第 3 章 资料和方法
3.1 研究对象
2010 年 6 月至 2013 年 6 月期间于吉林大学第一医院消化内科住院患者总计352 例(其中总院 56 例,二部 296 例),男性 260 例,女性 92 例,男女比例 2.83:1,年龄(54.3±1.2)岁。按慢性 HBV 感染不同阶段分为慢性乙型肝炎(CHB)147 例(HBeAg 阳性者 79 例, HBeAg 阴性者 68 例)、代偿期乙肝肝硬化 47 例、失代偿期乙肝肝硬化组 122 例、原发性肝癌 36 例。其中 264 例患者行基线 HBsAg 定量、HBeAg 定量及 HBV-DNA 定量检测;104 例患者于基线水平行 HBV 基因型检测;70例接受核苷类似物治疗的乙肝肝硬化患者在相应治疗阶段观察临床治疗疗效。
3.2 诊断标准
所有入院患者临床诊断分期标准参照 2010 年中华医学会肝病学分会、感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》。原发性肝癌诊断标准参照 1990年全国肿瘤防治办公室和中国抗癌协会合编的《原发性肝癌诊断标准》。乙肝肝硬化患者根据 Child-Pugh 分级标准分为 A、B、C 三级。具体标准如下:
3.2.1 HBeAg阳性慢性乙型肝炎
血清HBsAg、HBeAg、HBV-DNA阳性,抗-HBe阴性,血清ALT持续或反复升高,或肝组织学检查有肝炎病变。
3.2.2 HBeAg阴性慢性乙型肝炎
血清HBsAg、HBV-DNA阳性,HBeAg持续阴性,抗-HBe阳性或阴性,血清ALT持续或反复异常,或肝组织学检查有肝炎病变。
3.2.3 代偿期乙肝肝硬化
指早期肝硬化,一般属于 Child-Pugh A 级,可有乏力、食欲减退或腹胀症状,ALT 和 AST 可异常,但无明显肝衰竭表现,可有门静脉高压征,如脾功能亢进及轻度食管胃底静脉曲张,但无食管胃底静脉曲张破裂出血、无腹水和肝性脑病等。
3.2.4 失代偿期乙肝肝硬化
指中、晚期肝硬化,一般属于Child-pugh B、C级,患者已发生食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病、腹水等严重并发症,多存在明显肝衰竭表现,如血清白蛋白<35g/L,胆红素>35umol/L,ALT和AST不同程度升高,凝血酶原活动度多降低(失代偿期<60%)。
3.2.5 原发性肝癌
(1)非侵入性诊断标准:
1.影像学标准:两种影像学检查均显示有>2cm的肝癌特征性占位性病变。
2. 影像学结合AFP标准 一种影像学检查显示有>2cm的肝癌特征性占位性病变,同时伴有AFP≥400ug/L(排除妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤、活动性肝炎及转移性肝癌)。
(2)组织学诊断标准:
肝组织学检查证实原发性肝癌。对影像学尚不确定诊断的≤2cm的肝内结节应通过穿刺活检以证实原发性肝癌的组织学特征。
3.2.6 肝硬化患者Child-pugh分级标准【1】
3.3 排除标准
(1)合并感染甲型肝炎病毒(HAV)、丙型病毒性肝炎(HCV)、丁型病毒性肝炎(HDV)、戊型病毒性肝炎(HEV)及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。
(2)合并酒精性肝病、药物性肝病及其他自身免疫性肝病。对于原发性肝癌患者还应除外黄曲霉毒素、饮用水污染、化学物质如亚硝胺类、偶氮芥类、有机氯农药以及遗传因素、寄生虫等可疑致癌因素。
(3)在服用核苷类似物治疗6个月前未应用胸腺肽、干扰素、抗纤维化药物及其他降酶药物干扰基线检测结果的。
3.4 治疗方法
所有患者入院后均给予系统保肝、对症治疗,其中70例乙肝肝硬化患者配合核苷类似物抗病毒治疗(恩替卡韦28例、拉米夫定42例)。
3.5 观察指标
(1)基线水平测定HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量的部分,计算各感染阶段HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量的均值±标准差(x ±s)。
(2)对于进行HBV基因型检测的部分观察每种基因型所占比例及相关指标差异。
(3)对于70例服用核苷类似物抗病毒治疗的乙肝肝硬化患者观察应用核苷类似物治疗48周内临床疗效。
3.6 分析方法
(1)按HBV感染不同阶段分为慢性乙型肝炎组、代偿期肝硬化组、失代偿期肝硬化组及原发性肝癌组,分别于基线水平分析每组HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量三者之间的相关性;观察随着慢性乙肝进入肝硬化、原发性肝癌阶段后HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量三者变化趋势。
(2)分析每种乙肝基因型在HBV感染患者中所占比例以及乙肝基因型在慢性HBV感染不同阶段分布特点,比较B、C基因型HBsAg定量、HBeAg定量、HBV-DNA定量均值及相关生化学指标。
(3)将乙肝肝硬化患者分为恩替卡韦与拉米夫定治疗组,比较两治疗组4周、12周、24周、48周临床治疗疗效。
(4)将乙肝肝硬化患者分别按基线HBV-DNA水平及Child-Pugh级别分组,比较不同组别24、48周临床治疗疗效。
3.7 实验试剂及仪器
(1) 乙肝表面抗原定量试剂:乙肝表面抗原定量检测试剂盒,应用化学发光微粒子免疫检测技术(CMIA)定量检测人血清和血浆中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂产地:雅培贸易(上海)有限公司检测仪器:Architect i system(2) 乙肝e抗原定量试剂:乙型肝炎病毒 e 抗原测定试剂盒,应用化学发光微粒子免疫检测技术(CMIA)定性检测人血清和血浆中乙型肝炎 e 抗原(HBeAg)试剂产地:雅培贸易(上海)有限公司检测仪器:Architect i system(3) HBV-DNA定量检测试剂:核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)试剂产地:雅培贸易(上海)有限公司检测仪器:I LC 1.2/2.0,Rotor-Gene Q II ABI7000/7300/7500,LC480(96 well),iCycler,Option,Line-Gene(4) 乙肝基因分型检测方法:PCR 荧光法仪器:ABI7500 全自动荧光实时定量 PCR 仪(5) 肝功能检测方法:连续监测法检测仪器:ADVIA 2400 HITACHI 7180
3.8 统计处理
采用 SPSS 18.0软件包进行数据处理,计量资料采用(x ±s)表示,统计结果应用t检验,组间率对比用χ2检验,P<0.05时存在统计学意义,P<0.01统计学意义显着。采用GraphPad Prism 5软件包及Excel进行图片处理。
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