人参皂苷提取物对小鼠酒精性肝损伤的防治作用

　　人参为五加科植物人参 Panax ginseng C. A.Mey. 的干燥根，红参是人参经过高温炮制后得到的加工品。人参具有抗氧化、抗衰老、提高机体免疫力及护心保肝等药理作用。乙醇在体内主要经肝脏代谢，其代谢物乙醛及代谢过程中产生的活性氧会对肝脏造成损害，长期饮酒和过量饮酒，会造成乙醇在体内堆积，对肝脏造成不同程度的损伤，损伤程度从轻到重表现为脂肪肝、肝纤维、肝硬化[1],引起机体内天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）等生化指标水平增高。人参皂苷是红参的主要活性成分，《中国药典》和国家标准均以人参皂苷为红参的考核指标。近年来，有研究发现红参具有保肝功能[2-3],本文旨在研究人参皂苷提取物对小鼠酒精性肝损伤的防治作用，揭示作用机制，为红参的临床应用提供依据。

　　1 材料与与仪器

　　1.1 仪器

　　Infinite M200pro 酶标仪（瑞士帝肯）；Lecia-DM2500 微生物显微镜，德国 Lecia 公司。

　　1.2 药物与试剂

　　鲜人参，为 5 年生，产自吉林省抚松县，由长春中医药大学王淑敏教授鉴定为五加科人参属人参Panax ginseng C. A. Meyer 干燥根；联苯双酯滴丸（浙江万邦药业有限公司，批号 A02130407）；56°北京红星二锅头酒（北京红星二锅头酒厂，批号20140224）；ALT 试剂盒、AST 试剂盒、MDA 试剂盒、GSH 试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20150112）；TG 试剂盒（浙江东瓯生物工程有限公司，批号 2015040104）。

　　1.3 实验动物

　　清洁级 ICR 雄性小鼠，体质量 20~22 g,由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK-（吉）2014-005.

　　2 实验方法

　　2.1 红参炮制

　　称取鲜人参约 300 g,用纱布包好，放入蒸参箱，在 60 min 升温到 100 ℃后蒸制 6 h,蒸制完毕后置于 50 ℃烘干箱内烘干。将烘干后的红参研碎成粉，过 80 目筛。

　　2.2 人参皂苷提取物（Ginseng saponin extracts,GE）制备

　　称取红参粉末，加入 8 倍量 80%乙醇，超声提取（500 W,100 Hz）30 min,抽滤，滤渣加入 6倍量乙醇超声 30 min,滤过，合并滤液，40 ℃水浴蒸干，加入适量水溶解，即得人参皂苷提取物（人参总皂苷含量为 3.84%），4 ℃下保存待用。

　　2.3 动物分组

　　取清洁级 ICR 雄性小鼠 72 只，正常喂养 5 d后，将其按体重平均分为 6 组，分别为对照组、阳性组（联苯双酯）、模型组及 GE 高、中、低剂量组，每组 12 只。

　　2.4 动物造模及给药

　　给药剂量按照成人日均用药量与小鼠给药量进行剂量换算，除对照组每天 ig 等体积的蒸馏水外，其余各组 ig 给予 56°白酒，给药剂量为 0.2 mL/20g,1 次/d,造模 5 d.给药组给予 GE,低、中、高剂量组每日分别给予 0.38、0.75、1.13 g/kg 生药材浓度的 GE,阳性对照组给予联苯双酯 0.90 mg/kg,给药后 1 h 给予 56°白酒，1 次/d,连续 30 d.小鼠给药期间每周进行称质量并记录，并观察小鼠的毛色、饮食、行为及死亡情况。

　　2.5 样本采集

　　处理前禁食 12 h,给药及白酒 1 h 后，小鼠摘眼球取血，常温静置后待其凝固，3 000 r/min 离心15 min,取血清，？80 ℃保存待测。采血后，迅速剖取肝脏，用冷生理盐水洗净，滤纸吸湿后，称取肝脏湿重，计算肝脏系数（肝脏系数=肝质量/体质量）。取肝右叶做 HE 染色，肝左叶制备 10%肝匀浆，匀浆制备方法：用冷生理盐水冲洗肝脏至无血色，称质量，加入 9 倍量冷生理盐水机械匀浆，将匀浆液 2 500 r/min 离心 20 min,4 ℃，取上清。

　　2.6 生化指标检测

　　每组取同等样本量的小鼠血清及肝匀浆，严格按照试剂盒操作方法进行小鼠血清 ALT、AST、TG、肝匀浆 MDA、GSH 含量测定。

　　2.7 肝组织病理学检查

　　取小鼠肝脏右叶置于10%中性福尔马林中进行固定，经一定梯度浓度的乙醇脱水、石蜡包埋、切片进行 HE 染色，用显微镜观察肝组织病理变化。

　　2.8 数据处理

　　应用 SPSS 19.0 统计软件进行统计分析，采用单因素方差分析，组间比较采用最小显着差数法（LSD），数据均以 x ±s 表示。