VC对树突状细胞成熟、分化及其免疫功能的影响

　　维生素 C 是人体所必需的一类小分子营养物质， 它可确保机体功能正常发挥及免疫功能稳定。研究显示[1],高浓度的维生素 C 富集于多种免疫细胞中，包括： 嗜中性粒细胞、巨噬细胞、B 淋巴细胞和 T 淋巴细胞等，扮演“抗氧化剂”作用以对抗机体氧自由基[2],且因感染及炎症而快速消耗，表明 VC 可能是维持自发免疫及获得性免疫稳定的一个重要因素。

　　另外，VC 还可提升淋巴细胞的增殖能力及 NK 细胞的自然杀伤活性[3,4].而 May 等[5]另一项研究显示，VC 也可增加嗜中性粒细胞及巨噬细胞抗菌活性，但对于 T 淋巴细胞数量却未见影响。Noh[6]另据报道显示，迟发型超敏反应（ DTH） 发生会因 VC 含量缺乏而减弱，而对 VC 进行补充后，DTH 反应又会恢复至正常水平。

　　另有细胞免疫研究显示，对于 Gulo（ -/-） 基因缺陷型小鼠（ L-古洛糖酸内酯氧化酶基因缺陷型小鼠，突变可能导致部分动物无法合成 Vc）[7],VC 可促进免疫反应向Th1 细胞分化，进而促进IFN-γ、TNF-α 的产生，当 VC 缺乏时可能导致小鼠炎症的发生。而随着 VC 的持续补充，Th1 型免疫反应显着提升，同时小鼠体内 IgG1、IgE 以及 Th2 型免疫细胞抗体明显下降，而一种 Th1 型免疫相关抗体 IgG2C 含量也会显着提高，并且会提升 DTH 反应强度[7,8],表明 VC 会显着影响 CD4+细胞亚群分化。另据 Hwang[4]报道，VC还可促进外周血 CD8+记忆性 T 细胞增殖[4].但 VC如何对免疫进行调控，其机制目前尚不明了。

　　树突状细胞（ DC） 是功能最强的抗原提呈细胞（ APC） .当免疫共刺激分子，如 CD80、CD86 等在 DC细胞表面高表达时，DC 细胞可快速提呈抗原信息，发挥免疫功能，刺激 T 淋巴细胞成熟[9,10].同时，DC 的成熟与分化还与细胞天然免疫 Toll 样受体（ TLR） 密切相关。研究报道，作为氧化剂的 H2O2可显着刺激DC 细胞成熟、分化，并上调 CD4+免疫反应[11,12].那么作为抗氧化剂的 VC（ 抗坏血酸） 对 DC 细胞成熟与分化是否有影响？ VC 如何调控 DC 细胞发挥免疫调控作用？ 其细胞表面共刺激分子如何表达？ 本文将就此展开研究。

　　1 材料与方法

　　1. 1 试剂耗材 维生素 C（ VC） 购自 Sigma,rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α（ Peprotech 公司） ,10% 胎牛血清（ 杭州四季青） ,RPMI1640（ Scientific 公司） ,FITC 标记 CD86mAb,PE 标记 CD80mAb,APC 标记 MHCⅡDR,FITC 标记 CD40mAb,PE 标记 CD40L （ CD154 ）mAb,Ficoll 分离液（ 天津市灏洋生物制品科技有限责任公司） .

　　1. 2 仪器设备 倒置显微镜（ 奥林巴斯） ,CO2细胞培养箱（ Thermo） ,台式冷冻离心机（ 湖南湘智） ,台式高速离心机（ Eppondorf） ,流式细胞仪（ BD 公司） ,生物安全柜（ 新加坡 ESCO） .

　　1. 3 主要方法
　　
　　1. 3. 1 细胞分离 采集健康志愿者外周血与 PBS 按照1∶4混合均匀，将稀释后的血液以 1 ∶1比例缓慢加入淋巴细胞分离液上方，4℃ 2 000 r/min 离心 15min.小心吸取单个核细胞层，加入另一离心管中，并用4 倍体积 PBS 洗涤1 000 r/min 离心5 min,离心去除淋巴细胞分离液。PBS 洗涤两次后，即获得外周血单核细胞。