联合检测甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白诊断肝细胞癌

　　肝细胞癌( HCC) 是临床常见的恶性肿瘤之一，其发病早期十分隐匿，恶性程度高，进展快且预后差，早期诊断对其治疗和预后判断有重要意义。来源于肝细胞癌( HCC) 的 AFP和来源于慢性肝炎和肝硬化的 AFP 与凝集素 LCA 的亲和力不同［1］。依据这种亲和力的差别，AFP 分为三类，AFP-L1，AFP-L2 和 AFP-L3。AFP-L1 是慢性肝炎和肝硬化患者血清中AFP 的主要组成部分，AFP-L2 来自于孕妇，AFP-L3 来源于肝癌细胞，与 LCA 结合力高，在肝癌的早期，尤其是肿瘤组织有足够的肝动脉供给时，能合成分泌 AFP-L3。AFP-L3 是 HCC患者血清中最主要的 AFP 异质体，联合检测甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白对肝细胞癌( HCC) ，慢性肝炎和肝硬化的患者鉴别诊断非常重要。我们收集了 108 例患者资料并进行分析，现报告如下。

　　1 资料与方法

　　1． 1 资料 来源于 2011 年 5 月 － 2012 年 12 月在金坛市人民医院就诊的肝细胞癌( HCC) 患者 30 例，男 77 例，女 31 例，年龄 27 ～82 岁。均经组织病理学或影像学证实; 慢性肝病患者 78 例，诊断标准符合 2000 年中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准。

　　1． 2 方法 血清 AFP-L3 分离检测采用亲和微量离心纯化柱法，该微量离心纯化柱内装偶联了小扁豆凝集素 LCA 的琼脂糖，可以特异结合 AFP-L3，经过离心洗脱获得 AFP-L3，试剂由北京热景生物技术有限公司提供，以美国食品药品管理局批准的 AFP-L3%≥10%为诊断 HCC 的临界值标准; 获得的 AFP－ L3，AFP 采用微粒子化学发光免疫法，仪器采用贝克曼公司的 dxi800 全自动微粒子化学发光免疫分析仪，使用海尔施公司提供的同型配套试剂盒，试剂均在有效期内使用，AFP 正常值设定为 0 ～10 ng/ml，检测时插入定值质控，具体操作步骤严格按照说明书进行，确保检验结果的准确性。108 例患者均于晨起空腹静脉采血 5 ml，无溶血，脂血，新鲜分离血清，首先采用亲和微量离心纯化柱法获取 AFP-L3，然后采用贝克曼公司的 dxi800 全自动微粒子化学发光免疫分析仪检测 AFP-L3 和血清中的 AFP。换算出 AFP-L3% 。

　　1． 3 统计学方法 应用 SPSS13． 0 软件进行统计分析，不同组间比较采用 χ2检验，以 P ＜0． 05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　当检测结果显示获取 AFP-L3 含量≥1 ng/ml 时，按照北京热景生物技术有限公司提供的试剂说明书中的公式换算出AFP-L3 的比率。当检测结果显示标本中 AFP-L3 含量≤1 ng /ml 时，无需计算 AFP-L3 的比率，即为阴性结果。当检测结果显示 AFP-L3 含量≥400 ng/ml 时，即待测标本中甲胎蛋白异质体的含量≥1 000 ng/ml，可判定阳性结果≥10%。

　　30 例 HCC 患者中 AFP 的水平波动在 8． 8 ～ 1524． 1 ng / ml之间，其中 AFP-L3%的阳性率为 80%，而在 78 例慢性肝病患者中 AFP 的水平波动在 3． 2 ～580． 1 ng/ml 之间，AFP-L3% 的阳性率为 14． 1%。【1】

　　
　　3 讨论

　　随着人们对肿瘤发病机制研究的深入，新的标志物不断被发现，FDA 于 2005 年批准检测甲胎蛋白异质体( AFP-L3)应用于肝癌诊断，并把甲胎蛋白异质体( AFP-L3) 占总甲胎蛋白( AFP) 比率≥10%，作为诊断肝细胞癌的阳性界定值。

　　随着国内微量离心柱法检测 AFP-L3% 的建立，血清中总AFP 和 AFP-L3% 可以提供不同的关于肝癌的信息。总 AFP升高可能提示肝癌患者肝脏有大的瘤块存在。AFP-L3%可以预测肝癌细胞的恶性程度。AFP-L3% 为低值时不能否定HCC 的存在，因为约有 15% ～ 30% 的 AFP 阳性 HCC 的 AFP-L3% ＜ 10%。

　　目前原发性肝癌诊断的血清标志物仍首推 AFP，然而约有 35% ～40%原发性肝癌患者血清 AFP 呈低浓度升高，且小肝癌通常 AFP 较低，甚至正常。因此 AFP 持续低浓度阳性对早期肝癌患者的及时诊断尤为重要，低浓度持续阳性患者需经过动态观察 AFP 的变化，但这种长期随访的方法往往延误诊断的时机而造成失去及时治疗的良机，因此有些学者认为传统 AFP 诊断标准对 HCC 诊断价值不大，本文应用亲和微量离心纯化柱法检测30 例原发性肝癌，78 例慢性肝病的血清中 AFP 和 AFP-L3% 结果，HCC 组 AFP-L3% 的阳性率较慢性肝病组差异有非常显着性( P ﹤ 0． 01) ，尤其是在 AFP 浓度较低时 HCC 组 AFP-L3% 的阳性率明显高于慢性肝病组，而在AFP 高浓度时 HCC 组的 AFP-L3% 阳性率也明显高于慢性肝病组，说明 AFP-L3%对 HCC 有更高的敏感性． 从表 3 可以看出，单独分析 AFP 对 HCC 的准确度是 73． 82%，单独分析AFP-L3% 对 HCC 的准确度是 85． 64% ，而同时联合 AFP 和AFP-L3% 检测对 HCC 的准确度是 93． 16% ，可见联合 AFP 和AFP-L3% ，对 HCC 的诊断更有意义。AFP 异质体的检测有助于良恶性肝病的鉴别诊断，这也与本实验的结果相符合，在本实验 HCC 组的高浓度组和低浓度组 AFP-L3% 的阳性率分别为 83．3%与 75%，差异无显着统计学意义，但是 HCC 的低浓度组与病毒性肝炎的低浓度组 AFP-L3% 阳性检出率分别为75%与12． 1%，这两者之间差异有显着性。因此对 AFP-L3% 的检测，特别是对于 AFP 低浓度阳性的病例显得尤其重要，AFP-L3%有助于预警早期肝癌发生，因为 AFP-L3% 只由肝癌细胞分泌产生，在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位病变时，相比较影像学技术，AFP-L3%可以提前检测出。如果患者血清中 AFP-L3% 占 AFP 比例超过 10%，提示肝癌的发生率大于 95%。

　　有研究发现，AFP-L3% 与 HCC 的恶性程度，分化和复发高度相关，提示 AFP-L3% 可用来预测远处转移和预后监测。小肝癌中 AFP-L3%的升高提示癌细胞是低分化，多发的。AFP-L3% 高的患者肿瘤倍增时间短。用 AFP-L3 占总AFP 比例来检测 HCC 不依赖 AFP 总量的增多。AFP-L3% 持续升高的患者其肝癌多灶性复发或门静脉瘤栓发生率明显高于 AFP-L3%正常的患者，治疗后 AFP-L3%正常的患者存活率明显高于 AFP-L3%升高的患者。

　　综上分析，联合 AFP-L3% 和 AFP 值对肝癌的早期诊断，鉴别诊断，疗效评估和预后监测等方面有着极其重要的临床价值，能大大提高肝癌的检出率和准确度，为临床提供最佳的治疗时机。

　　【 参 考 文 献 】

　　［1］ 张柏和，吴孟超，张晓华，等． AFP 异质体肽链和寡糖成分差异与肝癌诊断的关系［J］． 第二军医大学学报，1991，12( 4) : 341-345．
　　［2］ Hu KQ，Kyulo NL，Lim N，et al ． Clinical significance of elevatedalpha-fetoprotein( AFP) in patients with chronic hepatitis C，butnot hepa-tocellular carcinoma［J］． Am J Gastroenterol，2004，99( 5) : 860-865．
　　［3］ 常彬霞，辛邵杰． 甲胎蛋白及其临床应用研究进展［J］． 世界华人消化杂志，2010，18( 6) : 576-580．
　　［4］ Fujiyama S，Tamaka M，Maeda S，et al． Tumor markers in early diag-nosis follow-up and management of patients with hepatocellular car-cinoma［J］． Oncology，2002，62( Suppl1) : 57-63．
　　［5］ 王爱华，王华梁，方 芳，等． AFP 和 AFP 异质体对 405 例原发性肝癌的诊断价值探讨［J］． 上海医学检验杂志，2002，17( 2) :87-89．
　　［6］ 朱丽影，崔志强，张瑞云． 甲胎蛋白异质体 AFP-L3 测定的临床意义［J］． 铁道医学，1999，27( 2) : 77-79．