中药接骨外敷方中超微粉体技术运用

    骨折是临床上的常见病多发病，骨折愈合是极其复杂的骨组织再生修复过程，受到全身和局部许多因素的影响和调节。约 5% ~10% 的骨折由于各种原因发生延迟愈合或不愈合，严重影响人们的生存质量。本研究建立动物骨折模型，应用中药接骨外敷方，引入超微粉碎和粉体设计技术，为提升中药外敷治疗骨折的疗效提供实验依据。

　　1 资料与方法

　　1. 1 经验方 按活血化瘀（ 乳香、没药、血竭） ,清热消肿（ 硼砂、生大黄） ,止痛（ 苏木、马钱子） 和接骨续筋（ 骨碎补、自然铜、地鳖虫） 之原则组方，以活血化瘀，改善局部血液循环为其主要药理特征，我院研制了中药外敷经验方，具有加快骨折愈合的作用，临床沿用多年。实验方剂： 乳香、没药、硼砂、生大黄、苏木、骨碎补、自然铜、地鳖虫等量。

　　1. 2 实验动物 选用健康成年家鸡 36 只（ 体重1. 0~ 1. 5kg） ,由浙江大学医学院动物实验中心提供，实验过程对动物处置均符合动物伦理学要求。

　　1. 3 造模及处理

　　1. 3. 1 家鸡双肱骨骨折模型 将 36 只家鸡左右翅膀的鸡毛剃干净，在无菌条件下采用纵行切口，逐层分离，暴露双肱骨，用骨钻造成双肱骨横行骨折。采用将骨碎片及凝血块冲洗干净后，逐层缝合包扎。术后连续 3 天予青霉素 40 万/d 肌注，局部创面无感染认为造模成功。将 36 只家鸡随机分成超微粉组、普通粉组、对照组[1]各 12 只。

　　1. 3. 2 中药粉剂的制作 普通粉组： 取等量乳香、没药、硼砂、生大黄、苏木、骨碎补、自然铜、地鳖虫等中药材，采用普通中药粉碎机（ 青州市新航机械设备有限公司） 将上述药材制成普通粉剂（ 粒径 >50 um不等） .超微粉组： 取同样等量中药材，采用BMF-6 药用超微粉碎机（ 济南倍力粉技术工程有效公司） 将上述药材粉碎制成超微粉（ 粒径 <6 um） .

　　1. 3. 3 处理方法 对照组、普通粉组、超微粉组分别予外敷普通衬材（ 无中药） 、中药普通粉剂衬材、中药超微粉剂衬材后，分别加石膏外固定，每周更换衬材 1 次，连续观察 6 周。

　　1. 4 疗效评定 骨折愈合 X 线评分： 分别于造模后第 2、4、6 周进行 X 线检查，对外骨痂和骨折线进行半定量检测。外骨痂定量： 0 分： 外骨膜无反应； 1分： 出现外骨痂； 2 分： 形成皮质骨桥； 3 分： 外骨痂轻度吸收； 4 分： 外骨痂明显吸收； 5 分： 外骨痂明显吸收。骨折线定量： 0 分： 骨折线较前无变化； 1 分： 骨折线开始模糊； 2 分： 骨折断端间出现牢固的连接现象； 3 分： 骨折线被骨痂取代； 4 分骨髓腔密度开始减低； 5 分： 骨髓腔再通。将外骨痂及骨折线评分相加定为骨折愈合 X 线评分[3].生化指标检测： 分别于造模前和造模后 2、4、6周留取静脉血 3 mL,静置 30 min 后，3000 r/min 离心 5 min,检测血清碱性磷酸酶（ ALP） 、血钙（ Ca） 、血磷（ P） 水平。

　　1. 5 统计学处理 采用 SPSS15. 0 软件对所得数据进行统计学分析，多组计量资料采用方差分析，若存在差异，再进行多重比较，P <0. 05 为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2. 1 各组骨折愈合的 X 线评分 2W、4W、6W 时骨折愈合的 X 线评分比较显示： 超微粉组显著高于普通粉组、对照组，普通粉组仅在 4W、6W 时较对照组高，差异均具有统计学意义（ P 均 <0. 05,表 1） .

　　2. 2 各组家鸡在不同时刻的血清碱性磷酸酶、钙、磷水平 超微粉组的碱性磷酸酶在第 2 周达高峰，显著高于同期其他两组（ P <0. 05） ,后逐渐下降，且其在第 6 周时血清水平与治疗前比较无显著性差异，而普通粉组及对照组的碱性磷酸酶高峰分别在第 4、6 周出现，明显晚于超微粉组。在第 2 周三组模型的血钙浓度均显著升高，其中超微粉组明显高于同期其余各组（ P < 0. 05） ,且其在第 6 周时的血钙水平接近正常值，其余两组的血钙水平均高于治疗前。（ P <0. 05） 三组模型的血磷水平在第 2 周均有所降低，在第 4 周左右开始逐渐升高，而超微粉组的升高趋势比较明显，且高于同期其余两组的血磷水平（ P <0. 05） .见表 2.

　　3 讨 论

　　目前普遍公认骨折具有自身愈合的倾向，但其愈合过程受到全身和局部多种因素的影响。如何加速骨折愈合，提高愈合质量一直是医学界共同关注的重大课题之一。中药外敷是中医药治疗骨折的特色疗法，历史悠久，疗效独特，但粉末调敷存在剂量大，有效成分溶出率不高，透皮吸收率低，黏附力差、使用不便等缺陷，限制了疗效的发挥。近年来超微粉碎技术[2]的出现，在一定程度上改善了中药外敷疗效，受到临床工作者的关注。

　　本研究结果显示，采用超微粉碎技术制成的中药超微散剂在促进骨痂形成，加速骨折愈合方面具有显著疗效。中药方剂中的地鳖虫，可以有效改善骨折部位的血液循环，促进新生血管的生成，使骨生成细胞及破骨细胞的功能活性增加，骨痂形成快，促进骨折的早期愈合。骨碎补能够提早碎骨片吸收，促进基质形成，促进早期新生骨的出现，同时配合活血化瘀类药物，促进钙吸收及钙沉积，满足新骨形成的元素，增强了骨质的强度，提高骨折愈合质量，加快骨折愈合速度[3].采用超微粉碎技术处理中药粉剂，散剂的粒径较普通粉剂变小，易于中药释放其有效成分，而且体积较小，粒度均衡，总体表面积增大，增加了有效成分与骨折断端的接触，提高其生物利用度，增加药物透皮吸收效果[4].通过 X 线摄片发现，采用超微粉剂中药组治疗的骨折模型的外骨痂形成较早，骨折线在早期出现模糊。而外骨痂形成和骨折线的消失是骨折愈合的重要标志[5].提示采用中药超微散剂较普通粉剂能加速骨外膜的形成、外骨痂的形成和塑形，从而促进骨折的愈合。碱性磷酸酶主要由成骨细胞产生，是反映成骨细胞活动性和骨重建的血清学指标。当血清碱性磷酸酶水平出现升高，提示成骨细胞的活跃性增强[6],采用超微散剂中药治疗的骨折模型的碱性磷酸酶的血清水平高峰出现较早，间接提示了骨折愈合活动的进行。血钙、血磷水平直接影响骨质的钙化和溶解，二者乘积的升高有利于钙盐的沉积[7],促进成骨细胞活动。本研究中超微粉组的血钙水平和血磷水平最早在治疗第 2 周开始升高，且二者的升高水平均高于同期其余两组的血清水平。提示着超微粉剂相较于普通粉剂能够促进血清碱性磷酸酶的释放、提高血钙和血磷的乘积、调节骨代谢、增强成骨细胞的活动性、促进骨痂形成，加速骨折的早期愈合[8].

　　综上所述，中药散剂治疗骨折中应用超微粉体技术处理药方，能够有效增加中药有效成分的释放，有效促进骨折愈合，其作用机制与血清碱性磷酸酶、血钙、血磷水平相关。本研究中中药超微粉剂的粒径均小于 6 um,疗效客观，但中药超微散剂的具体粒径值得进一步研究，期待取得更好的治疗效果。

　　参考文献：

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　　[2]张继平，杨海韵。 超微粉碎技术是促进中药传统产业改造的有效途径[J]. 中药新药与临床药理，2013,14（ 3） : 209 -211.

　　[3]Simank HG,Manggold J,Sebald W,et al. Bone morphogenetic pro-tein-2 and growth and differentiation factor-5 enhance the healing ofnecrotic bone in a sheep model[J]. Growth Factors,2011; 19 （ 4 ） :247 - 257.

　　[4]曾庆。 微米中药功能衬材对家兔骨折愈合的影响[D]. 广州： 南方医科大学，2010.

　　[5]Shimazakl A,Lunl K,Azuma Y,et al. Low-intensity pulsed ultrasoundaccelerate bone maturation in distraction osteogenesis in rabbits[J]. JBone Joint Surg,2010,82（ 8） : 1077 - 1082.

　　[6]廖正根，陈续龙，赵国巍，等。 超微粉碎对骨碎补理化性质的影响[J]. 中草药，2011,42（ 3） : 461 -465.

　　[7]Rosier RN,Okeefe RJ,Hicks DG. The potential role of transforminggrowth factor beta in fracture healing[J]. Clin Orthop,2008,355（ 6） : 294 -300.

　　[8]张春玲，阮芙蓉，郭增军。 骨折的中药内治[J]. 中国实验方剂学杂志，2013,19（ 11） : 352 -355第 3 期 刘志安，等： 中药散剂治疗骨折中应用超微粉体技术的临床价值267