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泰山磐石散对PCOS妊娠大鼠血清TNF-α及妊娠结局的影响

来源:未知 作者:小韩
发布于:2014-11-28 共3609字
论文摘要

  多囊卵巢综合征( polycystic ovary syndrome,PCOS) 是一种以卵泡发育障碍、胰岛素抵抗和雄激素过多为其特征性改变的、病因复杂的神经内分泌疾病,育龄妇女的发生率约为 5% ~10%[1]。PCOS 患者在妊娠后极易发生自然流产。有报道,PCOS 患者在妊娠最初 3 个月内流产率高达 20% ~50%[2]。Cocksedge 等[3]在研究流产与 PCOS 的关系时发现,复发性流产者 4. 8% ~82% 存在卵巢多囊样改变,15% ~26% 存在高雄激素血症。临床资料也表明,PCOS 患者经治疗后妊娠,虽血人体绒( 毛) 膜促性腺激素( HCG) 呈进行性升高,但妊娠 6 ~ 8 周后易出现自然流产或胚胎凋萎,即使进行黄体期支持也无法改变其流产结局。PCOS 患者经促排卵治疗后,其排卵障碍可被成功纠正,但最终妊娠率低,自然流产率高。近年来,肿瘤坏死因子( TNF) 与 PCOS 的发病机制愈来愈受到关注,且 TNF -α 参与妊娠的生理及病理过程,妊娠期异常分泌的大量TNF - α 可能损害胎儿生长,引起流产和早产。而 PCOS患者体内高水平的 TNF - α 会影响妊娠的进程,导致流产和早产等危险。本实验通过脱氢表雄酮建立 PCOS 大鼠模型,研究中药泰山磐石散对 PCOS 妊娠模型大鼠血清TNF - α 及妊娠结局的影响,探讨 TNF - α 与妊娠的关系及本方改善 PCOS 妊娠结局的作用机制。

  1 材料与方法

  1. 1 材料
  
  1. 1. 1 实验动物 21 日龄雌性 SD 大鼠 90 只,体质量( 60 ±15) g,购自南通大学动物实验中心,动物合格证号SCXK( 苏) 2008 - 001。饲养条件: 室内温度( 22 ± 2) ℃ ,相对湿度 50% ~70%,昼夜各 12 h 间断照明。自由摄取水和食物,饮水为自来水,普通大鼠饲料喂养,每周更换 3次垫料。实验饲料及垫料均由南通大学动物实验中心提供。

  1. 1. 2 主要仪器 TNF - α 试剂盒、抗体均购自上海联硕生物科技有限公司; SpectraMax M2 多功能酶标仪,美国Molecular Devices Corporation( MDC) 公司产品。

  1. 1. 3 药物及试剂 枸橼酸氯米芬胶囊( 塞浦路斯高特制药有限公司,进口药品注册证号 H20091079) ; 注射用脱氢表雄酮( 珠海远城医药化工有限公司,批号 H110312) ;地屈孕酮片( 荷兰 SolvayPharmaceuticalsB. V,国药准字H20090470) ; 泰山磐石散颗粒,药物组成: 党参 10 g,白术10 g,白芍药 12 g,熟地黄 10 g,当归 8 g,川芎 8 g,川续断15 g,黄芩 10 g,炙甘草 3 g,砂仁( 后下) 5 g,苎麻根 10 g。

  由江苏省中医院制剂室经提取、加工、干燥成颗粒剂。

  1. 2 实验方法
  
  1. 2. 1 PCOS 模型制备及分组 参照 Anderson 等[4]方法采用脱氢表雄酮建立 PCOS 大鼠模型。取21 日龄雌性 SD大鼠 90 只,分别编号,用随机数字表法分为 2 组,70 只为模型组,20 只为空白对照组。2 组大鼠均于 21 日龄断乳,适应性喂养 2 d 后,于 23 日龄( 实验第 1 d) 开始,模型组大鼠每日 8: 00 予注射用脱氢表雄酮 6 mg/100 g 体质量 +注射用大豆油 0. 2 mL 颈背部皮下注射,每日 1 次; 空白对照组大鼠予注射用大豆油 0. 2 mL 颈背部皮下注射,每日1 次,连续 30 d。模型组于注射第 20 d 时开始每日观察阴道涂片,经阴道涂片显示大鼠始终处于动情间期,无动情周期变化、无排卵。于第 30 d 模型组和空白对照组大鼠,眼眶静脉采血,模型组血清激素睾酮值升高为造模成功。

  于 80 日龄起,模型组大鼠用枸橼酸氯米芬 10 mg/100 g体质量每日 1 次灌胃,连续 5 d 促排卵后,模型组大鼠及空白对照组大鼠与雄鼠按 1∶ 1合笼,次日以发现阴栓者记为妊娠第 1 d,并分为正常妊娠组、PCOS 妊娠空白组、PCOS妊娠中药组及 PCOS 妊娠西药组,每组各 20 只。

  1. 2. 2 给药方法 妊娠第 1 d 开始,PCOS 中药组予泰山磐石散颗粒溶液( 即将每剂泰山磐石散颗粒加水 111 mL配制而成,含生药 0. 909 g/mL) 1 mL/100 g 体质量灌胃给药,PCOS 妊娠西药组予等容积地屈孕酮溶液( 即将地屈孕酮每片 10 mg,约加水 55 mL 配制而成,含生药 0. 18mg / mL) 灌胃,PCOS 妊娠空白组予等容积 0. 9% 氯化钠注射液灌胃。均每日 1 次,连续 5 d。正常妊娠组不进行任何干预。

  1. 2. 3 标本采集及制备 以上各组孕鼠均于妊娠第 5 d14: 00 时各取 6 只,眼眶静脉采血,以血 1 mL∶ 肝素10 μL比例将肝素加于血内,离心,取上清,置于 - 20 ℃ 冰箱中保存待行血清 TNF - α 的测定。操作方法严格按照试剂盒说明书进行。妊娠第 8 d 16: 00 时另取各组孕鼠 6 只,脱臼处死,取双侧子宫,记录孕鼠数及胚胎着床数。

  1. 3 统计学方法
  
  应用 SPSS 17. 0 统计软件进行统计学分析,计量资料采用均数 ± 标准差( x珋 ± s) 表示,组间比较采用单因素方差分析和 q 检验。

  2 结 果

  2. 1 2 组大鼠体质量比较 见表 1.【表1】

论文摘要

  
  由表 1 可见,造模前 2 组大鼠体质量比较差异无统计学意义( P >0. 05) ; 造模后模型组大鼠体质量高于空白对照组( P <0. 05) 。

  2. 2 各组孕鼠血清 TNF - α 比较 见表 2。【表2】

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  由表 1 可见,PCOS 妊娠空白组血清 TNF - α 水平较正常妊娠组明显升高( P <0. 05) ,而 PCOS 妊娠中药组及PCOS 妊娠西药组血清 TNF - α 较 PCOS 妊娠空白组降低( P <0. 05) ,与正常妊娠组比较差异无统计学意义( P >0. 05) 。2. 2 各组孕鼠胚胎着床平均数比较 见表 3。【表3】
 

论文摘要  

  由表 3 可见,PCOS 妊娠空白组胚胎着床平均数少于正常妊娠组( P < 0. 05) ,而 PCOS 妊娠中药组及 PCOS 西药组胚胎着床平均数较 PCOS 妊娠空白组增多 ( P <0. 05) ,且与正常妊娠组比较差异无统计学意义 ( P >0. 05) 。

  3 讨 论

  3. 1 TNF - α 与 PCOS TNF - α 属 TNF 家族中的一员,它具有许多重要的生物学功能,包括抗瘤、抑瘤,促进细胞生长,诱导细胞分化、凋亡,调节机体组织糖、脂肪代谢。

  在正常情况下,血浆中有较低水平的 TNF - α,对维持机体内环境的稳定起着重要作用。高浓度的 TNF - α 抑制卵巢颗粒细胞上胰岛素生长因子 - 1( IGF - 1) 诱导的 b 合成,从而影响卵泡质量及正常发育。Wu 等[5]研究发现,在 PCOS 患者卵泡细胞中存在高水平 TNF - α 表达,且高TNF - α 和高体质量指数与低白细胞介素 6( IL - 6) mRNA的表达存在一定的关系。Sayin 等[6]也报道,在正常体质量的 PCOS 伴高雄激素血症患者中,无论是否存在 PCOS的其他表现,均表现出明显升高的 TNF - α 水平。

  3. 2 TNF - α 与妊娠 TNF - α 是由激活的单核 - 巨噬细胞产生和分泌的多肽类物质。研究表明,TNF - α 对胚胎着床有重要调节作用,并参与了妊娠全过程的调节作用[7]。适量分泌 TNF - α 可调节滋养层细胞的正常增殖、分化和凋亡,促进妇女能量代谢及胚胎发育,提高孕激素及人绒毛膜促性腺激素( HCG) 的合成,对妊娠的维持起着重要作用[8]。当外周血中 TNF - α 增加时,可抑制黄体功能,促进黄体退化,导致孕酮的合成下降,内分泌紊乱,最终引起流产。Arslan 等[9]研究发现,流产患者伴有血清TNF - α 的异常升高,母胎界面局部产生的 TNF - α 有94% 释放于母体外周血循环中[10]。龙凤宜等[11]发现,TNF - α 与流产的关系密切。TNF - α 主要结合在蜕膜的间质和血管内皮细胞膜上[12],由此激活蜕膜间质中的免疫活性细胞,导致免疫排斥,产生临床上早期流产。

  综上所述,TNF - α 作为一种具有多种生物学功能的细胞因子,参与受精、着床和妊娠的生理及病理环节,妊娠期异常分泌的大量 TNF - α 可能损害胎儿正常生长,引起流产和早产。而 PCOS 患者体内高水平的 TNF - α 无疑会影响妊娠的进程,导致流产和早产等危险。PCOS 由于自身内分泌紊乱的病理环境不利于胚胎的生长发育,即使给予调整月经周期及纠正排卵,仍存在低妊娠率、高流产率的现象。为了研究中医及西医治疗方法对 PCOS 妊娠结局的干预作用,以及 TNF - α 浓度水平与妊娠结局的相关性,以更好的指导临床,设计了本实验。

  中医学认为,PCOS 发生不孕及流产的根本原因是肾精亏虚,冲任匮乏,气血失调; 而 PCOS 流产的发展演变过程又常与脾虚相关,因此补肾在其防治中起主导作用,而健脾起协同作用。应用泰山磐石散加减补气养血,固肾健脾安胎,对 PCOS 的不良妊娠结局有很大的扭转和改善作用。泰山磐石散出自《古今医统大全》,功能益气健脾,养血安胎,适宜气血虚弱所致的堕胎、滑胎、胎动不安,是临床常用的安胎、保胎方。方以党参、白术、炙甘草益气健脾以固胎元; 当归、川芎、白芍药、熟地黄补血养血调血以养胎元; 川续断、熟地黄、白芍药合用,益肝肾而保胎元; 砂仁调气安胎; 黄芩、白术、苎麻根健脾清热,为安胎的要药。

  诸药合用,使气血调和,冲任得固,胎孕得安。现代药理研究亦表明,上述中药可通过调节内分泌功能而发挥安胎的作用[13]。本实验结果提示,PCOS 妊娠大鼠血清 TNF - α水平较正常妊娠大鼠偏高,泰山磐石散及西药地屈孕酮能在一定程度上降低血清 TNF - α 的水平,并能提高胚胎着床率。证实泰山磐石散及地屈孕酮能改善 PCOS 大鼠血清 TNF - α 的水平,提高妊娠率,降低流产率。本实验结果说明,血清中 TNF - α 浓度水平与妊娠结局存在一定相关性,日后有望成为预测流产的指标之一,从而为中医药改善 PCOS 妊娠结局方面提供理论和方法依据。

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