藤茶止咳、化痰作用的动物实验研究

　　藤茶俗称端午茶、藤婆茶(又称山甜茶、龙须茶)。系葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W. T. wang) 的嫩茎叶。

　　野生藤茶广泛分布在我省梵净山地区，其味甘甜性凉，具有清热解毒、抗菌消炎、镇咳祛痰等功效，民间常用于感冒发热等疾病的防治。目前未见其有相关的止咳、化痰药理方面的研究报道。因此笔者对藤茶进行止咳、化痰作用的动物实验研究，为藤茶的综合利用提供科学依据。

　　1 材料
　　
　　1. 1 实验动物

　　昆明种小鼠，SPF 级，雌雄各半，选用体重 18 ～22 g 的健康动物，购自中山大学实验动物中心，合格证号:粤检证字 SCXK(粤)-2009-0070。

　　1. 2 样品来源与配制

　　1. 2. 1 藤茶不同方法提取物配制有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取 4 个成分组。每组均折合生药含量350 mg/ml，给药剂量相当于生药 3 500 mg/kg 体重。

　　1. 2. 2 藤茶水提成分不同剂量组配制藤茶水提成分高剂量组为直接给药，折合生药含量350 mg/ml，给药剂量相当于生药 3 500 mg/kg 体重;中剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按1∶2稀释后给药，折合生药含量117 mg/ml，给药剂量相当于生药1 167 mg / kg 体重;低剂量组为藤茶水提物加生理盐水，按 1 ∶ 8 稀 释，稀 释 后 给 药，折 合 生 药 含 量38. 9 mg / ml，给药剂量相当于生药 389 mg / kg 体重。

　　1. 2. 3 其它样品配制生理盐水(氯化钠注射液)，NaCl 含量 0. 9 %;美沙芬阳性对照，含量为 15 mg/片，取 2 片溶解于20 毫升生理盐水中，制成悬液，其浓度为 3 mg / ml，剂量为 30 mg/kg 体重;痰咳净阳性对照，剂量为200 mg / kg体重;阴性对照均采用蒸馏水。

　　2 方法

　　2. 1 浓氨水喷雾法研究止咳药效

　　取昆明种小鼠 120 只，随机分为 8 组，每组 15只。设阴性(蒸馏水)对照，阳性对照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分组、氯仿提取成分组、乙酸乙酯提取成分组，水提取成分组，其中水提取成分组细分为高、中、低 3 个剂量组。

　　实验前小鼠禁食不禁水 12 h，然后各组小鼠按0. 3 ml /20 g 体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后 1 h，小鼠接受喷雾，按一定时间喷入浓氨水气雾，结束，立即取出小鼠，观察有无咳嗽反应。观察 1 min 内咳嗽次数，若 1 min 内出现3 次以上典型咳嗽动作(腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴，有时可有咳声) 者，算作“有咳嗽”。否则算作“无咳嗽”。以停止接触氨水刺激后 1 min 内咳嗽次数大于或等于 3 次判为阳性，个别动物在实验中出现死亡或休克，判为咳嗽阳性。用序贯法(上下法)求出引起半数小鼠咳嗽的喷雾时间(EDT50)。计算 值，若  值大于 130 % ，说明有的止咳作用。若 值大于 150 %，说明有显着的止咳作用 (陈奇，2006;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。

　　EDT50= log－ 1c / n(式中 n 为动物数，c 为 rx 值的总和，r 为每剂量组的动物数，x 为剂量(即喷雾时间)的对数。) = 给药组的 EDT50/ 对照组的 EDT50× 100 %
　　
　　2. 2 对小鼠气管酚红排泌量的影响

　　标准酚红曲线的绘制:使用分析天平准确称取一定量的酚红，用 5 % 碳酸氢钠溶解，配成每 1 ml含 12. 5 μg，然后顺次进行倍比稀释成每毫升含酚红 6. 25 μg、3. 125 μg、1. 562 5 μg、0. 781 3 μg、0. 390 6 μg、0. 195 3 μg、0. 097 7 μg、0. 048 8 μg，用分光光度计测 OD 值。以酚红浓度为纵坐标，OD值为横坐标，根据酚红浓度和 OD 值计算出回归方程。根据回归方程计算出小鼠酚红的排泄量(陈奇，2006)。

　　取昆明种小鼠50 只，随机分为 5 组，每组 10 只。

　　设阴性(蒸馏水)对照组、阳性(痰咳净)对照药物组、藤茶水提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组。实验前小鼠禁食不禁水12 h，然后各组小鼠按0. 3 ml/20 g体重灌胃给药，其中阴性对照组给等体积蒸馏水。给药后 30 min，腹腔注射 5 % 酚红生理盐水溶液0. 2 ml /20 g，注射后30 min，脱颈椎处死小鼠，剪取气管，将各气管段放入预先盛有1. 5 ml 的5 % NaHCO3溶液试管中，后置于涡流混合器上震荡2 min，使气管段中的酚红完全释放，检测前试管中加入 1 molNaOH 溶液 0. 1 ml，离心(3 000 rpm，5 min)，后将试管中溶液于721 型分光光度计546 nm 处测OD 值，根据回归方程计算出酚红排泌量。

　　计算公式: y = 0. 119 x － 0. 005 9x 为 OD 值，y 为气管酚红排泌量(陈奇，2006;罗霄山等，2004;罗文敏等，2011)。

　　2. 3 统计学处理实验
　　
　　数 据 以“均 数 ± 标 准 差”表 示，采 用SPSS12. 0 统计软件进行统计学处理。

　　3 结果

　　3. 1 藤茶对浓氨水致咳小鼠的影响

　　藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃给药对刺激小鼠引起咳嗽的耐受时间与阴性对照组比较，均有显着延长，在统计学上有显着差异。其中藤茶水提取物的耐受时间最长，其 R 值达到 210. 38 %，阳性(美沙芬)对照组的  值为 225. 42 %，可见其疗效与阳性对照组相当，都达到显效水平。

　　鉴于藤茶水提取物止咳作用显着，又进一步研究藤茶水提物不同剂量组的止咳效果。结果可见，藤茶高、中剂量组  值分别达到210. 38 %和173. 78 %都达到显效水平，低剂量组  值为 137. 09 %达到有效水平。综上，可见藤茶具有良好的止咳作用。【表1】

　　
　　3. 2 藤茶对小鼠气管酚红排泌量的影响

　　由表 2 的实验结果可知，藤茶水提取物不同剂量灌胃给药对小鼠支气管分泌物量与阴性对照组比较，均有显着增加，在统计学上有显着差异。其中藤茶水提取物高、中剂量组气管酚红排泌量分别达到 4. 647 ±0. 903 μg/ml 和 5. 424 ±1. 465 μg/ml，均高于阳性 ( 痰咳净) 对照组的 3. 672 ± 0. 894μg/ml，说明藤茶水提物高、中剂量组化痰效果优于阳性药物痰咳净。综上所述，说明藤茶具有很好的化痰效果。【表2】

　　
　　4 结论

　　1) 藤茶不同方法提取物浓氨水致咳小鼠的实验，结果表明藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物均显示出一定的止咳作用，其中藤茶水提物的止咳效果最佳;2) 藤茶水提物不同剂量组进行浓氨水致咳小鼠的实验，结果表明藤茶水提物高、中剂量组显示出接近阳性(美沙芬)对照组的止咳效果;3) 藤茶水提物不同剂量组进行小鼠气管酚红排泌量实验，结果表明藤茶水提物高、中剂量组显示出高于阳性(痰咳净)对照组的化痰效果。

　　综上所述，藤茶具有显着止咳化痰的作用，这为藤茶的综合开发利用提供了科学依据。
　　
　　［参考文献］
　　
　　陈奇，2006. 中药药理研究方法学［M］. 北京:人民卫生出版社:625-626.
　　罗霄山，许家骝，张诚光，2004. 咳喘乐颗粒镇咳、祛痰、平喘作用的实验研究［J］. 中药材，27(7):520-523.
　　罗文敏，尹军强，郑先玉，2011. 桂龙咳喘宁片止咳化痰平喘药效学的研究［J］. 时针国医国药，22(10):2464-2465.