高效液相色谱法对制剂中芍药苷含量的测定

　　和胃平肝丸是舒气平肝，和胃止痛的良方。 用于肝胃不和，气郁结滞引起的两胁胀满，倒饱嘈杂，气逆作呕，胃脘刺痛，饮食无味。 芍药苷是其组成药物白芍的有效成分之一，具有显着的镇痛、镇静、抗惊厥作用。 本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中芍药苷含量进行测定。 实验证明该法准确、快捷、灵敏、重现性好。

　　1 仪器与试药

　　Waters 600-717-2996 高效液相色谱仪（ 自动进样器，PDA 检测器；Empower 色谱工作站）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号 110736-200630）；和胃平肝丸为市售药物；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

　　2 方法与结果

　　2. 1 色谱条件Eclipse XDB-C18 色谱柱 （ 4. 6 mm × 150 mm,5 μm），以乙腈-水（11 ∶ 89） 为流动相，检测波长232 nm,流速 1. 0 mL·min- 1,柱温 30 ℃，进样量20 μL.

　　2. 2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品 1. 50 mg 于25 mL 容量瓶中，加甲醇使溶解制成每 1 mL 含 0. 060 mg 的溶液，作为对照品储备液。

　　2. 3 阴性对照品溶液的制备按处方量称取除白芍外的药材，置具塞锥形瓶中，精密加 70% 乙醇 50 mL,密塞，称定重量，超声30 min,放冷，密塞，再称定重量，用 70% 乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0. 45 μm 有机微孔滤膜，作为阴性对照品溶液。

　　2. 4 供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取约0. 5 g,精密称定，加入硅藻土 0. 5 g,研匀，置具塞锥形瓶中，精密加 70% 乙醇 50 mL,密塞，称定重量，超声 30 min,放冷，密塞，再称定重量，用 70% 乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0. 45 μm有机微孔滤膜，作为供试品溶液。

　　2. 5 系统适用性试验及专属性考察精密吸取对照品溶液、供试品溶液及空白对照品溶液各 20 μL,分别按照上述色谱条件进样，色谱图见图 1. 理论塔板数按芍药苷峰计算不低于2 000,芍药苷峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1. 5.

　　2. 6 线性关系考察分别精密吸取对照品储备液 2,4,6,8,10μL 进样测定，记录色谱图。 以进样量（X,μg）对色谱峰面积积分值（Y）作标准曲线，并进行回归，计算得回归方程为：Y =1 432 113X -6 744,r =0. 999 9,线性范围 0. 12 ~ 0. 60 μg.

　　2. 7 稳定性试验取同一批样品的供试品溶液，分别在 0,1,3,5,8,12,18,24 h 进行 HPLC 测定，记录峰面积积分值。芍药苷峰面积积分值 RSD 为 1. 59%.

　　2. 8 精密度试验取同一批号的和胃平肝丸供试品 0. 5 g,按 2. 4项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件连续进样 6 次，测定芍药苷峰面积，计算 RSD 为 0. 74%.

　　2. 9 重复性试验精密称取同批样品 6 份，按 2. 4 项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定。 测得芍药苷的平均含量（n = 6）为 0. 761 2 mg·g- 1,RSD 为2. 09% .

　　2. 10 加样回收率试验取已知含量（0. 761 2 mg·g- 1） 的同批样品6 份，每份约 0. 25 g,精密称定，分别精密加入芍药苷对照品180 μg,按2. 4 项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定。 结果平均回收率（n =6）为 99. 41%,RSD 为 1. 79%.

　　2. 11 样品含量测定精密称取 3 批和胃平肝丸样品，每批 2 份，分别按 2. 4 项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，按照外标法计算芍药苷含量。 结果见表 1.【1】

　　
　　3 讨 论

　　3. 1 检测波长的选择对芍药苷对照品溶液在 190 ~400 nm 内做了紫外扫描，芍药苷在 232 nm 处有强吸收峰，因此选择232 nm 为检测波长。

　　3. 2 流动相的选择考察了不同比例的乙腈-水的流动相系统，结果表明，采用乙腈-水（11∶ 89）作流动相时出峰时间较快，峰型较好。

　　3. 3 提取方法的选择采用 70%乙醇为提取溶剂，考察了超声提取和回流提取 2 种方法，结果表明，超声提取比回流提取方法提取完全，因此采用了超声提取方法。

　　3. 4 提取溶剂的选择采用超声的提取方法，考察了 100% 乙醇，70%甲醇，70%乙醇的提取效果，结果表明，70% 乙醇提取效率最高，因此选择了 70%乙醇为提取溶剂。

　　3. 5 提取时间的选择分别考察了超声 20 min,30 min,40 min 的提取效果，结果表明，超声 30 min 与超声 40 min 提取效率无明显差别，说明超声 30 min 已经能够提取完全，因此选择了超声 30 min.

　　参 考 文 献
　　
　　[1 ] 中国药典[S]. 一部。 2010:96.
　　[2 ] 尹宁宁，徐华玲，徐丽华。 白芍中芍药苷含量测定影响因素的实验研究[J]. 中国医药导报，2009,6（11）：43.
　　[3 ] 冀兰鑫，傅俊曾，黄浩，等。 赤芍中氧化芍药苷和芍药苷的含量测定[J]. 亚太传统医药，2010,6（7）：18.
　　[4 ] 李冬雪，杜守颖，贾海英，等。 对《中国药典》2000 年版Ⅰ部白芍中芍药苷含量测定方法的探讨[J]. 时珍国医国