江西地区汉族人群四个基因座的遗传多态性调研

　　短串联重复序列(STR)又称为微卫星 DNA,也就是包括 2~6 个碱基重复单位的 DNA 区域，它是一类具有长度多态性的 DNA 序列，存在于人类基因组 DNA 中，多态性片段长度一般在 100~300bp。

　　自 STR 分型技术在法医学应用以来， 已逐渐成为法医 DNA 检测的主要手段。 国内外许多 DNA 实验室致力于 DNA 检测基因座的群体遗传学研究，以其对人类遗传关系与某些疾病的相关性进行评价。 D18S51 位于 18 号染色体长臂的简单四核苷酸重复，重复核心是 AGAA;D12S391 位于 12 号染色体，重复核心是 AGAT;D19S433 位于 19 号染色体， 重复核心是 AAGG;D21S11 位于 21 号染色体长臂的复杂四核苷酸重复， 重复核心是 TCTA 和TCTG。我们使用复合扩增技术对江西地区汉族人群四个基因座的遗传多态性进行了调查研究，为法医学个体识别和亲权鉴定提供了遗传学数据。

　　1 材料与方法

　　1.1 样本
　　
　　江西汉族无关个体血样均来自于本实验室收集标本，标本为 1mlACD 抗凝全血，在-20℃保 存 10 年 。 其 中 D18S51、D12S391、D19S433、D21S11 血样标本分别为 475 例 、572 例 、565 例 、570 例。

　　1.2 试剂
　　
　　样本 DNA 提取采用 TBG 公司提供的抽提试剂，按 Sinofiler(美国 ABI 公司)试剂盒说明书进行复合扩增。

　　1.3 扩增
　　
　　操作按说明书进行 ， 总反应体系为10μl，内含 PCR Reaction Mix4.2μl，Primer2.2μl，PEGold Taq(5U/μl) 0.2μl，水 2.4μl，DNA1μl。 扩增条件为 95℃11min，94℃1min，59℃1min，72℃1min，28个循环，60℃60min，最后取 1μl 反应产物与 11.2μl甲酰胺(含 LIZ-500 内标)混合，扩增产物用 PoP4胶在 AB3130(美国 ABI 公司)遗传分析仪上进行毛细管全自动电泳，Data Collection 软件收集数据，用GeneMapper ID v3.2 分析软件进行等位基因分析。

　　1.4 统计分析
　　
　　使用直接计数法计算出四个基因座的等位基因频率，采用 χ2检验，判断基因座分布是否符合 Hardy-Weinberg 平衡。 并按文献方法计算各座位期望杂合度、个人识别能力、多态性信息含量及非父排除率。 遗传参数具体计算方法为：【1-2】


　　
　　2 结果

　　2.1 江西地区汉族人群无关个体四个 STR 基因座的等位基因频率分布及遗传学参数见表 1、表 2。【表1-2】

 

　　2.2 与重庆地区、巴星坤哈萨克族基因分布比较如表 3。【表3】

　　
　　3 讨论

　　江西地区四个 STR 基因座的基因型分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡， 其中 D18S51 基因座共检出 24 个等位基因，83 种基因型；D12S391 共检出 15 个等位基因，62 种基因型；D19S433 基因座共检出 16 个等位基因，53 种基因型；D21S11 共检出 14 个等位基因，55 种基因型。 1996 年，Gill 等提出，DP≥0.9、H≥0.7、PIC≥0.7 的 STR 位点均属高鉴别力位点，按此标准，我们调查研究的四个基因座均为高杂合度、高个体识别能力、高信息含量、高多态性，具有很高的法医学应用价值，所得数据可以用于相关群体的个体识别和亲权鉴定以及遗传学分析。

　　江西地区 D12S391 与重庆地区比较， 位点18.3 有显著性差异， 与巴星坤哈萨克族比较有 3个位点(18.3、20、21)有显著性差异。 这说明在计算亲权鉴定的 PI 值时，要使用各个地区的基因频率。

　　本次研究是对江西地区汉族人群 6 个 STR 遗传多态性的研究 的进一步深入，重点在其它 STR 基因座遗传学调查，新增了 4 个基因座，而且在检测方法上不同， 这四个基因座均为高鉴别能力的基因座，且属高度多态性遗传标记。