雌激素替代治疗对小鼠胰岛素敏感性的作用

　　2008 年世界卫生组织调查报告，全世界已有超过5 亿肥胖人群，且肥胖的增长速度显着增加。肥胖易引起代谢紊乱，是 2 型糖尿病、冠心病、癌症等多种疾病的独立危险因素[1].与男性相比，绝经前女性代谢紊乱发生较少[2-4],但绝经后肥胖、2 型糖尿病、冠心病等代谢疾病发生率显着升高[5].研究显示，雌激素替代治疗可以明显改善绝经后女性胰岛素敏感性，降低 2 型糖尿病发生率[6-8].然而，雌激素的保护作用是通过减轻体重、从而改善代谢状态，还是雌激素的直接保护效应，仍有待进一步阐明。本研究观察了雌激素替代治疗对小鼠胰岛素敏感性的影响及其机制。

　　材料和方法

　　实验动物及分组 6 周龄 C57BL/6J 雌性小鼠36 只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，清洁级标准饲养，采用随机数字表法随机分为正常饮食组（ NOR） 、正常饮食去卵巢组 （ NOR + OVX） 、正常饮食去卵巢雌激素替代组 （ NOR + OVX + E2） 、高脂饮食组 （ HF） 、高脂饮食去卵巢组 （ HF + OVX） 和高脂饮食去卵巢雌激素替代组 （ HF + OVX + E2） 6 组，每组 6 只。

　　动物模型建立 随机选取 24 只 6 周龄小鼠腹腔注射 1%戊巴比妥钠麻醉 （ 40 ~ 85 mg/kg 体重） ,行双侧卵巢切除术，另12 只小鼠麻醉后行假手术。卵巢切除术后5 d 起行阴道脱落细胞涂片，连续5 d 均未出现角化细胞为手术成功。之后将卵巢切除小鼠随机分为两组，一组给予高脂饮食 （ 45% 脂肪） ,另一组仍为正常饮食； 假手术小鼠分为两组，分别给予高脂饮食和正常饮食。喂养20 周后，从卵巢切除小鼠中随机选取 6 只高脂饮食小鼠和 6 只正常饮食小鼠，给予苯甲酸雌二醇 （ 天津金耀氨基酸有限公司） 替代治疗（ 5 μg/d,皮下注射） 20 d,其余小鼠给予等剂量橄榄油。每 3 d 监测并记录 1 次体重。

　　口服葡萄糖耐量试验 小鼠禁食 4 h 后，给予0. 4 g / ml葡萄糖溶液 （ 0. 05 ml /10 g） 灌胃，尾静脉取血 10 μl,时间依次为服糖前，糖负荷后 30、60、120 min,葡萄糖氧化酶法检测血糖值，计算血糖曲线下面积。

　　高胰岛素正常葡萄糖钳夹试验 1% 戊巴比妥钠麻醉 （ 40 ~ 85 mg/kg 体重） ,行右侧颈静脉插管，一次性注入 50U/ml 肝素钠溶液 0. 05 ml,使全身肝素化抗凝； 将小鼠固定于恒温平板上，稳定 20 min; 人正规胰岛素以 2 μl/min 速度持续输注，使内源性胰岛素分泌受到抑制； 每 5 ~ 10 min 尾静脉取血，快速测血糖，根据血糖值调节葡萄糖输注率，以保持小鼠血糖稳定在 （ 5. 5 ± 0. 5） mmol/L.当钳夹进入稳定状态，取钳夹后 80 min 葡萄糖输注率的均值。小鼠在钳夹结束后断头处死，留取腹腔内脏脂肪，称重。

　　瘦素、脂联素、抵抗素测定 取小鼠血清，采用酶联免疫吸附法试剂盒 （ ELISA,R&D,美国） ,按照试剂盒说明书操作步骤分别检测血清瘦素、脂联素、抵抗素。

　　统计学处理 采用 SPSS 17. 0 统计软件，符合正态分布的计量资料以均数 ± 标准误表示，各组数据比较前先进行正态分布检验和方差齐性检验，符合正态分布和方差齐性时，多组比较采用单因素方差分析，并进行两两比较； 不满足时采用非参数检验； P <0. 05 为差异有统计学意义。