摘 要
亚东鲑（Salmo trutta）隶属于鲑形目（Salmoniformes）鲑科（Salmonidae）鲑亚科（Salmoninae），系与褐鳟（Salmo trutta）同物异名，国内仅在西藏亚东地区有分布。本研究分别从分子生物学和养殖生物学方面对褐鳟日本品系和亚东鲑 2个群体进行分析，为可持续地开展人工养殖以及物种种质资源的保护和遗传改良提供理论依据。
在分子水平上，应用 8 对微卫星引物对褐鳟日本品系和亚东鲑两个群体进行PCR 扩增，根据基因型利用生物软件对各种遗传参数分析，进而进行遗传多样性评价；同时利用线粒体 DNA 控制区 D-loop 序列分析起源。结果显示，褐鳟日本品系和亚东鲑均和欧洲的大西洋居群亲缘关系最近。微卫星结果表明，褐鳟日本品系和亚东鲑两个群体每个位点的等位基因数分别为 2~10 个和 4~9 个，平均有效等位基因数分别为 3.1304 和 3.8988;观测杂合度范围分别为 0.3404~0.7128 和0.1020~0.8776,期望杂合度分别为 0.4671~0.7794 和 0.5216~0.7932;褐鳟日本品系群体中多态信息含量（PIC）为 0.3680~0.7440,平均为 0.5964,而亚东鲑群体的 PIC 为 0.466~0.837,平均为 0.5926.褐鳟日本品系群体有 4 个位点偏离哈迪-温伯格平衡（P<0.05），亚东群体有 7 个偏离哈迪-温伯格平衡。2 个群体的遗传多样性均较高，且群体之间存在中度分化。
以褐鳟日本品系为研究对象，通过设置不同养殖密度梯度，对处于稚鱼期的日本品系褐鳟进行常规生长指标差异测定，综合分析养殖密度对其生长性能的影响。试验共设置 5 个养殖密度组，即每个试验槽分别放养 400、600、800、1 000、1 200 尾，每组三个重复。经过 49 d 的养殖试验，稚鱼体重从 0.14 g 长到 1 g,结果表明：不同养殖密度条件下日本品系褐鳟稚鱼的生长指标表现出明显的不同，其中最终体重、日增重、特定生长率及增重率均随着养殖密度的增大而呈现出明显的下降趋势，其中日增重由（0.018±0.001）g 下降为（0.013±0.001）g,降幅明显；净增重却随着养殖密度的增大而上升，且各养殖密度组之间差异性显着（P<0.05），这可能是由于高密度组种群个体基数较大。各密度组褐鳟日本品系稚鱼的生长表现为不等速性，但生长离散却没有加剧且在整个试验过程中养殖密度对褐鳟日本品系稚鱼的存活率无显着影响。
此外，测定了亚东鲑肌肉中常规成分、氨基酸含量及脂肪酸含量，评价了其营养价值。结果表明，亚东鲑肌肉中水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量分别为70.81%、22.63%、4.91%和 1.80%.除色氨酸水解外，亚东鲑肌肉中 17 种氨基酸的总量为 69.51%,其中必需氨基酸为 28.86%,占氨基酸总量的 41.52%,符合FAO/WHO 标准中必需氨基酸构成比例。4 种鲜味氨基酸总量为 26.09%,其中谷氨酸的含量最高，占鲜味氨基酸总量的 41.47%.亚东鲑肌肉的限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸和缬氨酸。必需氨基酸指数为 85.54.在亚东鲑肌肉中共检出 12 种脂肪酸，其中单不饱和脂肪酸含量为 38.32%,多不饱和脂肪酸含量为 38.98%,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸总量达到 12.31%.结果表明，亚东鲑肌肉氨基酸平衡性好，高度不饱和脂肪酸含量高。
关键词：亚东鲑；褐鳟日本品系；遗传结构；养殖密度；营养成分
ABSTRACT
Salmo trutta which belongs to Salmoniformes, Salmonidae, is only distributed inYadong River, Tibet, China. In this study, with Salmo trutta and Salmo trutta as objects,breeding biology and molecular biology were analyzed. It can provide the theory basisfor the sustainable artificial breeding and protection of germplasm resources species.
The genetic structure and diversity of Salmo trutta and Salmo trutta fario L. werestudied with 8 polymorphic microsatellite locis. Mitochondrial DNA D-Loop sequenceswere used to analysis the system evolution and genetic relationship in the study. Theresults showed that the number of alleles at each locus in two populations ranged fromtwo to ten and four to nine, respectively. The average number of effec-tive alleles was3.1304 and 3.8988. The observed heterozygosity varied from 0.3404 to 0.7128 and0.1020 to 0.8776, respectively. The expected heterozygosity was 0.4671~0.7794 and0.5216~0.7932.The polymorphic information content （PIC） of Salmo trutta rangedfrom 0.3680~0.7440, with an average of 0.5964. And the PIC of Salmo trutta farioL.varied from 0.466 to 0.837, with an average of 0.5926.The results indicated that twopopulations have rich polymorphism information content and large genetic diversity.
Salmo trutta and Salmo trutta fario L. have the closest relationshio with Atlanticphylogenetic lineages.
The objective of the study presented was to determine the effects of differentstocking density on the growth and survival of Salmo trutta fry at two months age.
Experimental fish were reared at five different stocking densities, 400, 600, 800, 1 000and 1 200 individuals per tank. Over the experimental period of 49 days, the weight ofSalmo trutta fry went up from 0.14g to 1g, the results showed that stocking density hadinsignificant effects on the survival rate and condition factor. The final body, dailyweight gain, specific growth rate and weight growth efficiency of fry were decreasedwith the increase of stocking densities, among those, daily weight gain decreasedsignificantly from（0.018±0.001）g to（0.013±0.001）g. The result showed that stockingdensity had negative effects on growth. However, net yield was increased with theincrease of stocking densities, and there were significant differences between the lowand high densities groups（P<0.05）。 The fry of Salmo trutta reared in different densitiesgrew in allometry, but the stocking density had insignificant effect on the variation ingrowth.
Nutritional compositions in muscle of brown trout Salmo trutta fario were analyzedby routine methods and evaluated by amino acids score （AAS） and chemical score （CS）。
The results showed that the fresh muscle contained moisture of 70.81%, crudeprotein22.63%, crude fat 4.91% and crude ash 1.80%. There were total amino acid（TAA） of 69.51%, total essential amino acid （EAA） 28.86% and total delicious aminoacid （DAA） 26.09% in dry muscle with EAA/TAA of 41.52%and EAA/NEAA of84.11%. It was clear that the two ratios in the muscle were in accord with the standardof FAO/WHO （40%, and 60%）。 The AAS and CS revealed thatmethionine+cystineandthe and valine were the limited amino acids, with essentialamino acids index （EAAI） of 85.54. A total of 12 kinds of fatty acids were detected inthe muscle of the brown trout, including 19.76% of saturated fatty acid （SFA）， 38.32%of monounsaturated fatty acid （MUFA）， 38.98% of polyunsaturzted fatty acid （PUFA），and up to 12.31% of total content of EPA and DHA. In conclusion, brown trout is oneof the fish with good nutritive value and culture values.
KEY WORDS: Salmo trutta;Salmo trutta fario; genetic structure;stocking density ;nutritional components
目录
摘 要
ABSTRACT
第一章 引 言
1.1 褐鳟简介及其研究概况
1.1.1 生物学特性
1.1.1.1 形态特征
1.1.1.2 生活习性
1.1.1.3 繁殖力
1.1.2 地理分布
1.1.3 国际养殖状况及国内研究现状
1.1.4 褐鳟遗传育种研究
1.2 线粒体 DNA 测序分析和微卫星分子标记技术
1.2.1 线粒体 DNA 测序分析
1.2.2 微卫星分子标记
1.2.2.1 微卫星分子标记的定义及特点
1.2.2.2 微卫星分子标记在鱼类研究中的应用
1.3 养殖密度对鱼类的影响
1.3.1 养殖密度对鱼类的影响机制
1.3.2 养殖密度对鱼类生长的影响
1.3.3 养殖密度对鱼类营养的影响
1.3.4 养殖密度对鱼类免疫功能的影响
1.4 肌肉营养品质
1.4.1 氨基酸的分类
1.4.2 蛋白质营养
1.4.3 脂肪酸的分类
1.4.4 脂肪酸的功能
1.5 本研究目的和意义
第二章 褐鳟日本品系和亚东鲑遗传多样性分析及起源探讨
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 基因组 DNA 提取和检测
2.1.2.1 DNA 的提取
2.1.2.2 DNA 的检测
2.1.3 D-loop 基因片段扩增及测序
2.1.4 微卫星基因分型
2.1.4.1 引物来源和 PCR 扩增
2.1.4.2 电泳分离及染色
2.1.5 数据分析处理
2.1.5.1 日本品系褐鳟和亚东鲑 mtDNA D-loop 分析
2.1.5.2 日本品系褐鳟和亚东鲑微卫星分析
2.2 结果与分析
2.2.1 线粒体 D-loop 基因扩增结果
2.2.2 线粒体 D-loop 基因测序结果
2.2.3 基于 D-loop 基因序列构建的分子系统树
2.2.4 微卫星 PCR 扩增结果与等位基因
2.2.5 种群的遗传多样性
2.2.6 种群间的亲缘关系
2.3 讨论
2.3.1 线粒体 D-loop 序列分析
2.3.2 日本品系褐鳟和亚东群体的种群遗传多样性
2.3.3 Hardy-Weinberg 平衡的偏离
2.3.4 亲缘关系分析
2.4 结论
第三章 不同养殖密度对日本品系褐鳟稚鱼生长性能的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.1.3 数据统计与计算
3.2 结果与分析
3.2.1 养殖密度对日本品系褐鳟稚鱼存活率的影响
3.2.2 养殖密度对日本品系褐鳟稚鱼生长的影响
3.2.3 不同养殖密度下日本品系褐鳟稚鱼的生长式型
3.3 讨论
3.3.1 不同养殖密度对日本品系褐鳟稚鱼存活率的影响
3.3.2 不同养殖密度对日本品系褐鳟稚鱼生长的影响
3.3.3 不同养殖密度对日本品系褐鳟个体生长离散的影响
3.4 结论
第四章 亚东鲑肌肉营养成分分析和品质评价
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 营养成分的测定
4.1.2.1 常规营养成分的测定
4.1.2.2 氨基酸含量的测定
4.1.2.3 脂肪酸含量的测定
4.1.3 肌肉蛋白质品质评价方法
4.2 结果
4.2.1 亚东鲑肌肉的常规营养成分
4.2.2 亚东鲑肌肉的氨基酸含量
4.2.3 亚东鲑肌肉氨基酸评分
4.2.4 亚东鲑肌肉的脂肪酸含量
4.3 讨论
4.3.1 亚东鲑肌肉的品质
4.3.2 氨基酸组成分析
4.3.3 亚东鲑营养品质评价
4.3.4 脂肪酸组成分析
4.4 结论
参考文献
致 谢
