高效液相色谱法测定舒肝和胃丸中橙皮苷的含量

　　舒肝和胃丸(大蜜丸) 是由醋香附，白芍，佛手，陈皮，柴胡等十三味中药组成的复方制剂，具有疏肝解郁，和胃止痛功效，用于肝胃不和，两胁胀满，胃脘疼痛等病症。2010 版《中国药典》一部对该方剂的含量测定的指标只有芍药苷一种成分，测定指标单一。陈皮、佛手是其主要成分，而橙皮苷就是陈皮和佛手的主要活性成分之一。橙皮苷是一种天然的二氢黄酮苷，属黄烷酮类化合物，性质稳定，在该方剂中含量较高。为弥补目前该剂型含量测试指标单一的不足，保证临床用药的安全性和有效性，控制药品的质量，本试验采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量。

　　1、 材料和仪器

　　本实验的供试品舒肝和胃丸购自大参林连锁药店，批号 1011043、1013269、12010337; 对照品橙皮苷购于中国药品生物制品检定所，批号 110721 －201115，供含量测定用，含量为 95． 30%; 甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯; 实验用水均为蒸馏水。LC-2010C 高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ) ;XS205 电子分析天平(瑞士梅特勒 － 托利多公司) ; AK-2000 电子天平 (中韩合资科成电子仪器有限公司) ;KQ-3004VDE6 双频数控超声清洗器(南京温诺仪器设备有限公司) 。

　　2、 实验方法与结果

　　2． 1 系统适应性试验

　　色谱柱: Syncronis C18(4． 6 mm ×250 mm，5 μL) ，流动相: 甲醇 － 0． 11% 磷酸溶液(39∶ 61) ，流速: 1． 0mL / min，测波长: 283 nm，柱温: 35 ℃ ，泵压不大于 25MPa; 定量方法: 外标法; 进样量: 10 μL。在此条件下，理论板数按橙皮苷计算不少于 2 000，分离度 ＞1． 5。由图 1 可知，供试品和对照品溶液在相同的保留时间处出现对应的峰，并且能达到基线分离; 佛手、陈皮双阴性对照溶液在对应的保留时间处无吸收峰，表明其他几味药对橙皮苷的测定无干扰，说明该方法专属性较好。

　　2． 2 供试品溶液的制备

　　取本品大蜜丸，剪碎，取约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 50 mL 甲醇，密塞，称定重量，超声处理30 min(功率 250 W，频率 33 kHz) ，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

　　2． 3 对照品溶液的制备

　　精密称定含量为95． 30%橙皮苷对照品10． 12 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液(96． 41 μg/mL) 。精密吸取上述储备液 3 mL，置 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(5． 784 μg/mL) 。用时适当稀释成不同溶度的溶液。

　　2． 4 阴性样品溶液的制备

　　按处方配比，取除陈皮、佛手外的其他十一味药材，粉碎成细粉，过筛，混匀。每 100 g 粉末用炼蜜 120～ 130 g 制成大蜜丸，再按供试品溶液制备方法制得缺陈皮、佛手的双阴性样品溶液。按同法制得佛手阴性对照溶液及陈皮阴性对照溶液。

　　2． 5 线性关系考察

　　精密量取橙皮苷对照品储备液(96． 41 μg/mL) 1、2、4、6、8 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，分别精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，按含量测定的方法测定，并以对照品的浓度(μg/mL) 为纵坐标，测得的峰面积为横坐标，进行回归处理。以对照品的浓度(μg/mL) 为纵坐标，测得的峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程: y =0．000 057 80 X +0． 207 4，r = 0． 999 9，RSD = 1． 461% 。结果表明橙皮苷在 9． 644 ～96． 44 μg/mL 范围内呈良好的线性关系。

　　2． 6 仪器精密度试验

　　取同一浓度的对照品溶液(5． 784 μg/mL) ，按拟定的色谱条件连续进样 6 次，所得的峰面积大小接近，RSD = 0． 18% ，小于 3% ，精密度良好。

　　2． 7 重复性试验

　　取同一批供试品(批号 1011043) 6 份，按“2． 2”项下方法制备和测定。6 份舒肝和胃丸含有橙皮苷的量均在 13． 40 ～13． 50 mg/丸之间，平均值是 13． 48 mg/丸，RSD = 0． 03% ，小于 3% 重复性良好。

　　2． 8 稳定性试验

　　取同一份供试品(批号 1011043) 溶液，按“2． 2”项下方法，分别在 0、4、8、12、16、24 h 进样测定。结果表明不同时间段测得舒肝和胃丸中橙皮苷的峰面积平均值是 1 066 657，RSD =0． 15%，因此舒肝和胃丸自制备后 24 h 内稳定。

　　2． 9 加样回收率试验

　　取同一批已知含量(批号: 12010337，含量 2． 893mg / g) 的供试品 6 份，每份取样量为供试品取样量(1 g)的50%，置具塞锥形瓶中，以当前取样含量的1∶1 的比例，分别精密加入橙皮苷对照品溶液(5．784 μg/mL) 25 mL，密塞，称定重量，按“2． 2”项下的供试品溶液制备方法制备供试液，按上述色谱条件测定，计算橙皮苷平均加样回收率。从表 1 可以看出，对照品加入量和样品取样量中被测成分之和在标准曲线线性范围内，在拟定的同一色谱条件下 6 次同一供试品溶液中测得橙皮苷的平均回收率为 99. 44%，RSD = 0． 28%，表明橙皮苷在该试验条件下，加样回收率良好，符合测定要求。

　　2． 10 样品含量测定

　　取供试品 3 批，按供试品溶液的制备方法制备。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算 3 批样品中橙皮苷的含量。从表 2 可以看出，不同批号的舒肝和胃丸，橙皮苷含量差异较小，说明该药品质量稳定。

　　3、 讨论

　　在流动相选择中，反复试验比较了不同比例的乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-水、甲醇-磷酸溶液系统，并从试验结果的保留时间、基线平稳及样品稳定性等情况进行了考虑，发现使用甲醇-磷酸溶液作为流动相更理想，同时参考《中国药典》2010 版一部橙皮苷含量测定进行选择，最终选定以甲醇-磷酸溶液(39∶ 61) 作为流动相。

　　本实验采用 HPLC 法测定舒肝和胃丸中橙皮苷，旨在对该制剂的质量控制提供一种简便、易行、结果准确的有效补充方法，为生产企业和检验部门更加全面的检测产品质量提供实验依据，对确保舒肝和胃丸的质量控制起到参考作用。

　　参考文献：
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　　［4］吴怀恩，辛华，卢澄生，等． 高效液相色谱法测定佛手配方颗粒中橙皮苷的含量［J］． 中国生化药物杂志，2011，32(2) : 139．