一例绵羊痘的分离检测研究,兽医硕士论文

　　摘要

　　一起绵羊痘的诊断及病原分离鉴定绵羊痘（Sheeppox, SP）是由绵羊痘病毒(Sheeppoxvirus, SPPV)引起绵羊的一种急性、热性、高度接触性传染病。SPPV 是痘病毒科（Poxviridae），山羊痘病毒属（Capripoxvirus）的成员，主要侵害绵羊，其中以羔羊最为易感，能够引起感染部位皮肤和黏膜发生增生性病变，临床上以在感染动物唇、乳房、会阴、尾根以及皮肤无毛少毛处发生丘疹、痘疹、脓疱为特征。目前绵羊痘广泛流行于全世界的多个国家和地区，我国内蒙古、辽宁、青海等多个养羊省区也有本病发生的相关报道。即使在无继发感染的情况下，绵羊痘死亡率仍可达 10～20%。因此该病的发生流行严重阻滞我国养羊业的健康发展，并给养羊业造成严重的经济损失。

　　2012 年 9 月，辽宁锦州某养羊户饲养的 130 只绵羊中，先后有 30 只在唇、乳房、会阴以及皮肤无毛少毛处出现不同程度的增生性病变，最初局部皮肤出现红斑，逐渐变为丘疹、水疱和脓疱，最后破溃结痂。此外，在疾病初期，病羊体温持续上升，最高时可达 41℃。根据该病的发生情况及临床症状，初步诊断为绵羊痘。为了进行确诊，本研究通过病理组织学观察、电镜观察、细菌学检测以及 PCR 检测等方法从病理学和病原学角度进行系统的分析。

　　剖检可见，在病羊皮肤、肺脏、瘤胃等部位出现灰白色的痘疹结节。病理组织学观察可见，皮肤棘细胞增生，部分棘细胞胞浆内出现有粉红色、圆形嗜酸性病毒包涵体；肺脏出现间质性肺炎变化，肺支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞增生，出现化生现象；此外，肝脏发生脂肪变性。将病料研磨上清液进行电镜负染观察，可见卵圆形的病毒粒子；PCR 扩增获得 SPPV 特有的 P32 基因片段；此外，细菌学检测结果排除了混合感染的可能性。在证实该病病原为 SPPV 后，本研究利用原代胎羊肾细胞进行病原分离，结果显示，在盲传至第 4 代时细胞出现变圆，核固缩等典型的细胞病变现象；收集细胞病变液进行电镜负染观察，可见有典型的痘病毒粒子。综合该病流行特点、临床症状、病理变化以及实验室诊断结果，证实该病的发生原因为 SPPV 感染。本研究不仅为绵羊痘病毒分子生物学特性的研究奠定基础，同时也将为对该病的诊断、免疫预防和治疗提供重要的理论依据。

　　关键词：绵羊痘，病原学，病理学，分离鉴定

　　目录
　　
　　前言
　　
　　第一章文献综述
　　
　　1 病原学
　　1.1 病毒的分类地位及形态特征
　　1.2 病毒的理化性质及生物学特性
　　1.3 病毒的分离培养
　　2 流行病学
　　2.1 流行现状及地理分布
　　2.2 流行特点
　　3 发病机理
　　4 临床症状
　　5 病理变化
　　5.1 体表病变
　　5.2 剖检变化
　　5.3 镜检变化
　　6 诊断
　　6.1 临床诊断
　　6.2 实验室诊断
　　7 疫苗
　　7.1 灭活疫苗
　　7.2 弱毒疫苗
　　7.3 多肽菌苗
　　7.4 亚单位疫苗
　　7.5 基因重组疫苗
　　8 综合防治
　　8.1 预防
　　8.2 治疗
　　
　　第二章一起地方绵羊痘的实验室诊断
　　
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.2 方法
　　2 结果
　　2.1 发生流行情况
　　2.2 临床症状观察
　　2.3 病理剖检
　　2.4 病理组织学观察
　　2.5 电镜负染
　　2.6 PCR 扩增
　　3 讨论
　　3.1 羊痘的危害
　　3.2 羊痘的诊断
　　4 小结
　　
　　第三章绵羊痘病毒辽宁锦州分离株的分离鉴定
　　
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.2 方法
　　2 结果
　　2.1 病毒分离
　　2.2 病毒毒力测定
　　2.3 电镜负染
　　2.4 测序分析
　　3 讨论
　　4 小结
　　
　　结论
　　
　　参考文献

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