高质量冰冻切片的制作体会

　　冰冻切片的种类有很多，随着科技的发展，许多方法已经被时代遗忘。如今，低温恒冷箱冰冻切片法被普遍采纳，服务于病理科的急诊工作。冰冻切片利用物理降温的原理，将新鲜的组织在低温恒冷切片机冷冻后变硬马上进行切片，适用于快速切片法。在对患者实施手术过程中，临床医师取出的病变组织需要病理医师快速诊断从而来确定病变性质，可为决定手术方案、范围及治疗方法提供指导。因此，只有高质量的冰冻切片，才能保证病理诊断的准确性，现将其制作体会介绍如下。

　　1 取材及包埋

　　手术中的新鲜组织应不加固定液，送到病理科后立即取材。所取的组织应有针对性，尽量保持组织的原有形态，避开坏死组织、脂肪、骨组织，并且缝线、钙化区要剔除。取材过程中组织不能接触水，当组织中含水量高时，用干纱布吸干后再进行冷冻，以防冰晶形成，取材厚度是 0.2 cm~0.3 cm,大小为1.0 cm~1.5 cm.将取好的组织块立即放在冷冻托上，加胶水覆盖组织块。当组织较小或较薄时，可先在冷冻托上做一小冻台，将组织放在冷冻托的中央位置，再加少量胶水于组织上，稍冻后用冷冻锤压平，再进行切片，这样方能切出完整的片子。

　　2 切片

　　我科用的是 LeicaCm1950 冰冻切片机，平常工作中，冰冻切片机长期处于待机备用状态，可将箱体温度、冻头温度设定为 -20℃左右。当然，不同的组织要求的温度也不同，要根据情况区别对待，随时调整。例如细胞多的组织及肿瘤，温度就要求是 -20℃；含脂肪较多的组织则要 -35℃冷冻，并且要冷冻 2min~3 min,直到看到包埋剂发白变硬后再进行切片（用羽毛牌 C-35一次性刀片，只用于冰冻切片机）。切片的准备工作应提前做好，可以节省时间。一切准备就绪，开始切片，首先进行组织的粗修，粗修的厚度是 45 μm~50 μm,粗修到暴露组织的最大平面。值得注意的是，修片时要观察重点病变的微小病灶，防止因为没有切到位而发生漏诊。粗修后要用毛笔清除机头标本托及切片机上的组织碎屑，防止交叉污染。然后再以转动大轮推进的方式进行切片，切片时用力要均匀，动作要轻柔，切成厚度是 4 μm~6μm,完整、平坦、无褶的薄片，直接附贴在干净的载玻片上。

　　3 固定、染色

　　切片完成后，要立即放在固定液中，不能等切片晾干后固定，否则易发生细胞退变，使细胞核着色不佳，染色质不清晰而影响诊断，我科使用的固定液是 95%酒精。固定 1 min 后进行染色，随后自来水清洗，再苏木素滴染加温（酒精灯加温），1%盐酸酒精分化，水洗后饱和碳酸锂返蓝，伊红染色 3 s~5 s,从低浓度到高浓度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。这样，一张高质量的冰冻切片就完成了。

　　冰冻切片的质量受多方面因素的影响，要求技术员具备高度的责任心和严谨的工作态度，严格按照规范操作并不断总结和改进，以提高切片质量，更好地为临床服务。