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VC对树突状细胞成熟、分化及其免疫功能的影响

来源:未知 作者:小韩
发布于:2015-11-11 共4014字

  维生素 C 是人体所必需的一类小分子营养物质, 它可确保机体功能正常发挥及免疫功能稳定。研究显示[1],高浓度的维生素 C 富集于多种免疫细胞中,包括: 嗜中性粒细胞、巨噬细胞、B 淋巴细胞和 T 淋巴细胞等,扮演“抗氧化剂”作用以对抗机体氧自由基[2],且因感染及炎症而快速消耗,表明 VC 可能是维持自发免疫及获得性免疫稳定的一个重要因素。

  另外,VC 还可提升淋巴细胞的增殖能力及 NK 细胞的自然杀伤活性[3,4].而 May 等[5]另一项研究显示,VC 也可增加嗜中性粒细胞及巨噬细胞抗菌活性,但对于 T 淋巴细胞数量却未见影响。Noh[6]另据报道显示,迟发型超敏反应( DTH) 发生会因 VC 含量缺乏而减弱,而对 VC 进行补充后,DTH 反应又会恢复至正常水平。

  另有细胞免疫研究显示,对于 Gulo( -/-) 基因缺陷型小鼠( L-古洛糖酸内酯氧化酶基因缺陷型小鼠,突变可能导致部分动物无法合成 Vc)[7],VC 可促进免疫反应向Th1 细胞分化,进而促进IFN-γ、TNF-α 的产生,当 VC 缺乏时可能导致小鼠炎症的发生。而随着 VC 的持续补充,Th1 型免疫反应显着提升,同时小鼠体内 IgG1、IgE 以及 Th2 型免疫细胞抗体明显下降,而一种 Th1 型免疫相关抗体 IgG2C 含量也会显着提高,并且会提升 DTH 反应强度[7,8],表明 VC 会显着影响 CD4+细胞亚群分化。另据 Hwang[4]报道,VC还可促进外周血 CD8+记忆性 T 细胞增殖[4].但 VC如何对免疫进行调控,其机制目前尚不明了。

  树突状细胞( DC) 是功能最强的抗原提呈细胞( APC) .当免疫共刺激分子,如 CD80、CD86 等在 DC细胞表面高表达时,DC 细胞可快速提呈抗原信息,发挥免疫功能,刺激 T 淋巴细胞成熟[9,10].同时,DC 的成熟与分化还与细胞天然免疫 Toll 样受体( TLR) 密切相关。研究报道,作为氧化剂的 H2O2可显着刺激DC 细胞成熟、分化,并上调 CD4+免疫反应[11,12].那么作为抗氧化剂的 VC( 抗坏血酸) 对 DC 细胞成熟与分化是否有影响? VC 如何调控 DC 细胞发挥免疫调控作用? 其细胞表面共刺激分子如何表达? 本文将就此展开研究。

  1 材料与方法

  1. 1 试剂耗材 维生素 C( VC) 购自 Sigma,rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α( Peprotech 公司) ,10% 胎牛血清( 杭州四季青) ,RPMI1640( Scientific 公司) ,FITC 标记 CD86mAb,PE 标记 CD80mAb,APC 标记 MHCⅡDR,FITC 标记 CD40mAb,PE 标记 CD40L ( CD154 )mAb,Ficoll 分离液( 天津市灏洋生物制品科技有限责任公司) .

  1. 2 仪器设备 倒置显微镜( 奥林巴斯) ,CO2细胞培养箱( Thermo) ,台式冷冻离心机( 湖南湘智) ,台式高速离心机( Eppondorf) ,流式细胞仪( BD 公司) ,生物安全柜( 新加坡 ESCO) .

  1. 3 主要方法
  
  1. 3. 1 细胞分离 采集健康志愿者外周血与 PBS 按照1∶4混合均匀,将稀释后的血液以 1 ∶1比例缓慢加入淋巴细胞分离液上方,4℃ 2 000 r/min 离心 15min.小心吸取单个核细胞层,加入另一离心管中,并用4 倍体积 PBS 洗涤1 000 r/min 离心5 min,离心去除淋巴细胞分离液。PBS 洗涤两次后,即获得外周血单核细胞。

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