不同叶龄的卡特兰叶片提取DNA的效果对比

　　第四章 不同叶龄的卡特兰叶片提取效果的比较

　　4.1 试验材料与方法

　　4.1.1 试验材料

　　漂亮女孩‘考娃’叶片生长缓慢，每个假鳞茎仅生长一片叶子，这些叶子年龄不同，外表差异明显。本试验中将生长时间在三个月以内的叶子定义为嫩叶，3 个月到 1 年的称为中叶，一年以上的称为老叶。现在选取卡特兰嫩叶，中叶，老叶各 3 个样作为试验材料。

　　从图片中可以看出卡特兰嫩叶，老叶和中叶的形态差异较大，嫩叶颜色呈鲜绿色，叶片有光泽，发亮。中叶叶片较厚，厚度约为嫩叶 2 倍，颜色呈浓绿色。老叶片最薄，叶片有褶皱，且从图 4-1b 中发现切口处有明显纤维，纤维含量较高（见图 4-1）。

　　4.1.2 试验方法

　　用第三章得到的优化方法进行 DNA 的提取试验。

　　4.2 实验结果和分析

　　图 4-2 中 Z 表示中叶，T 表示嫩叶，L 表示老叶。从图 4-2a 发现，嫩叶和中叶提取的 DNA 在加入无水乙醇沉淀后出现明显的絮状沉淀，老叶提取的 DNA 出现明显的带有黄色的非絮状沉淀沉在管底。在冰箱中放置 40min 以上，用 70%乙醇清洗，发现老叶片提取的 DNA 虽然黄色变浅，但是相比中叶和嫩叶仍旧有黄色（见图 4-2）。

　　图 4-3 为卡特兰不同年龄叶片提取出的 DNA 电泳结果，M 为 Marker DL2000，Z1,Z2,Z3 号为中叶 DNA 结果，T1,T2,T3 泳道为嫩叶 DNA 电泳结果，L1,L2,L3 泳道为老叶电泳结果。从电泳图可以看出，三个年龄段的叶片均提取出了 DNA（见图 4-3）。对比紫外吸收值，发现三种叶片提取 DNA 质量从高到低依次为嫩叶、中叶、老叶。其中嫩叶DNA 的 OD260/OD230 均大于 2.0，表明杂质去除干净，老叶的 OD260/OD230 最高为 1.25，说明含有较多杂质。不同年龄段叶片提取 DNA 含量差异显着，嫩叶 DNA 含量平均值为376.7±28.20ng/?l，中叶提取的 DNA 含量平均值为 277.2±25.46ng/?l，老叶 DNA 含量平均值为 132.7±9.44ng/?l（见表 4-1）。DNA 的含量由高到低依次为嫩叶，中叶，老叶。

　　所以从提取 DNA 的质量和提取量考虑，适合取材的叶片依次为嫩叶，中叶，老叶。

　　由于老叶含杂质较多，不容易去除，不适合提取 DNA。

　　4.3 小结

　　同一方法，取材不同，试验结果差异很大，老叶由于生长时期较长，新陈代谢产生了较多的次生物质如酚类物质，蛋白类物质，多糖等，严重影响了 DNA 的提取。而且老叶的叶片中含有较多的纤维使得研磨难度增大，研磨时间较长。对比实验结果发现中叶和嫩叶提取 DNA 在质量和含量上都要优于老叶，而嫩叶提取 DNA 含量最高，所以认为嫩叶是 DNA 提取的最优选择材料。