从抗氧化的角度探讨牛磺酸与L-肉碱对鱼类生长的影响

    鱼类具有由抗氧化酶 （例如超氧化物歧化酶等）和非酶物质 （如谷胱甘肽等）组成的抗氧化系统[1],而营养条件的改变会引起该系统中酶类活性和非酶类物质含量的改变[2],这种改变会对鱼类生长产生影响，例如营养胁迫时鱼类产生的抗氧化应激会导致其饵料系数升高，生长速度降低[3].牛磺酸和L-肉碱均为营养性添加剂，牛磺酸作为一种小分子的含硫氨基酸，L-肉碱作为一种由赖氨酸衍生而成的兼性化合物，对鱼类的生长具均有促进作用[4~7],但二者对鱼类抗氧化能力影响的研究非常缺乏。因此，有必要从抗氧化的角度来探讨鱼类的快速生长的机制。本研究以我国的大宗养殖鱼类异育银鲫（Carassais auratus gibebio）为材料鱼对此进行了探讨。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　循环水养鱼系统包括28个单个体积为60cm×60cm×65cm的塑料水族箱 （有效水体180L）。水源为曝气自来水，使用沸石、活性炭净化水体，真空泵提水。单只箱体循环水量为2.5L/min,箱内放置散气石，以通风管连接罗茨鼓风机间断性充氧。自然水温，变化范围25.5~27.8℃，节能日光灯提供照明，光照时间8:30~20:00,瞬时开断。

　　试验鱼为鲫鱼，取自安徽合肥市的巢湖三珍养殖场，运回后2%食盐水消毒，实验室循环水水族箱内暂养2周，暂养期间投喂基础饲料，在基础饲料中分别添加牛磺酸0、1000、2000、3000mg/kg,L-肉碱0、100、200、300mg/kg,包括基础饲料，共配制7种试验饲料；饲料通过颗粒机制成直径2mm颗粒，60℃烘干，过筛，塑料袋密封4℃保存使用。基础饲料配方及化学组成见表1.

　　1.2方法

　　试验开始前，将鱼饥饿24h,然后随机取样称重，每箱放入同种鱼30尾，每种饲料4个重复，共28个水族箱。

　　试验持续56d,每天9:00和15:00各投过量饲料1次，1.5h后回收残饵，70℃烘干。残饵量用饲料溶失率校正，测定溶失率时随机在4个无鱼的箱中各放入1份已称重的饲料，1.5h后回收，70℃烘干至恒重并称重。

　　试验结束时，将鱼饥饿24h,称量每箱鱼的总重，再从每箱中随机取样8尾，每条鱼的肝脏各取少量，等量混合；-70℃保存，用于测定抗氧化指标。

　　生化分析：测定饵料的干物质、粗蛋白、脂肪、灰 分 和 能 量 含 量。测 定 干 物 质 时 在105℃下干燥样品至恒重；测定蛋白质时用凯氏定氮法测定含氮量，再乘以6.25;脂肪采用索 氏 乙 醚 抽 提 法 测 定，灰 分 采 用 马 弗 炉550℃灼烧样品测定；能值采用Phillipson能量计测定。

　　抗氧化指标测定：测定肝脏超氧化物歧化酶 （SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶 （GSH-PX）以及过氧化氢酶 （CAT）活性，测定肝脏维生素E（VE）含量以及氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽含量共6个指标。采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定，方法参见试剂盒。

　　1.3指标计算及数据分析

　　式中，Wt为鱼体终末湿重，kg;W0为初始湿重，kg;t为试验周期，d;ITd为试验期间的总饲料消耗（干重），kg.试验结果以平均值±标准差表示。采用单因素方差分析 （ANOVA）后进行组间差异的多重比较（Duncan's procedure）。显着性水平设置为α=0.05.统计软件均为SPSS 16.0.

　　2结果与分析

　　由表2可知，牛磺酸1000mg/kg组和L-肉碱300mg/kg组的生长率及终末重量显着高于对照组，由于各组的摄食率均无显着差异，因此生长的差异主要是由于这2组的饲料系数显着降低导致。

　　由表3可知，除超氧化 物 歧化酶外，其余 各 指标均受到添加剂 量的显着影响。牛磺酸组中，1000mg/kg添加量的维生素E和过氧化氢酶获得显着提高，其余2组这2项指标与对照组均无显着差异。

　　L-肉碱组在100、200mg/kg添加组谷胱甘肽，过氧化物酶均显着低于对照组，氧化型谷胱甘肽均显着高于对照组，还原型显着低于对照组。

　　3讨论

　　本研究显示，牛磺酸和L-肉碱均能显着降低异育银鲫的饲料系数，从而提高特定生长率，罗莉等[8]添加牛磺酸饲养草鱼、王立新等[6]和田娟等[5]添加L-肉碱分别饲养鲫鱼与草鱼都得出相似的结果，但这2种添加剂的使用必须掌握适当的剂量。例如，就牛磺酸而言，罗莉等[8]的试验表明添加量为0.6%~1.0%时草鱼生长效果最好，本研究在1000mg/kg组生长率最高，饵料系数最低，与上述结果基本一致。

　　本研究中，除超氧化物歧化酶外，其余各项抗氧化指标均受到添加剂的显着影响，这种影响与添加的剂量显着相关，大多在牛磺酸1000mg/kg组以及L-肉碱200mg/kg组变化最为显着，而这2组也是生长率最高的试验组，因此，这些指标的变化趋势与生长趋势密切相关。例如，维生素E（VE）作为动物体内的重要的抗氧化物质，一般充当生物膜表面的脂质过氧化的阻断剂[9,10],在上述2组中的含量均显着最高。但2种添加剂对抗氧化系统的影响又有明显不同的特点。例如，过氧化氢酶作为一种过氧化物酶体的标志酶，能催化过氧化氢分解成氧和水的酶，在牛磺酸1000mg/kg组显着高于对照组，而在L-肉碱200mg/kg组则与对照组无显着差异；还原型谷胱甘肽在牛磺酸1000mg/kg组显着最高，在L-肉碱200mg/kg组则显着最低 （在其各自的组别中），其变化趋势相反，对此还有待进一步的研究。

　　[参考文献]

　　[1]Rudneva I I.Blood antioxidant system of Black Sea elasmobranch and teleost[J].Comp Biochem Physiol,1997,118c:255~260.

　　[2]刘松岩。环境胁迫对中华鲟体内自由基水平和抗氧化酶活力的影响 [D].武汉：华中农业大学，2006.

　　[3]Xu W J,Pan L Q.Evaluation of dietary protein level on selected parameters of immune and antioxidant systems,and growth perform-ance of juvenile Litopenaeus vannamei reared in zero-water exchange biofloc-based culture tanks[J].Aquaculture,2014,20:181~188.

　　[4]Martinez J B,Chatzifotis S,Divanach P.Effect of dietary taurine supplementation on growth performance and feed selection of seabass Dicentrarchus labraxfry fed with demand-feeders[J].Fisheries Science,2004,70:74~81.

　　[5]田娟，冷向军，李小勤，等。肉碱对草鱼生长性能、体成分和脂肪代谢酶活性的影响 [J].水产学报，2009,33（2）：295~302.

　　[6]王立新，周继术，杨元昊，等。L-肉碱对鲫鱼生长和代谢的影响 [J].西北农林科技大学学报 （自然科学版），2004,32（10）：63~65.

　　[7]王和伟，叶继丹，陈建春。牛磺酸在鱼类营养中的作用及其在鱼类饲料中的应用 [J].动物营养学报，201,25（7）：1418~1428.

　　[8]罗莉，文华，王琳，等。牛磺酸对草鱼生长、品质、消化酶和代谢酶活性的影响 [J].动物营养学报，2006,18（3）：166~171.

　　[9]郑景洲，许友卿，丁兆坤。维生素E的功能、吸收与代谢 （1）[J].生物学通报，2005,40（11）：1~2.

　　[10]Traber M G,Atkinson J.Vitamin E,antioxidant and nothing more[J].Free Radical Biology and Medicine,2007,43:4~15.