛查具有一定的特异性。其中CK-MB 主要存在于心肌细胞,当心肌细胞受损时,CK-MB 从心肌细胞内释放,其升高程度与心肌损害程度呈正相关性。NT-proBNP 是由心室释放的心脑神经激素,可以更加敏感地反映心功能[7],本实验中大鼠在发生脓毒症 24 h 时 CK、CK-MB、NT-proB-NP 值均明显升高,这个结果与临床上观察到的心肌受损后 CK 及 CK-MB 在6 ~24 h 内急剧升高现象相符。卡维地洛对正常大鼠 CK、CK-MB、NT-proBNP并无影响,但预先给予卡维地洛干预可降低脓毒症大鼠 CK、CK-MB、NT-proBNP 值,不过这些心功能指标仍明显高于正常水平,说明卡维地洛对早期脓毒症大鼠心脏功能有一定的改善作用。

  氧化应激是导致衰老和疾病的一个重要因素。脓毒症时,由于氧化应激,自由基大量产生,抗氧化剂则相对减少或产生不足,细胞氧化损伤不可避免[8].SOD 是一种重要的抗氧化金属酶,其活性可反映机体氧化应激水平、防御自由基损伤、保护生物膜免受自由基攻击伤害的能力[9 -10].MDA 是脂质过氧化的重要指标,是具有损害作用的氧化应激产物。脓毒症大鼠心肌 SOD 含量明显下降,MDA 含量明显增加,提示脓毒症时,脂质过氧化反应增强,氧自由基生成大量增加,超过机体的清除能力,而卡维地洛能降低正常大鼠及脓毒症大鼠心肌 MDA 含量,升高 SOD 含量,说明卡维地洛可减弱心肌脂质过氧化,增强心肌抗氧化能力。

  机体各种生理活动最直接的供能物质-ATP 合成于细胞线粒体内膜,而线粒体是对各种损伤最为敏感的细胞器之一,脓毒症时,心肌线粒体合成的能量不能满足心脏需要,或线粒体受损后能量合成不足,则会出现心脏功能障碍,甚至衰竭[11]
.本研究证实在早期脓毒症心脏组织中的 ATP 含量就明显降低,卡维地洛并不影响正常心肌 ATP 含量,但预先给予卡维地洛可减轻脓毒症心肌 ATP 含量的下降。

  理论上心功能受损时心肌细胞形态也会有改变。脓毒症时心肌 ATP 降低也应与线粒体功能受损密不可分。但本实验结果显示: 脓毒症心肌在光镜下无明显变化,电镜下心肌线粒体虽有一定程度的肿胀、基质密度不均匀的降低,但变化并不显著,卡维地洛预先干预对早期脓毒症心肌形态的影响也不明显。可能观察的时机是脓毒症早期,心肌受损的程度还不至于引起心肌细胞形态结构明显改变。

  综上所述,脓毒症早期表现为心率增快、心功能受损、心肌氧化应激、线粒体合成 ATP 减少可能是SIMD 发生的一个病理生理机制; 卡维地洛可减慢正常大鼠心率,提高抗氧化应激能力,预先给予卡维地洛可减轻脓毒症时大鼠心肌 ATP 合成障碍,改善心功能,其机制可能与其抗氧化应激有关。但卡维地洛并不能完全纠正脓毒症时大鼠的心脏异常改变,由此推测除氧化应激外还有其它机制参与了 SIMD的发生。

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